祖師麻注射液的高效液相指紋圖譜研究

1、祖師麻注射液的高效液相指紋圖譜研究【摘要】目的建立祖師麻注射液HPL指紋圖譜，為中成藥產(chǎn)品及消費(fèi)工藝過程質(zhì)量控制提供有效方法。方法色譜柱為VPDS18(4.6150，5)，柱溫為30，流速為1.0l/in，檢測波長為326n，以乙腈和0.5%的醋酸水溶液為流動相進(jìn)展梯度洗脫。結(jié)果祖師麻注射液有8個(gè)共有峰，相似度96%。結(jié)論該方法簡便可靠，可有效用于祖師麻注射液消費(fèi)過程中的質(zhì)量控制和對產(chǎn)品的質(zhì)量評價(jià)。【關(guān)鍵詞】祖師麻注射液；高效液相色譜；指紋圖譜中藥質(zhì)量控制技術(shù)是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵技術(shù)之一，HPL指紋圖譜技術(shù)正在越來越多地應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制1，2。祖師麻為瑞香科(Thyelaeaeae)瑞香屬植物

2、黃瑞香(DaphnegiraldiiNitshe)的根皮和莖皮，藥理研究說明祖師麻具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌等藥理活性，在臨床上多用于風(fēng)濕病痛的治療，療效顯著。祖師麻含有香豆素類、二萜類、木質(zhì)素類、黃酮類、蒽醌類及甾醇類等化學(xué)成分，其中祖師麻甲素7，8-二羥基香豆精又稱瑞香素，為生理活性成分3。目前主要是通過祖師麻甲素含量的測定確定祖師麻注射液的質(zhì)量4，5，關(guān)于祖師麻注射液各種指紋圖譜技術(shù)研究未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對祖師麻注射液進(jìn)展了HPL指紋圖譜研究，為祖師麻注射液內(nèi)在質(zhì)量的評價(jià)提供根據(jù)。1儀器與試劑島津L-2022A高效液相色譜儀，色譜柱：VPDS18(4.6150，5)。乙腈為色譜純，水為雙蒸

3、水，對照品祖師麻甲素批號：110900-202205，購于中國藥品生物制劑鑒定所，其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1對照品溶液的的制備準(zhǔn)確稱取4g祖師麻甲素對照品于10l的容量瓶中，加甲醇溶解并定容制成質(zhì)量濃度為0.4gl-1的祖師麻甲素對照品溶液。2.2祖師麻注射液樣品的來源和處理祖師麻注射液由山西萬榮三九藥業(yè)，批號分別為0710162，0711171，0801071，0801072，0801281，0801311，0802071，0804191，0902083，0902103。取注射液樣品適量，用0.45微孔濾膜過濾，作為供試品直接進(jìn)樣。2.3色譜條件色譜柱為VPDS18(1504.6

4、，5)；體積流量1.0lin-1；柱溫30，檢測波長326n；進(jìn)樣量10l；流動相為乙腈0.5%醋酸水溶液梯度洗脫；條件見表1。表1祖師麻注射液HPL指紋圖譜梯度洗脫表略2.4方法學(xué)考察2.4.1精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取同一批號0801072供試品在上述色譜條件和測定方法下，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果說明5次測定圖譜中8個(gè)共有峰保存時(shí)間的RSD為0.081.50，峰面積的RSD為0.511.89。指紋圖譜中各共有峰相對保存時(shí)間和峰面積根本一致，其相似度均大于99%，證明儀器精細(xì)度良好。2.4.2重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號0902103供試品5份，分別用0.45的濾膜過濾測定，結(jié)果8個(gè)共有峰保存時(shí)間和峰面積的RSD分別為

5、0.041.35和0.681.85，5個(gè)樣品色譜圖相似度大于99%，該方法重復(fù)性良好，穩(wěn)定可靠。2.4.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)同一批號0801071供試品，分別在0，2，5，8，12，16h進(jìn)樣檢測，色譜圖中8個(gè)共有峰保存時(shí)間和峰面積的RSD分別為0.271.54和0.481.98，6次分析所得色譜圖相似度大于99%，證明樣品在16h內(nèi)穩(wěn)定。2.5指紋圖譜的測定及相似度計(jì)算按照選定的色譜條件對10個(gè)批次的祖師麻注射液成品進(jìn)展指紋圖譜檢測，記錄色譜圖并積分，圖譜導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)2022A版，截取045in的色譜圖，按平均值法生成對照圖譜，進(jìn)展相似度計(jì)算，確定得到8個(gè)共有峰，見圖1。各共有

6、峰的保存時(shí)間和峰面積見表2，相似度見表3。8個(gè)共有峰的峰面積之和占總峰面積的90%以上，保存時(shí)間的RSD為0.32，相似度96%，符合指紋圖譜研究技術(shù)的要求。按表1梯度色譜條件對祖師麻甲素對照品溶液進(jìn)展測定，由保存時(shí)間得到3號峰為祖師麻注射液中有效成分祖師麻甲素特征峰。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3討論3.1流動相的選擇本實(shí)驗(yàn)先采用了等度洗脫，發(fā)現(xiàn)用強(qiáng)洗脫才能的流動相時(shí)，出峰時(shí)間很早，且峰不能很好的分開，再用弱洗脫才能的流動相時(shí)，出峰少，且出峰時(shí)間太遲，故采用梯度洗脫。分別使用了乙腈-水，乙腈-0.5磷酸，乙腈-0.5醋酸，甲醇-水，甲醇-0.5磷酸，甲醇-0.5醋酸作用流動相進(jìn)展線性梯度洗脫，用洗

7、脫才能較強(qiáng)的乙腈時(shí)峰的別離情況較甲醇好，色譜峰窄，柱壓低。在水相中參加磷酸或醋酸后，出峰明顯增多，峰有較大的改善，而用醋酸時(shí)的基線較磷酸時(shí)平直，綜合考慮，選用乙腈-0.5醋酸作為本實(shí)驗(yàn)的流動相梯度洗脫。表210批祖師麻注射液HPL指紋圖譜共有峰保存時(shí)間和峰面積測定結(jié)果略表310批祖師麻注射液HPL指紋圖譜相似度測定結(jié)果略3.2檢測波長的選擇比擬了254，285，305，315，326，330n時(shí)的色譜圖，波長為326n時(shí)的色譜圖最為理想，其它波長下在50in后基線均有不同程度的飄移。3.3柱溫的選擇比擬柱溫為25，28，30，35時(shí)的色譜圖，柱溫在30以下時(shí)，個(gè)別成分峰吸收降低，別離度下降，在

8、35以上時(shí)出峰時(shí)間提早，故本實(shí)驗(yàn)選擇柱溫為30。分析確定的色譜條件下生成的液相色譜圖可見，此條件下色譜峰數(shù)目最多，別離度較理想，注射液主要成分即祖師麻甲素主峰突出；方法學(xué)考察顯示本實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定、可靠，對評價(jià)祖師麻注射液的內(nèi)在質(zhì)量有一定的實(shí)用價(jià)值。利用中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)，以10批祖師麻注射液的指紋圖譜綜合平均作為對照模板，計(jì)算10批樣品共有峰的相似度，均大于96%，說明不同時(shí)間消費(fèi)的祖師麻注射液質(zhì)量穩(wěn)定。但從指紋圖譜中還可以看出，雖然都出現(xiàn)了相應(yīng)的成分峰，但是峰面積比值不盡一樣，說明不同批號的注射液在含量上存在明顯差異，原因可能為所使用的原料來源和提取工藝不夠穩(wěn)定，所以必須在固定原藥材產(chǎn)地及提取工藝的前提下，才可能保證中藥注射液的質(zhì)量穩(wěn)定可控。由此可見，通過指紋圖譜可以控制消費(fèi)流程，可以及時(shí)、全面地對消費(fèi)過程中的藥材、中間產(chǎn)物及其成品進(jìn)展質(zhì)量監(jiān)控，從而為進(jìn)步成品的內(nèi)在質(zhì)量提供保證?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1易倫朝，吳海，梁逸曾.色譜指紋圖譜與中藥質(zhì)量控制J.色譜，2022，26(2):166.2周建良，齊煉文，李萍.色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用J.色譜，2022，26(2):153.3李書慧，吳立軍，殷紅英.祖師麻化學(xué)和藥理活性研究進(jìn)展J.中國中藥