臨床免疫檢驗實驗課件：循環(huán)免疫復合物的檢測

1、 循環(huán)免疫復合物的檢測前言免疫復合物：抗原與其相應的抗體結(jié)合形成的復合物 -組織中固定的免疫復合物（局部免疫復合物） -血液中的循環(huán)免疫復合物（circulating immune complex，CIC） 根據(jù)形成免疫復合物的Ag-Ab是已知或未知的將CIC分為兩大類：特異性免疫復合物：如HBsAg-抗HBsAg，甲狀腺球蛋白-抗甲狀腺球蛋白形成的免疫復合物；非特異性免疫復合物。 循環(huán)免疫復合物的檢測技術(shù)分為抗原特異性和非抗原特異性兩類。大多數(shù)情況下，免疫復合物抗原性質(zhì)不清或太復雜了，所以前者不常用；后者檢測的是血清中CIC的總量，不考慮形成CIC的抗原特異性。 類別 原理 方法 敏感性 備

2、注 物理法 分子大小 1.超速離心 適于研究2.分子超濾 適于研究3.凝膠過濾30g 適于研究溶解度 1.PEG沉淀20g 粗定量,易推廣2.冷沉淀 定性,臨床應用補體法 固定補體,結(jié)合C1q 抗補體試驗0.1g 常用,特異性差1.C1q凝膠沉淀試驗100g 定性,不易普及2.C1q偏離試驗4g 不易普及3.液相法10g 不易普及4.固相法1g 不易普及膠固素 膠固素結(jié)合試驗3g 敏感,穩(wěn)定抗Ig法 結(jié)合RF 1.RF凝膠沉淀試驗100G 定性,不敏感2.mRF固相抑制試驗120g 不易普及3.PRF凝集抑制試驗110g 不易普及結(jié)合Ig 抗抗體法23g 不易普及細胞法 Fc受體 1.血小板凝

3、集試驗14g 需新鮮制備2.ADCC抑制試驗510g 細胞活性質(zhì)控難3.M吞噬抑制試驗0.03g 細胞活性質(zhì)控難補體受體 1.Raji細胞法6g 需維持細胞株2.花環(huán)抑制試驗10g 影響因素多實驗原理PEG比濁法PEG（聚乙二醇）是非離子型水溶性聚合物，有很強的親水性，可以破壞溶液中蛋白質(zhì)表面的水化層，使蛋白質(zhì)沉淀，即使?jié)舛群芨咭膊粫鸬鞍踪|(zhì)變性。不同濃度的PEG能選擇性沉淀不同的蛋白質(zhì)。用終濃度為3040g/L的PEG 6000能選擇性沉淀CIC。循環(huán)免疫復合物與聚乙二醇作用，以濁度變化表現(xiàn)出來，可根據(jù)濁度的大小來反映免疫復合物的多少。濁度的大小用分光光度計測定。 主要試劑與器材待測血清（

4、已1：3稀釋） 0.1mol/L pH8.4硼酸緩沖液（BBS）、41g/L PEG溶液 分光光度計、0.5cm比色杯、試管 實驗步驟按照表格加樣，此時PEG最終濃度為37.3g/L。加樣后，充分混勻，置4 1h，置室溫10min。用分光光度計在波長495nm下測兩管的A值，以BBS調(diào)零。結(jié)果記錄和判斷記錄對照管和測定管的A值待測血清A值測定管A值對照管A值正常血清CIC的A值為0.0430.02（XSD）。大于正常人A值兩個標準差或更高者為CIC陽性。 注意事項不同濃度的PEG可沉淀不同分子量的免疫復合物。20g/L PEG 可沉淀較大的CIC，40g/L PEG 則沉淀較小的CIC，但濃度大于50g/L PEG選擇性沉淀CIC的特性即消失，可能導致假陽性。溫度變化對結(jié)果影響較大。4時CIC沉淀最佳，室溫每升高1，A值下降0.2。低密度脂蛋白、高球蛋白血癥或脂肪含量過高均可使?jié)岫仍黾樱蕬崭共裳?。樣本陳舊或反復凍融等均可影響檢測結(jié)果，故待測血清一定要新鮮，防止血清污染及聚合IgG形成。通常4冰箱保存不能超過3天，-20保存時間可適當延長。應用與評價CIC的檢測對免疫復合物病（如血清病、SLE）是一種輔助診斷指標，對判斷疾病活動和療效有一定意義。PEG比濁法檢測CIC快速、簡便，敏感度達20mg/L，但不能區(qū)分免疫復合物的大小，且重復性和特異性較差，一般可以