人工蟲草提取物對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用及其機(jī)制

1、人工蟲草提取物對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用及其機(jī)制【關(guān)鍵詞】人工蟲草菌絲；,缺血；,心肌；,保護(hù)摘要：目的研究人工蟲草提取物對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法通過結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支LAD造成急性心肌缺血模型，觀察人工蟲草水提取物aterextratfrulturalyeliu,E、醇提取物Ethanalextratfrulturalyeliu,EE、醋酸乙酯提取物(Ethylaetateextratfrulturalyeliu,EA)和石油醚提取物Petrleuetherextratfrulturalyeliu,PE對(duì)心肌梗死面積IS、血清磷酸肌酸肌酶K-B、乳酸脫氫酶LDH、丙二醛DA、一氧化

2、氮N、一氧化氮合酶NS及超氧化物歧化酶SD的影響。結(jié)果E，EE和PE可明顯減小IS，降低K-B及LDH活性，減少DA含量，增高N含量，進(jìn)步NS和SD活性。結(jié)論E，EE和PE對(duì)缺血心肌具有保護(hù)作用，其機(jī)制與E，EE和PE進(jìn)步NS和SD活性從而擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)。關(guān)鍵詞：人工蟲草菌絲；缺血；心?。槐Ｗo(hù)Abstrat：bjetiveTevaluatetheeffetsfextratsfrulturalyeliufrdyepssinensisnyardialinfartinandexplrethepssibleehanissinvlvedinit.ethdsRatseretreatedit

3、haterextratfrulturalyeliuE,ethanalextratfrulturalyeliuEE,ethylaetateextratfrulturalyeliu(EA)andpetrleuetherextratfrulturalyeliuPEfr7daysbefreyardialinfartininduedbyrnarylusin.Theyardialinfartsize(IS),reatinephsphkinase(KB)ativity,latatedehydrgenase(LDH)ativity,nitrixide(N)ntent,alndialdehyde(DA)nten

4、t，nitrixidesynthase(NS)andsupersidedisutase(SD)ativityereeasured.ResultsE，EEandEAsignifiantlyreduedIS,exertedntableinhibitinintheelevatinfK-Bativity,LDHativityandDAntent,arkedlyinreasedNlevel,NSandSDativities.nlusinTheresultsindiatedthatE,EEandEAshedaapaitytresistisheidaageandtheehanissererrelatedit

5、hediatingNSandSDativityatleast,inpart.Keyrds：ulturalyeliufrdyepssinensis;Ishei;ardiytes;Prtetin冬蟲夏草rdyepssinensis是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，為麥角菌寄生在蝙蝠蛾幼蟲上的枯燥子座和蟲體，其性味甘平，具補(bǔ)肺益腎、止血化痰之成效。由于冬蟲夏草產(chǎn)地局限，產(chǎn)量稀少，現(xiàn)多用人工培養(yǎng)品，人工培養(yǎng)的冬蟲夏草稱為蟲草菌絲體或簡(jiǎn)稱蟲草。冬蟲夏草富含多種氨基酸、多糖、有機(jī)酸、微量元素、核苷、肽類和甾醇等多種化學(xué)成分，藥理作用廣泛，對(duì)心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等都有調(diào)節(jié)作用。近年來，有關(guān)蟲草對(duì)心血管系統(tǒng)作用

6、的研究說明，蟲草有明顯降壓及負(fù)性頻率作用1，2；去除自由基作用3，4和抗心律失常作用5等，但有關(guān)人工蟲草提取物對(duì)心肌缺血損傷的影響尚未見報(bào)道。因此本文通過結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支造成急性心肌缺血模型，觀察了人工蟲草水提取物、醇提取物、醋酸乙酯提取物和石油醚提取物對(duì)缺血心肌的影響并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)展了討論。1器材1.1動(dòng)物istar大鼠，雄性，體重250300g，山東綠葉天然藥物研究開發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號(hào)200106005。1.2藥品與試劑人工蟲草水提取物E、醇提取物EE、乙酸乙酯提取物(EA)、石油醚提取物PE,由山東綠葉天然藥物研究開發(fā)提供；復(fù)方丹參片，山東省東營(yíng)仙河制藥廠，批號(hào)030

7、937；氯化硝基四氮唑藍(lán)NBT，上海前進(jìn)試劑廠；血清磷酸肌酸肌酶K-B、乳酸脫氫酶LDH、丙二醛DA、一氧化氮N、一氧化氮合酶NS及超氧化物歧化酶SD試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程公司。1.3儀器722E型可見分光光度計(jì)，上海光譜儀器；TDL-40B臺(tái)式離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠。2方法2.1動(dòng)物分組與給藥70只雄性istar大鼠隨機(jī)分成7組，每組10只。分別為假手術(shù)組Sha、心肌缺血模型組del、復(fù)方丹參組(DS)、人工蟲草菌絲體水提取物組A、醇提取物組EE、醋酸乙酯提取物組EA、石油醚提取物組PE。Sha與del給予羧甲基纖維素鈉100g/kg灌胃，DS，A，EE，EA和PE分別給予復(fù)方丹參3

8、38g/kg，人工蟲草菌絲體水提取物12g/kg，醇提取物12g/kg，醋酸乙酯提取物12g/kg，石油醚提取物12g/kg灌胃。灌胃1次/d，連續(xù)7d。2.2心肌缺血模型建立6末次給藥1h后烏拉坦1000g/kgip麻醉大鼠，仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，自左側(cè)34肋間開胸，暴露心臟，以0號(hào)線于肺動(dòng)脈圓錐及左心耳間結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，將心臟送回胸腔，擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，迅速關(guān)閉胸腔，開胸時(shí)間不超過30s，假手術(shù)組僅置縫線而不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈。24h后烏拉坦1000g/kgip麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈插管取血，離心3000r/in，10in別離得血清樣品，按試劑盒操作說明測(cè)定血清中K-B，LDH，NS，SD活

9、性及N，DA含量；取血后立即翻開大鼠胸腔，剪取心臟后用生理鹽水洗凈心腔內(nèi)積血，去掉心房組織及脂肪，稱重，將左心室心肌橫切4片，然后浸入0.1%NBT磷酸緩沖液中，置37恒溫水浴中15in，待染色完全后取出，正常心肌組織染色，缺血心肌組織不染色。切下缺血心肌稱重，按以下公式計(jì)算心肌堵塞面積ISIS%=缺血心肌重/左心室重100%。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示，組間比擬采用t檢驗(yàn)進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1人工蟲草提取物對(duì)IS，K-B和LDH的影響與模型組比擬，DS，E，EE和PE均能顯著減小心肌堵塞面積P0.01或P0.05，抑制血清K-B和LDH升高P0.01或P0.0

10、5，但EA未見明顯抗心肌缺血作用。結(jié)果見表1。表1人工蟲草提取物對(duì)IS，K-B和LDH的影響略與假手術(shù)組比擬，#P0.05,#P0.01；與模型組比擬，*P0.05,*P0.01；n=103.2人工蟲草提取物對(duì)SD和DA的影響與模型組比擬，DS，E，EE和PE均能顯著升高SD活性P0.05，降低DA含量P0.05。結(jié)果見表2。表2人工蟲草提取物對(duì)SD和DA的影響略與假手術(shù)組比擬，#P0.05；與模型組比擬，*P0.05；n=103.3人工蟲草提取物對(duì)NS和N的影響與假手術(shù)組比擬，模型組NS和N均未見明顯變化；與模型組比擬，DS，E，EE和PE均能顯著升高NS活性和N含量P0.01或P0.05。

11、見表3。表3人工蟲草提取物對(duì)NS和N的影響略與模型組比擬，*P0.05,*P0.01；與模型組比擬，*P0.05,*P0.01；n=104討論心肌缺血缺氧使細(xì)胞膜對(duì)a2+的通透性增高，a2+內(nèi)流增加，使胞漿a2+濃度增高。a2+增多可抑制線粒體功能，ATP生成減少而加重細(xì)胞損傷；可激活磷脂酶，使細(xì)胞膜磷脂分解；使溶酶體膜磷脂分解而釋放大量溶酶體酶，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞及其周圍組織溶解壞死。心肌缺血缺氧還通過交感神經(jīng)興奮和胞漿中a2+濃度增高等途徑產(chǎn)生大量活性氧和自由基，活性氧和自由基攻擊細(xì)胞膜構(gòu)造中的不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過氧化，將脂質(zhì)降解為DA等小分子7。心肌細(xì)胞內(nèi)富含與代謝相關(guān)的酶，如K-B和LD

12、H等，心肌細(xì)胞損傷或壞死后，K-B和LDH等酶將浸透進(jìn)入血液。因此，血清中K-B和LDH的含量可反映心肌損傷和壞死的程度8。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，E、EE和PE可明顯減小IS而且降低了血清中K-B和LDH的含量，這充分說明E，EE和PE對(duì)缺血心肌具有保護(hù)作用。為防御活性氧和自由基對(duì)組織細(xì)胞的損傷，機(jī)體存在去除各種活性氧和自由基的酶系統(tǒng)，如SD、過氧化酶和谷胱甘肽過氧化酶等。其中SD被視為活性氧和自由基的第一防線。E，EE和PE明顯升高了SD活性，那么使SD去除活性氧和自由基的才能增加，降低細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，使DA產(chǎn)生減少，從而保護(hù)缺血的心肌細(xì)胞。血氧供需失衡和血栓形成是心肌缺血的重要病理生理機(jī)制，因

13、此，改善心肌的血氧供需矛盾與抗血栓是治療心肌缺血的藥理基矗N由L-精氨酸在NS作用下產(chǎn)生。N通過激活細(xì)胞內(nèi)鳥苷酸環(huán)化酶使GP程度升高，從而產(chǎn)生廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，包括擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，抑制白細(xì)胞和血小板黏附，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡等9，10。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：E，EE和PE增高NS活性，進(jìn)而產(chǎn)生N擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等生物效應(yīng)，緩解心肌需氧與供氧的失衡，起到抗心肌缺血的作用。本研究通過結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈造成心肌缺血模型，證明E，EE和PE對(duì)缺血心肌具有保護(hù)作用，其機(jī)制與E，EE和PE抑制脂質(zhì)過氧化和擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EA不具有抗心肌缺血作用，那么EA與E，EE和PE的成分有何不同，E，EE和PE中終究是

14、哪種成分具有抗心肌缺血作用，E，EE和PE是否還通過其他途徑保護(hù)缺血心肌，這將是我們下一步深化研究和討論的問題。參考文獻(xiàn)：1LiuK.ReentprgressinpharalgyfrdyepssinensisandultrualyeliuJ.山東中醫(yī)雜志,1991,10(5)：42.2LuYQ,LiaX,LuY.PharlgialstudyinardivaslgyfethanlextratfrulturalyeliuandferentatinbrthJ.中草藥,1986,17(5)：17.3YuZ,HeJX,angFF.Theeffetfrdyepssinensisnthejuryfultur

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