cha藥物的雜質檢查課件

1、2022/8/16第三章 藥物的雜質檢查 3.1 概述 3.2 一般雜質的檢查方法3.3 特殊雜質的檢查方法第1頁，共78頁。2022/8/16概 述3.1 概述 檢查有效性：以動物實驗為基礎，最終以臨床療效來評價；安全性：熱原檢查、毒性試驗、刺激性試驗、過敏試驗、升壓或降壓物質檢查等。純度要求：對各類雜質的檢查；制劑通則：含量均勻性，溶出度、釋放度、裝量差異、生物利用度的均一性；第2頁，共78頁。2022/8/16一、藥物的純度與要求藥物的純度 指藥物純凈程度，反映了藥物質量的優(yōu)劣。概 述含量測定雜質檢查理化常數外觀性狀結構藥物純度藥物純度從用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性等方面考慮；考慮雜質的

2、生理作用； 藥物合格不合格化學試劑不能代替藥品！第3頁，共78頁。2022/8/16藥物的雜質 指藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人體健康有害的物質。 藥物的純度與要求例：乙酰水楊酸 水楊酸 第4頁，共78頁。2022/8/16二、雜質的來源在貯藏過程中引入合成過程中，原料不純；有一部分原料沒有反應完全；反應中間產物和副產物在精制時沒有除凈；在制成制劑的過程中，產生新的雜質；制劑生產過程中所用溶劑、試劑的殘留；與生產器皿接觸引入雜質； 受外界條件的影響，發(fā)生水解、氧化、分解、聚合、異構化、發(fā)霉等變化。 由生產過程中引入概 述第5頁，共78頁。2022/8/16例：乙酰水楊

3、酸 水楊酸 二羥乙基過氧化物（有毒） 麻醉乙醚例：例：差向四環(huán)素（毒性高、活性低） 四環(huán)素雜質的來源與種類第6頁，共78頁。2022/8/16按理化性質分類無機雜質、有機雜質、殘留溶劑按毒性分類普通雜質（信號雜質）毒性雜質（有害雜質）按來源分類一般雜質、特殊雜質一般雜質 是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產和貯藏過程中容易引入的雜質。特殊雜質 是指在特定藥物的生產和貯藏過程中引入的雜質。 雜質的來源與種類三、雜質的種類第7頁，共78頁。2022/8/16四、雜質的限量雜質限量 是指藥物中所含雜質的最大允許量。通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。雜質的量 雜質限量合格不合格雜質的量

4、概 述第8頁，共78頁。2022/8/16雜質限量檢查方法分為：標準對照法、靈敏度法、比較法 標準對照法雜質對照品或純品溶液供試品溶液在相同條件下處理 平行操作 比較結果 顏色比色渾濁比濁色斑比較色斑特點：不需知道雜質的準確含量；必須有對照品或是純品。 雜質的限量第9頁，共78頁。2022/8/16雜質限量檢查方法分為：標準對照法、靈敏度法、比較法 標準對照法例1：中國藥典規(guī)定檢查砷鹽時，應取標準砷溶液2.0ml（每1ml相當于1ug的As）制備的標準砷斑，今依法檢查溴化鈉中的砷鹽，規(guī)定含砷量不得超過0.0004% ，問應取供試品多少克？ 雜質的限量第10頁，共78頁。2022/8/16雜質限

5、量檢查方法分為：標準對照法、靈敏度法、比較法 標準對照法例2：檢查對乙酰氨基酚中的氯化物，取對乙酰氨基酚2.0g，加水100ml，加熱溶解，冷卻，濾過，取濾液25ml，依法檢查氯化物，所產生的渾濁與標準氯化鈉溶液5.0ml（每1ml相當于10ug的Cl-）制成的對照液比較，不得更濃，問氯化物的限量？雜質的限量第11頁，共78頁。2022/8/16雜質限量檢查方法分為：標準對照法、靈敏度法、比較法 靈敏度法供試品溶液特點：以該檢測條件下反應的靈敏度來控制雜質限量不需對照品 試劑無正反應合格 有正反應不合格 雜質的限量第12頁，共78頁。2022/8/16雜質限量檢查方法分為：標準對照法、靈敏度法

6、、比較法 比較法供試品 測定特定的待檢雜質的參數 如：測定A、pH值等 結果規(guī)定的限量 特點：不需要對照品 雜質的限量第13頁，共78頁。2022/8/16一般雜質的檢查方法3.2 一般雜質的檢查方法氯化物檢查法硫酸鹽檢查法重金屬檢查法一般雜質的檢查方法溶液顏色檢查法鐵鹽檢查法砷鹽檢查法易炭化物檢查法溶液澄清度檢查法干燥失重測定法殘留溶劑測定法熾灼殘渣檢查法水分測定法第14頁，共78頁。2022/8/16（一）原理一、氯化物檢查法（二）操作（標準對照法）供試品溶液標準NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml

7、50ml 暗處放置5min 暗處放置5min一般雜質的檢查方法第15頁，共78頁。2022/8/16供試品溶液標準NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗處放置5min 暗處放置5min（三）注意事項及討論1. 條件 納氏比色管應配對 ；氯化物檢查法第16頁，共78頁。2022/8/16供試品溶液標準NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗處放置5min 暗處放置5min（三）注意事項及討論1.

8、條件 納氏比色管應配對 ；酸性條件稀硝酸；可以加速氯化銀的生成；產生較好的乳濁；可避免產生碳酸銀、氧化銀、磷酸銀沉淀。氯化物檢查法第17頁，共78頁。2022/8/16供試品溶液標準NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗處放置5min 暗處放置5min（三）注意事項及討論1. 條件 納氏比色管應配對 ；酸性條件稀硝酸；稀釋到40ml后加硝酸銀試液；使生成白色渾濁而不是白色沉淀 氯化物檢查法第18頁，共78頁。2022/8/16供試品溶液標準NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310ml

9、H2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗處放置5min 暗處放置5min（三）注意事項及討論1. 條件 納氏比色管應配對 ；酸性條件稀硝酸；稀釋到40ml后加硝酸銀試液；暗處放置 ；比濁方法：黑色背景，自上而下的觀察 ；平行操作。 氯化物檢查法第19頁，共78頁。2022/8/16反復過濾至澄清H2O（三）注意事項及討論2. 供試品溶液不澄清時的處理方法過濾3. 供試品溶液有色時的處理方法內消色法/外消色法稀HNO3H2OAgNO31ml 暗處放置10min標準NaCl溶液AgNO31mlH2O無Cl- 暗處放置5min 暗處放置5min50ml5

10、0ml內消色法2倍量的供試品氯化物檢查法第20頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論3. 供試品溶液有色時的處理方法內消色法/外消色法外消色法 向供試品溶液中加入某種試劑，使供試品溶液的顏色褪去或與對照品溶液顏色相同后再依法檢查。 4. 供試品溶液顯堿性時的處理方法先中和為中性后再檢查；避免硝酸銀在堿性條件下生成氫氧化銀和氧化銀。5. 預先排除干擾物。氯化物檢查法第21頁，共78頁。2022/8/16（一）原理二、硫酸鹽檢查法（二）操作（標準對照法）供試品溶液標準K2SO4溶液H2OH2O25% BaCl2 5ml25% BaCl2 5mlH2OH2O50ml50ml放置10mi

11、n放置10min40ml40ml稀HCl 2ml稀HCl 2ml一般雜質的檢查方法第22頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論1. 條件 納氏比色管應配對 ；酸性條件稀鹽酸；比濁方法：黑色背景，自上而下的觀察 ；平行操作。 2. 供試品溶液不澄清時的處理方法過濾3. 供試品溶液有色時的處理方法內消色法/外消色法硫酸鹽檢查法第23頁，共78頁。2022/8/16過硫酸銨 50mg過硫酸銨 50mg（一）原理三、鐵鹽檢查法（二）操作（標準對照法）供試品溶液標準鐵溶液H2OH2O30% 硫氰酸銨 3ml30% 硫氰酸銨 3mlH2OH2O50ml50ml25ml25ml稀HCl 4ml

12、稀HCl 4ml35ml35ml一般雜質的檢查方法第24頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論供試品溶液標準鐵溶液H2OH2O25ml25ml過硫酸銨 50mg過硫酸銨 50mg稀HCl 4ml稀HCl 4ml35ml35ml30% 硫氰酸銨 3ml30% 硫氰酸銨 3mlH2OH2O50ml50ml納氏比色管應配對；酸性條件稀鹽酸加過硫酸銨氧化劑： 加過量硫氰酸銨 比色方法：白色的背景上，自上而下的觀察。稀鹽酸可以防止鐵鹽水解氧化供試品中 Fe2+生成Fe3+ ；防止光線使硫氰酸鐵還原或分解退色。增加生成的配合物的穩(wěn)定性，提高靈敏度；消除Cl-、PO43-、SO42-等離子與鐵

13、鹽形成配合物的干擾。鐵鹽檢查法第25頁，共78頁。2022/8/16四、重金屬檢查法重金屬 指在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質。Pb第一法第四法重金屬含量低的藥物(25g)第三法使用范圍微孔濾膜法硫化鈉法溶于堿性水溶液而難于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物方法硫代乙酰胺法溶于水、稀酸、乙醇的藥物熾灼后的硫代乙酰胺法含芳環(huán)、雜環(huán)以及難溶于水、乙醇的藥物第二法一般雜質的檢查方法第26頁，共78頁。2022/8/16第一法 硫代乙酰胺法黃色至棕黑色混懸液（一）原理（二）操作（標準對照法）供試品溶液標準鉛溶液H2O醋酸鹽buffer（pH3.5）2mlH2O醋酸鹽buffer（pH

14、3.5）2ml25ml25ml硫代乙酰胺 2ml搖勻放置2min硫代乙酰胺 2ml搖勻放置2min重金屬檢查法第27頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論1. 條件 用Pb(NO3)2先配制貯備液，并加入硝酸防止鉛鹽的水解，臨用前稀釋；醋酸鹽緩沖液 (pH 3.5) 硫代乙酰胺試液 ；平行操作； 比色方法：白色背景，自上而下的觀察 ；重金屬檢查法硫代乙酰胺法第28頁，共78頁。2022/8/162. 供試品溶液有色時的處理方法外消色法/內消色法外消色法用稀焦糖溶液調節(jié)對照管顏色與樣品管顏色一致。 用對測定不干擾的指示劑調節(jié)對照管顏色與樣品管顏色一致。內消色法重金屬檢查法硫代乙酰胺

15、法第29頁，共78頁。2022/8/163. 干擾物的排除方法高鐵鹽（Fe3+）供試品中微量高價Fe3+存在 供試品為鐵鹽（大量的Fe3+）藥物本身能生成不溶性硫化物加入掩蔽劑 重金屬檢查法硫代乙酰胺法第30頁，共78頁。2022/8/16第二法 熾灼后的硫代乙酰胺法 （一）原理 供試品在500-600熾灼破壞后，加HNO3加熱處理，再按第一法進行檢查。 （二）操作重金屬檢查法第31頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論HNO3處理后必須蒸干除盡氧化氮；熾灼溫度：500600；含鈉鹽或氟的有機藥物應用鉑坩堝、石英坩堝或硬質玻璃蒸發(fā)皿。重金屬檢查法熾灼后硫代乙酰胺法第32頁，共78

16、頁。2022/8/16第三法 硫化鈉法 （一）原理 （二）操作（標準對照法，比色）（三）注意事項及討論堿性條件：NaOH顯色劑：Na2S 重金屬檢查法黃色至棕黑色混懸液第33頁，共78頁。2022/8/16第四法 微孔濾膜法 （一）原理：同第一法 （二）操作CABFE濾器下部濾器上蓋連接頭輔助濾板D濾膜(直徑10mm, 孔徑3.0m)墊圈(外徑10mm,內徑6mm)重金屬檢查法微孔濾膜過濾法檢查重金屬裝置第34頁，共78頁。2022/8/16五、砷鹽檢查法古蔡氏法白田道夫法二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）奇列氏法（次磷酸法）一般雜質的檢查方法第35頁，共78頁。2022/8/16（一

17、）原理 砷()的反應： As3+ + 3Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3（黃色） AsH3 + 2As(HgBr)3 3AsH(HgBr)2 （棕色） AsH3 + As(HgBr)3 3HBr + As2Hg3（黑色） 砷鹽檢查法古蔡氏法第36頁，共78頁。2022/8/16（二）操作8cm有孔玻璃旋塞導氣管AsH3發(fā)生瓶溴化汞試紙醋酸鉛棉花(60mg)HCl Zn 粒碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液生成砷斑吸收硫化氫氣體古蔡氏法檢砷裝置砷鹽檢查法古蔡氏

18、法標準砷斑 供試品砷斑第37頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論 各試劑的作用HCl：提供酸性環(huán)境，反應物；加KI和酸性SnCl2的作用：做還原劑，還原砷()為砷()砷鹽檢查法古蔡氏法 As3+ + 3Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O第38頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論 各試劑的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI被氧化生成的I2又可以被SnCl2還原為I I與反應中產生的Zn 2能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成AsH3的反應不斷進行。砷鹽檢查法古蔡氏法 As3+ + 3

19、Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O第39頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論 各試劑的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI和酸性SnCl2可抑制SbH3生成 銻斑，影響結果觀察SnCl2可以與Zn生成鋅錫齊，起去極化的作用，使氫氣均勻連續(xù)發(fā)生 砷鹽檢查法古蔡氏法第40頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論 各試劑的作用醋酸鉛棉花的作用 ：吸收H2S，排除硫化物干擾 砷鹽檢查法古蔡氏法第41頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論2. 反應的最佳條件 加Zn粒：能通過1號

20、篩（850-1000m）；約2g鹽酸酸性下反應溫度2540，45min標準砷溶液2ml（1g/ml）砷鹽檢查法古蔡氏法3. 供試品砷斑和標準砷斑應平行操作，并立即觀察； 供試品砷斑與標準砷斑比較，顏色不得更深。第42頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論4. 干擾物的排除 如供試品為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等應在檢查前加入HNO3處理，氧化成硫酸鹽，再做檢查；供試品若為鐵鹽，需先加酸性SnCl2試液，將Fe3+還原為Fe2+ 砷鹽檢查法古蔡氏法第43頁，共78頁。2022/8/16（三）注意事項及討論4. 干擾物的排除 供試品為共價鍵結合的砷化物，要先進行有機破壞，否則檢出結

21、果偏低或難以檢出。排除方法：酸破壞法/堿破壞法酸破壞法：+稀硫酸與溴化鉀，如：葡萄糖中砷鹽的檢查堿破壞法：+氫氧化鈣，500-600灼燒，如：中藥麻仁丸中砷 鹽的檢查 +無水碳酸鈉堿融，如：苯甲酸鈉中砷鹽的檢查砷鹽檢查法古蔡氏法第44頁，共78頁。2022/8/16（四）古蔡氏法的特點優(yōu)點：靈敏度高。缺點：不適于含銻的藥物。砷鹽檢查法古蔡氏法第45頁，共78頁。2022/8/16五、砷鹽檢查法白田道夫法一般雜質的檢查方法（一）原理棕褐色的膠態(tài)砷 （二）特點優(yōu)點：不受銻干擾 。缺點：靈敏度低 。第46頁，共78頁。2022/8/16五、砷鹽檢查法 二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法） 一般

22、雜質的檢查方法（一）原理紅色的膠態(tài)銀 紅色的膠態(tài)銀 第47頁，共78頁。2022/8/16（二）操作Ag-DDC法檢砷裝置砷鹽檢查法Ag-DDC法AsH3發(fā)生瓶醋酸鉛棉花(60mg)HCl Zn 粒碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液吸收硫化氫氣體Ag-DDC第48頁，共78頁。2022/8/16（三） Ag-DDC法的特點優(yōu)點：靈敏度高； 可限量也可定量； 銻干擾小缺點：吡啶有惡臭，中國藥典改為Ag-DDC的三乙胺-氯仿（1.8：98.2）溶液代替，靈敏度略低。 砷鹽檢查法Ag-DDC法第49頁，共78頁。2022/8/16五、砷鹽檢查法奇列氏法（次磷酸法） 一般雜質的檢查方法（一）原理（二）特點優(yōu)點

23、：不受S2-、SO32-、Sb的干擾，適用于硫化物、亞硫酸鹽以及含銻藥物砷鹽的檢查 缺點：靈敏度較古蔡氏法低 。第50頁，共78頁。2022/8/16六、溶液顏色檢查法一般雜質的檢查方法是控制藥物中有色雜質量的方法 中國藥典收載有三種方法： 第一法 目視比色法，即與標準比色液比較的方法。第二法 分光光度法。第三法 色差計法 第51頁，共78頁。2022/8/16七、易炭化物檢查法一般雜質的檢查方法易炭化物指藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質。方法：H2SO4炭化后與對照液比較。 對照液：（1）“溶液顏色檢查”項下的標準比色液；（2）由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液，比色用硫酸銅液

24、按規(guī)定方法配成的對照液；（3）高錳酸鉀液。 第52頁，共78頁。2022/8/16八、溶液澄清度檢查法 一般雜質的檢查方法澄清度檢查是檢查藥品溶液的混濁程度。它可以反映藥物溶液中微量不溶性雜質的存在。 方法：與濁度標準液比濁。濁度標準液制備原理： 甲醛腙（白色混濁） 肼 第53頁，共78頁。2022/8/16溶液澄清度檢查法 澄清指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑或未超過0.5號濁度標準液。 第54頁，共78頁。2022/8/16九、熾灼殘渣檢查法一般雜質的檢查方法熾灼殘渣 指有機藥物經炭化或揮發(fā)性無機藥物加熱分解后，高溫熾灼，所產生的非揮發(fā)性無機雜質的硫酸鹽。0.1%0.2%12 mg第55

25、頁，共78頁。2022/8/16十、干燥失重測定法一般雜質的檢查方法干燥失重 藥品在規(guī)定的條件下，經干燥后所減失的量。 用于檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性物質。 恒重 供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下。第56頁，共78頁。2022/8/16干燥失重測定法分類適用范圍備注常溫常壓干燥受熱較穩(wěn)定的藥物 105，一般2-4h，干燥至恒重 干燥劑干燥適用于受熱易分解或揮發(fā)的供試品 常用干燥劑：硅膠、五氧化二磷、濃硫酸等 減壓干燥法 適用于熔點低，受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品 熱分析法研究其受熱過程所發(fā)生的晶型轉變、熔融、升華、吸附等物理變化和脫水、熱分解、氧化還原等化學變化，對物

26、質進行物理常數（如熔點和沸點）的確定、鑒別和純度檢查的方法 包括：熱重分析法、差熱分析法等 干燥失重測定方法： 第57頁，共78頁。2022/8/16十一、水分測定法一般雜質的檢查方法2005版中國藥典二部收載兩種方法：費休氏法、甲苯法 （一）費休氏法A供試品消耗的費休試液的體積B空白消耗的費休試液的體積F每1ml費休試劑相當于水的重量(mg)W供試品的重量第58頁，共78頁。2022/8/16水分測定法費休氏法費休試液的配制 稱取碘(置硫酸干燥器內48小時以上)110g，置干燥的具塞燒瓶中，加無水吡啶160ml,注意冷卻，振搖至碘全部溶解后，加無水甲醇300ml，稱定重量，將燒瓶置冰浴中冷卻

27、，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加無水甲醇使成1000ml，密塞，搖勻，在暗處放置24小時。本液應遮光，密封，置陰涼干燥處保存。臨用前應標定濃度 第59頁，共78頁。2022/8/16（二）甲苯法適用于含揮發(fā)性成分的藥品 A500ml的短頸圓底燒瓶；B水分測定管；C直形冷凝管，外管長40cm。 甲苯法裝置水分測定法第60頁，共78頁。2022/8/16十二、殘留溶劑測定法一般雜質的檢查方法殘留溶劑 指在合成原料藥、輔料或制劑生產的過程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機溶劑。第61頁，共78頁。2022/8/163.3 特殊雜質的檢查方法特殊雜質 是指在特定藥物的生產和貯藏過程中引入

28、的雜質。 原理：利用藥品和雜質在理化性質及生理作用的差異 方法：色譜分析法 光譜分析法 化學分析法 物理分析法 生物學分析法 特殊雜質的檢查方法第62頁，共78頁。2022/8/16一、色譜分析法包括：薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法 （一）薄層色譜法（TLC法）1、雜質對照法 適用于已知雜質并能夠得到雜質對照品的情況。例：枸櫞酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的檢查 N-甲基哌嗪供試品(50mg/ml)10lN-甲基哌嗪對照品(50mg/ml)10l特殊雜質的檢查方法第63頁，共78頁。2022/8/162、供試品溶液自身稀釋對照法適用于雜質的結構不能確定或無雜質對照品的情況 例：氫化可的松中“其

29、他甾體”的檢查 供試品液：3mg/ml對照液：60g/ml（供試液稀釋50倍）判斷： 供試品溶液的雜質斑點數3個； 顏色對照液主斑點顏色。 薄層色譜法第64頁，共78頁。2022/8/163、雜質對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法并用4、對照藥物法當無合適的雜質對照品，或者是供試品顯示的雜質斑點顏色和主成分顏色有差異，難以判斷限量時，可以用含待檢測雜質符合限度要求的與供試品相同的藥物作為對照品。薄層色譜法第65頁，共78頁。2022/8/16內標法加校正因子法外標法加校正因子的主成分自身對照法不加校正因子的主成分自身對照法 峰面積歸一化法（二）高效液相色譜法（HPLC法）HPLC法檢查雜質的方

30、法有五種：特殊雜質的檢查方法第66頁，共78頁。2022/8/161、內標法加校正因子法 適用于有雜質對照品時能夠測定雜質的校正因子雜質的含量測定。高效液相色譜法對照品+內標進樣，求校正因子 供試品+內標進樣，求Cx 內標物濃度 雜質對照品濃度 供試品中雜質的峰面積內標物的峰面積雜質對照品的峰面積 供試品中雜質濃度 第67頁，共78頁。2022/8/162、外標測定法 適用于有對照品的雜質，而且進樣量能夠精確控制的情況。 3、加校正因子的主成分自身對照測定法高效液相色譜法例：紅霉素中紅霉素B、C的檢查： 對照品液(0.2mg/ml)進樣20l，調靈敏度，使主峰達滿量程的20%； 供試品液(4m

31、g/ml)進樣20l，紅霉素B、C校正后的A，均不得大于對照品液的主峰面積；其它單個雜質峰的峰面積之和不得大于對照品液主峰面積（5.0%）。對照品液：供試品的稀釋液 第68頁，共78頁。2022/8/164、不加校正因子的主成分自身對照法 該方法適用于沒有雜質對照品的情況。高效液相色譜法對照品液：供試品的稀釋液 例:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑的檢查： 對照品液(0.01mg/ml)進樣20l，調靈敏度，使主峰達10%30% 樣品液(0.14mg/ml)進樣20l，雜質峰的峰面積之和不得大于對照品液主峰面積的1.0%。 第69頁，共78頁。2022/8/165、面積歸一化法 適用于粗略測量供試品中雜質的含量。高效液相色譜法 例：利巴韋林中有關雜質的檢查： 對照品液(5g/ml)進樣10l,調靈敏度，使主峰達滿量程的20%25% 樣品液(0.4mg/ml)進樣10l, 各雜質峰的面積之和不得超過總峰面積