DB32-T 2827-2015大蒜脫毒快繁技術(shù)規(guī)程-（高清現(xiàn)行）

1、ICS 65.020.20B31備案號(hào)：47711-2015DB32江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T 2827-2015大蒜脫毒快繁技術(shù)規(guī)程Technical regulations for rapid propagation of virus-free garlic2015 - 10 - 20 發(fā)布2015 - 12 - 20 實(shí)施江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā) 布DB32/T 2827-2015I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫編制。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇徐淮地區(qū)徐州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇徐淮地區(qū)徐州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：楊峰、陸

2、信娟、樊繼德、張?jiān)蕜?、李勇。DB32/T 2827-2015 PAGE 3大蒜脫毒快繁技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大蒜脫毒快繁技術(shù)培養(yǎng)基、外植體、接種、培養(yǎng)、病毒檢測(cè)、馴化與培育。本標(biāo)準(zhǔn)適用于江蘇省大蒜莖尖脫毒快繁。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T 405-2000 脫毒大蒜種蒜（苗）病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程培養(yǎng)基初代培養(yǎng)基初代培養(yǎng)基誘導(dǎo)單個(gè)大蒜莖尖產(chǎn)生叢生芽（表1）。增殖培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基誘導(dǎo)試管叢生芽產(chǎn)生鱗莖（表1）。生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)試管叢生芽生根（

3、表1）。表1 大蒜初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基與生根培養(yǎng)基配制表培養(yǎng)基類型初代培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基B51/2 B51/2 B56-BA5mg/L2mg/L0.01 mg/LKT1mg/LIAA0.01mg/L0.1mg/LNAA0.1mg/L0.05 mg/L活性炭0.2%蔗糖20g/L50 g/L20g/L瓊脂6g/L6g/L6g/L外植體外植體選取選擇種性純正，生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)的大蒜品種作為脫毒外植體。外植體處理外植體取樣時(shí)間56月份為外植體最佳取樣時(shí)間。外植體處理方法大蒜鱗莖于05冰箱冷藏38周（因品種而異）。外植體接種莖尖消毒將鱗芽保護(hù)葉剝離，切除鱗莖貯藏葉大部分，保留含莖尖體積約為

4、3mm2mm3mm塊狀，移到超凈工作臺(tái)上，先用75%乙醇（酒精）浸潤(rùn)3s5s，再用配制好的20%次氯酸鈉溶液中浸泡6min8min，之后用無菌水沖洗45次，再用無菌濾紙吸去表面水分，置于無菌培養(yǎng)皿中備用。莖尖剝?nèi)⑾^毒的莖尖置于40倍體視顯微鏡（雙筒解剖鏡）下，用解剖針逐次去掉幼葉，直至露出光滑的莖尖，用解剖刀切取含莖尖的生長(zhǎng)點(diǎn)0.1mm0.3mm。接種用接種針將生長(zhǎng)點(diǎn)移至初代培養(yǎng)基，每個(gè)容器接種一個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)，酒精燈上烘烤試管（瓶）口和紗布棉球紙帽或封口膜（蓋）后封口，在管（瓶）壁上注明品種、編號(hào)和接種日期等內(nèi)容。培養(yǎng)培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件為溫度2325、光照強(qiáng)度25molm-2s-137.5mol

5、m-2s-1、光照時(shí)間14h16h/d，相對(duì)濕度60%以上。培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)30d40d看到莖尖生長(zhǎng)出810個(gè)芽且明顯伸長(zhǎng)，呈綠色。鱗莖誘導(dǎo)將叢生芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過23個(gè)月后，試管內(nèi)形成脫毒微鱗莖。生根誘導(dǎo)有小葉發(fā)生時(shí)將小莖芽轉(zhuǎn)入裝有生根培養(yǎng)基，經(jīng)45個(gè)月可發(fā)育成23個(gè)葉片的初代苗。病毒檢測(cè)檢測(cè)方法按照NY/T 405-2000脫毒大蒜種蒜（苗）病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程進(jìn)行，最后選留在封閉容器內(nèi)繁殖的無OYDV、GCLV的再生苗株系作為脫毒試管苗。試管苗馴化與培育馴化前處理脫毒試管苗在移栽前打開瓶塞，加入自來水（加水量高于培養(yǎng)基表面0.5 cm），同時(shí)關(guān)閉空調(diào)于室溫?zé)捗?天。取出試管苗，洗凈培養(yǎng)基，保濕待栽。土壤選擇選擇未種植過蔥蒜類蔬菜，有機(jī)質(zhì)豐富、土層深厚、排水良好的微酸性沙質(zhì)田塊。整地施肥深翻細(xì)耙，深度20 cm30 cm。在翻地時(shí)畝施充分腐熟有機(jī)肥3000 kg5000kg，三元復(fù)合肥（有效成份含量NP205K20=121618）47 kg，尿素(N=46%)24kg。防蟲網(wǎng)室設(shè)立防蟲網(wǎng)選用40目，于移栽之前12個(gè)月覆蓋。移栽株行距6cm8cm。定植后插小拱棚覆膜保溫保濕。追施肥水越冬前噴水1次，開春后（3月上旬）結(jié)合澆水