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1、選修 1生物技術實踐學問歸納圖解果 酒 和 果 醋 的 制 作留意:留意:原理: 主要菌種是酵母菌; 要 先 清 洗 后 除 枝 梗留意:酵母菌是異養(yǎng)兼性原理: 主要菌種是醋酸桿菌異養(yǎng)需氧型 防止除去枝梗時引厭氧微生物 C6H12O6C 2H5OHC02 溫度: 20 左右最適合酵起葡萄破舊,增加被榨汁機要清洗潔凈,雜菌污染的機會,同并晾干 防雜菌污染 當氧氣糖源均充分時,糖醋酸時,防止葡萄汁流失 防止將果核壓破 因當氧氣充分、缺少糖源時,乙醇乙醛醋酸母菌繁衍,一般掌握不能反復沖洗防止果核含有多種有害葡溫度: 30 35;在 18 25;選擇新奇的葡萄菌種流失 萄酒風味的物質 選擇葡萄沖洗榨汁

2、酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵果酒果醋留意:留意: 需適時通入空氣發(fā)酵裝置要清洗潔凈,并用體積分數為70的酒精消毒發(fā)酵瓶裝入葡萄汁后留有l(wèi)/3 的空間 目的是先讓酵母菌進行有氧呼吸快速繁衍,耗盡氧氣后再進行酒精發(fā)酵;其次,防止發(fā)酵過程中產生的CO2造成發(fā)酵液的溢出 如用帶蓋的瓶子制葡萄酒,每隔 12 h 左右將瓶蓋擰松一次高考警示 :由于醋酸菌和乳酸菌屬于原 核生物,所以在利用者兩類 微生物時,其環(huán)境中肯定不 能加入抗生素;酵母菌在養(yǎng)分和氧氣充分時 進行出芽生殖留意不是打開瓶蓋,防雜菌污染,之后再將瓶蓋擰緊目的 :排出余外的氣體放炸裂 裝入葡萄汁封閉充氣口無氧環(huán)境和放雜菌污染 發(fā)酵過程中,隨著酒精度數的提高

3、,葡萄酒出現深紅色因紅葡萄皮的色素也進入發(fā)酵液 酒精的鑒定 :與酸性重鉻酸鉀呈灰綠色 對比組 2mL 白酒 3mL/L 的 H2SO43 滴混勻試驗組 2mL 發(fā)酵液重鉻酸鉀 3 滴觀看試管甲 2mL 發(fā)酵前液3mL/L 的 H2SO43 滴混勻試管乙 2mL 發(fā)酵后液重鉻酸鉀 3 滴觀看1 微生物的試驗室培育(一)培育基的基本學問 1 培育基的養(yǎng)分成分養(yǎng)分物質定義作用主要來源及所涉及的微生物碳源凡是能供應微生物所需碳元構成生物細胞、生物體及細胞代謝產物,無機化合物: C02、NaHC0 3 等 自養(yǎng)生物 素的物質有些能為異養(yǎng)生物供應能源有機化合物:糖類、脂質、花生粉餅、石油等 異養(yǎng)生物 氮源

4、凡是能供應微生物所需氮元合成蛋白質、核酸及含氮的代謝產物,也無機化合物: N2、 NH3、銨鹽、硝酸鹽,自養(yǎng)生物素的物質可為異養(yǎng)微生物供應能源有機化合物:尿素、牛肉膏、蛋白胨等,異養(yǎng)生物水分生物體內含量最高的組成成良好的溶劑、細胞生活及生化反應的介質、培育基、大氣、代謝產物分,分為結合水和自由水參加物質運輸及參加生化反應的反應物無機鹽為微生物供應除C、H、0 以外細胞組成成分,生命調劑物質,自養(yǎng)菌的培育基、大氣等環(huán)境的各種元素能源或其他養(yǎng)分來源,酶的激活劑生長因子微生物正常生長繁衍, 必不行可作為酶與核酸等的組成成分維生素、氨基酸、堿基等少的微量有機物自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的養(yǎng)分物質不同高

5、考警示鐘1 自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來自含碳、含氮的無機物,而異養(yǎng)微生物需要的碳源、氮源來自含碳、含氮的有機物,因此可依據培 養(yǎng)基中養(yǎng)分物質判定微生物的代謝類型;2 含氮無機物不但能給自養(yǎng)微生物供應氮源,也能作為能源物質,供應能量,如NH3 既作為硝化細菌的氮源也作為能源;2培育基的配制原就 1 目的明確;要依據微生物的種類、培育目的等選擇原料、配制培育基; 2 養(yǎng)分要和諧;各種養(yǎng)分物質要保證適當的濃度和比例;養(yǎng)分物質比例過低,不能滿意微生物生長;濃度過高就會抑制微生物的正常生長;營養(yǎng)物質的濃度比 如 C/N仍會直接影響某些微生物的代謝產物,如谷氨酸生產,C/N=4 1 時,菌體大量繁衍,谷

6、氨酸產量少;而C/N=31 時,菌體繁衍受抑制,但谷氨酸合成量大; 3pH要適當;不同微生物生長所需pH 不同;如細菌pH保持在 6.5 7.5 之間;放線菌保持在7.5 8.5 之間;真菌應保持在5.0 6.0 之間;3培育基的分類及作用:培育基種類許多,作用也不同;依據不同的分類標準,可將培育基分為不同種類;劃分標準培育基種類特點用途及實例物理性質液體培育基不加凝固劑工業(yè)生產半固體培育基觀看微生物的運動、分類鑒定、保藏菌種加凝固劑,如:瓊脂固體培育基微生物分別、鑒定、活菌計數、化學成分自然培育基含化學成分不明確的自然物質工業(yè)生產合成培育基培育基成分明確 用化學成分已知的化學物質配成 分類、

7、鑒定用途選擇培育基培育基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物培育、分別出特定微生物 如:培育酵母菌或霉菌,可在培育基中加入青霉素;培育金黃色葡萄球菌,的生長,促進所需要的微生物的生長可在培育基中加入高濃度食鹽 鑒別培育基依據微生物的代謝特點,在培育基中加入某種指示劑鑒別不同種類的微生物,如可用伊紅一美藍培育基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌 如有,茵落或化學藥品呈深紫色,并帶有金屬光澤 2 說明 :病毒為非細胞結構的生物體,專營活細胞寄生,目前不能利用人工培育基來培育,需接種在動植物組織中才能增殖;常用于培育病毒的是活雞胚;加入培育基中的凝固劑 如瓊脂 ,一般不能被微生物利用,只起到凝固

8、作用;選擇培育基一般只生長具有特定的微生物,鑒別培育基可以存在其他微生物,而且能鑒別特定的微生物;留意: 選擇培育基的選擇方法1在培育基中加入某種化學物質;例如,加入青霉素可以分別出酵母菌和霉菌;加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌;這里的加入是在主要養(yǎng)分成分完整的基礎上加入;2轉變培育基中的養(yǎng)分成分;例如缺乏氮源時可以分別出固氮微生物;石油作為惟一碳源時,可以分別出排除石油污染的微生物;3轉變微生物的培育條件;例如,將培育基放在高溫環(huán)境下培育,可以得到耐高溫的微生物;(二)滅菌技術1無菌技術的概念在微生物培育中,獲得純潔培育物的關鍵是防止外來雜菌入侵,其主要技術是無菌操作;無菌技術是指通過

9、肯定物理、化學的手段,防止試驗室培育物被外來微生物污染;無菌技術主要環(huán)繞如何防止雜菌污染綻開的;2消毒、滅菌的方法項目概念常用方法應用范疇消毒使用較為溫順的物理或化學方法,僅殺死巴氏消毒法:7075水中煮 30min 或在 80水中煮 15min 一些不耐高溫的物體如牛奶煮沸消毒法:在100水浴中煮沸56 min 一般物品物體表面或內部一部分對人體等有害的微化學藥劑消毒法:用乙醇、氯氣、漂白粉、KMnO 4 等藥劑來可用來對環(huán)境、雙手和衣物等消毒生物 不包括孢子和芽孢 殺死或抑制細菌生長或繁衍紫外線消毒法: 30W紫外燈照耀30min 接種室3 滅菌使用劇烈的理化因素殺死物體內外全部的灼燒滅菌

10、法:酒精燈火焰接種工具如接種環(huán)、接種針等干熱滅菌法:在160 170加熱 12h 如玻璃器皿 吸管、培育皿 和金屬用具微生物,包括芽孢和孢子高壓蒸汽滅菌:壓力為100 kPa ,溫度為 12l 的條件下,培育基及容器的滅菌維護 15 30 min 留意:無菌操作是微生物培育過程中,防止雜茵污染的關鍵步驟;消毒只能毀滅或抑制養(yǎng)分體的活動,而不能達到完全滅菌;酒精消毒用體積分數為70% 的酒精成效最好,因濃度過高,會使菌體表面蛋白凝固成一層愛護膜,乙醇分子不能進入其中;濃度過低,殺菌力減弱;而滅菌除殺死養(yǎng)分體外,仍必需殺死芽孢和孢子;滅菌消毒的原理,就是通過肯定理化手段,使病原菌蛋白質變性,失去生

11、命活性;(三)微生物的純化培育技術1常用細菌培育基蛋白胨培育基配制流程:留意:留意:留意: 據配方運算配制肯定體積培育基 時各成分的用量 溶化瓊脂時要掌握火力的大小并不加熱過程中部分水分蒸發(fā),待瓊脂 斷攪拌,以免培育基溢出或燒焦;完全溶化后應補加蒸餾水,以保持 溶液的濃度 留意: 分裝至試管時 培育基的高度 不要超過試管 高度的 1/5 可用高壓蒸汽滅菌法 用干熱滅菌法時溫度 不能超過 180 ,否就易引起報紙等燃燒 一般是培育基先滅菌再倒平板,也可先倒 平板 ,再滅菌 160 170 運算 稱量 溶化(調 PH)裝瓶 滅菌 倒平板留意:留意:留意:牛肉膏較粘稠,應玻棒挑取,在稱 由于不同微生

12、物相宜 倒平板時,燒杯口要通過酒精燈火焰滅菌;量紙上稱量 的 pH 不同, 因此在熔 平板冷凝后要將平板倒置,以確保拿放便利, 同時防止水分蒸發(fā),牛肉膏蛋白胨易吸潮,動作要快速 化后,必需用 NaOH 以利微生物生長,也可防止皿蓋上凝聚的水滴滴入培育基,影響或 HCl 來調劑 pH pH ;其次防止細菌透過皿底、皿蓋的縫隙,落在培育基上;倒平板時, 不能將培育基濺在皿底與皿蓋之間,以防止雜菌滋生,污染培育基4 2純化大腸桿菌 原理:在培育基上將細菌稀釋或分散成單個細胞,使其長成單個的菌落,這個菌落就是純化的細菌菌落;微生物接種方法:1平板劃線法:平板劃線法中細胞的分別和稀釋 過程發(fā)生在接種環(huán)在

13、固體平板表 面上的劃線和移動過程中;在劃 線的開頭部分,微生物往往連在 如 一起生長, 隨著線的延長, 菌數逐步削減, 最終可能形成純種的單個菌落;圖 2稀釋涂布平板法:10 倍系列稀釋操作劃線操作時留意:(1)用接種環(huán)取菌種之前、每次劃線之前和劃線終止都要進行灼燒滅菌,灼燒后要在酒精燈鄰近冷卻后再操作;第一次操作:殺死接種環(huán)上原有的微生物;每次劃線之前:殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種,使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端;劃線終止后:殺死接種環(huán)上殘存的菌種,防止細菌污染環(huán)境和感染操作者 (2)劃線時不要劃破培育基,假如采納分段劃線法操作從其次次操作應總在上一次劃線末端開頭,首尾區(qū)不能相

14、連;(3)操作必需始終在酒精燈火焰旁進行;5 涂布操作時留意:(1)配制系列梯度稀釋液時,所用的試管和移液管均需滅菌,必需用無菌水配制;(2)涂布器用 70% 的酒精消毒,余外酒精在燒杯中滴盡,沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰引燃;不要將過熱的涂布器放入盛有酒精的燒杯中,以免引燃其中的酒精;(3)配制系列梯度稀釋液和轉移菌液以及涂布過程等必需都在酒精燈火焰旁進行,移液管頭不能接觸任何物體;3菌種的儲存對于頻繁使用的菌種,可以采納暫時保藏的方法;對于需要長期儲存的菌種,可以采納甘油管藏的方法;留意: 菌種保藏的原理是:低溫、干燥和隔絕空氣,使微生物代謝才能和繁衍才能降低;不同菌種的保藏方法因不同

15、菌種而異;需氧型,必需低溫有氧,而厭氧型必需低溫無氧;腐生微生物可供應牛肉膏蛋白胨培育基,而寄生微生物需供應活體組織等非人工培育基,如病毒需供應活雞胚;(三)微生物的選擇與計數(以“ 土壤中分解尿素的細菌” 為例)選擇菌株菌落計數菌種的鑒定原就:人為供應有利于目對比:將不接種的培育基置于相同溫度恒溫箱培育 目的 : 證明培育基是否被雜菌污染方法:檢測培育基pH的菌生長的條件,統計茵落數目的方法:的變化判定1 顯微鏡直接計數法同時抑制或阻擋其原理:在細菌分解尿素原理:利用特定細菌計數板或血細胞計數板,在顯微鏡下運算肯定容積樣品中微生物數量他微生物的生長時,分泌的脲酶方法:用計數板計數;缺點:不能

16、區(qū)分死菌與活菌;培育基的成分:尿素作為將 尿 素 分 解 為2 間接計數法 活菌計數法 惟一的氮源 選擇培氨,氨使培育基原理:當樣品的稀釋度足夠高時,培育基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過養(yǎng)基、固體培育基 堿 性 增 高 , pH統計平板上的菌落數,就能估計出樣品中大約含有多少活菌;上升運算公式:每克樣品中的菌株數C V M,其中, C 代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數,V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積 mL ,M代表稀釋倍數;操作:設置重復組,增強試驗的說服力與精確性;同時為了保證結果精確,一般選擇菌落數在 6 30300的平板進行計數;菊 花 的 組 織 培

17、養(yǎng) 溫度: 18 22 光照 :在初期菊花的組織培育需光照,月季的花藥培育不需光照有利愈傷組織形成 ,二者后期均需要光照有利葉綠素形成和光合作用留意: 生長素和細胞分裂素的使用使用次序不同結果不同材料: 植物的種類、年齡、儲存時間 消毒緣由: 大部分來自田間, 帶有大量病毒、細菌 菊花莖段消毒:所用消毒劑為體積分數為 70 的酒精和質量分數為 0.1 的氯化 汞溶液,所使用的清洗液是無菌水;留意: 不同植株或同一植株的不同部位,所選用的消毒劑種類及濃度可能不同;先生長素,后細胞分裂素:有利于細胞分裂,但不分化 先細胞分裂素,后生長素:細胞既分裂也分化同時使用:分化頻率提高 留意: 培育一株完整

18、的試管苗,必需 先進行生芽培育,然后進行生根培 養(yǎng),假如次序顛倒,先誘導生根,就不好誘導生芽了;用量比例不同發(fā)育方向不同 高:利用根的分化,抑制芽的形成 低:利用芽的分化,抑制根的形成適中:促進愈傷組織的生長 培育制備 MS培育基外植體消毒接種愈傷組織胚狀體 或不定芽 試管苗移栽 煉苗 栽培成分: 無機物 大量元素、微量元素、有機脫分化再分化人工種子制備階段緣由: 因試管苗光合作用才能低,對方法: 始終在酒精脫分化階段只分裂;物:糖類 最常使用的糖是蔗糖,供應不良環(huán)境耐受力差,肯定要在燈火焰旁進再分化階段既有分裂也有分化能源和維護滲透壓、維生素、氨基酸、灼燒滅菌;保溫、保濕一段時間以增強適有機

19、添加劑(生長因子) 、激素 pH: 5.8 左右滅菌: 高壓蒸汽滅菌 留意:為降低工作量、 削減誤差, 可通過配制母 液,達到一次稱量藥品、多次使用;留意: 將菊花莖段應力插入培育基方法: 流水清洗根部,移栽至消過毒時不要倒插的蛭石或珍寶巖環(huán)境培育原理:細胞的全能性高度分化的植物細胞,仍具有發(fā)育為完整個體的潛能 1緣由: 體細胞攜帶有本物種全部的遺傳信息配制培育基時, 母液的應用應先搖勻,移 2實現的條件: 離體狀態(tài)和相宜條件水分、無機鹽、有機養(yǎng)分及激素、溫度、pH 等液用的移液管或量筒需清洗兩次,以免造3 細胞的全能性大小與細胞種類的關系:受精卵生殖細胞體細胞;植物細胞動物細胞;分化程度低的

20、細胞分化程度高的細胞 一般的,離體的植物細胞的全能性在肯定條件下可充分地表達出來;成誤差;離體的動物細胞的全能性受到限制,但其細胞核的全能性借助卵細胞的細胞質可表達出來;未離體的細胞的全能性不能表達,只是在機體的調控下進行定向分化;7 果 膠酶在果汁 生產中的 作用一、果膠酶的組成和作用:包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶等;果膠酶能分解果膠,瓦解植物的細胞壁及胞間層;其實質是果膠分 解成可溶性的半乳糖醛酸;留意: 果膠酶是分解果膠的一類酶的總稱,不是一種酶;植物、霉菌、酵母菌等細胞均能產生果膠酶,但通常動物細胞不產生果膠酶;在植物細胞工程中,應用纖維素酶和果膠酶來破壞細胞壁,獲得原生

21、質體;二、探究溫度對果膠酶活性的影響 1 試驗原理:果膠酶活性受溫度影響,處于最適溫度時,活性最高;低于或高于最適溫度,酶活性受到抑制;即果肉的出汁率、果汁的澄清度與果膠酶的活性大小成正比;2 設計思路:設置一系列梯度溫度,從中選出酶活性最高的溫度,然后再以該溫度為中心,縮小溫度梯度向兩個方面各設置梯度溫度,以進一步 確定最適溫度范疇;所選擇的溫度只能接近最適溫度,但不肯定就是最適溫度;3 試驗操作流程及留意事項設計試驗方案確定溫度梯度探討掌握溫度的方法和措施 確定水果的種類確定制備果汁的方法確定試驗用的水果量確定果膠酶的量探討測定果膠酶活性的方法制備水果泥留意:蘋果、橙子和葡萄等水果都可以作

22、為反應物,水果不用去皮;如用蘋果為原材料,一般可按每個中等大小的蘋果加水100200 mL 的比例進行攪拌,獲得稀的蘋果泥制備果膠酶水果泥、果膠酶分別水浴保溫緣由: 將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理,可以保證底物和酶在混合時的溫度是相同的,防止了果泥和果膠酶混合時影響混合物的溫度,從而影響果膠酶活性的問題動手試驗記錄試驗數據水果泥、果膠酶混合水浴保溫緣由:讓果泥和果膠酶有充分的反應時間過濾出果汁留意:過濾果汁時漏通過測定濾出的蘋果汁的體積大小來判定果膠酶活性的高低緣由:斗中應放置濾紙記錄果汁量果膠酶將果膠分解為小分子物質,小分子物質可以通過濾紙,因此蘋果汁的體積大小反應了果膠酶的催化分

23、解果膠的才能;在不同的溫度和pH 下,果膠酶的活性越大,蘋果汁的體積就越大轉變不同溫度后重復上面試驗也可同時進行不同溫度的試驗 自變量:溫度 應掌握為唯獨 對比:相互對比無關變量: 果泥量、 果膠酶的濃度和用量、水浴時間和混合物的記錄表格設計溫度 /10 20 30 40 50 60 pH 等全部其他條件 應掌握為相同 果汁量 /mL 得出結論留意: 每個探究試驗的設計,都要遵循試驗設計的一般原就,特殊是單因子變量掌握原就;8 每個探究試驗的設計思路先是大梯度差值查找最適范疇,再小梯度差值選出最適溫度、pH 或酶用量;假如隨酶濃度增加,果汁體積也增大,說明酶用量不足;當酶用量達肯定值時,再增加

24、酶用量,果汁體積不變,就說明這個值就是酶的最適用量;假如變量 溫度、 pH 、酶濃度 梯度無法滿意試驗,即顯現過高、過低等現象,就應準時調整試驗;血 紅 蛋 白 的 提 取 和 分 離一、試驗原理:蛋白質的物化理性質:外形、大小、電荷性質和多少、溶解度、吸附性質、親和力等千差萬別,由此提取和分別各種蛋白質;1凝膠色譜法(安排色譜法):(1)原 理:分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙,路程短,流淌快;分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內部,路程長,流淌慢;(2)凝膠材料:多孔性,多糖類化合物,如葡聚糖、瓊脂糖;(3)分別過程:混合物上柱洗脫大分子流淌快、小分子流淌慢收集大分子收集小分子洗脫:從色譜

25、柱上端不斷注入緩沖液,促使蛋白質分子的差速流淌;(4)作用:分別蛋白質,測定生物大分子分子量,蛋白質的脫鹽等;2緩沖溶液(1)原理:由弱酸和相應的強堿弱酸鹽組成(如 H2CO3NaHCO 3, NaH 2PO4/Na 2HPO 4 等),調劑酸和鹽的用量,可配制不同 pH 的緩沖液;(2)緩沖液作用:抵制外界酸、堿對溶液 pH 的干擾而保持 pH 穩(wěn)固;3凝膠電泳法:(1)原 理:不同蛋白質的帶電性質、電量、外形和大小不同,在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同,導致不同蛋白質在電場中的運動方向和運動速度不同;(2)分別方法:瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等;(3)分別過程:在肯定pH

26、下,使蛋白質基團帶上正電或負電;加入帶負電荷多的SDS,形成“ 蛋白質SDS 復合物” ,使蛋白質遷移速率僅取決于分子大??;9 二、試驗步驟及留意事項過程:采集血樣 加檸檬酸鈉防止血液凝固 低速短時離心防止白細胞沉淀 吸取血漿生理鹽水洗滌 防紅1. 樣品處理紅細胞細胞破裂 緩慢攪拌 防止紅細胞破裂釋 低速短時離心重復洗滌三次上清液中無黃色,說明紅細胞已洗滌潔凈;的洗滌目的:除去雜蛋白2. 粗分別血紅蛋白過程:加蒸餾水加40體積的甲苯磁力攪拌器攪拌目的:紅細胞破裂,釋放出血紅蛋白的釋放留意:加入蒸餾水后紅細胞液體積與原血液體積要相同;加入甲苯的目的是溶解細胞膜,有利于血紅蛋白的釋放和分別過程:離

27、心( 2022r/min )分別血紅目的:分別血紅蛋白和其他雜質結果第 1 層 最上層 :甲苯層 無色透亮 紅色透亮液體 第 2 層 中上層 :脂溶性物質的沉淀層 白色薄層固體 蛋白溶液第 3 層 中下層 :血紅蛋白的水溶液層第 4 層 最下層 :雜質的沉淀層 暗紅色 透 析原理:透析袋能使小分子自由進出,而將大分子保留在袋內過程:血紅蛋白溶液裝入透析袋將透析袋放入磷酸緩沖液中透析12h 目的:除去樣品中分子量較小的雜質或用于更換樣品的緩沖液3. 純化步驟:固定 色譜柱垂直固定在支架 裝填 將凝膠懸浮液一次性裝填 洗滌 目的:使凝膠裝填緊密 凝膠色譜柱 裝填要求:緊密、勻稱 否就,會在色譜柱內

28、形成無效的間隙,使本該進入凝膠內部的樣品分子從這些間隙中通過,攪亂洗脫液的流淌次序,影響分別的成效 裝填勝利檢測:凝膠是一種半透亮的介質,可在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈,檢查凝膠是否裝填得勻稱;加入大分子的有色物質,觀看色帶移動是否勻稱、狹窄、平整;如紋路或是氣泡,輕小扣打柱體以排除氣泡,否就重 新裝柱;4. 純度鑒定調劑緩沖液面打開色譜柱下端的流出口,使柱內凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊,關閉出口加入蛋白質樣品用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動加到色譜柱的頂端;加樣后,打開下端出口,使樣品滲入凝膠床內,等樣品完全滲 入凝膠層后,關閉出口調劑緩沖液面加入 20mmol/L 的磷酸緩沖液到適當高度洗 脫連接緩沖液洗脫瓶,打開下端出口,進行洗脫收集分裝蛋白質方法:待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時,用試管收集 檢測分別是否勝利:假如凝膠色譜柱裝填得很勝利、分別操作也正確的話,能清晰地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶勻稱、狹 10 窄、平整,隨著洗脫液緩慢流出;如紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬,說明分別的成效不好,這與凝膠色譜柱的裝填有關SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳選做 胡 蘿 卜 素 的 提 取一、胡蘿卜素基礎學問1原理:依據胡蘿卜素易溶于有機溶劑的特點,可實行有機溶劑萃取的方法來提取胡蘿卜素;即將粉碎、干燥的植物原料用有機溶劑浸泡,使

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