食品中己二酸、富馬酸等酸度調(diào)節(jié)劑的測定（食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)）

1、 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中己二酸、富馬酸等酸度調(diào)節(jié)劑的測定 高效液相色譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中酒石酸、乳酸、L-蘋果酸、檸檬酸、丁二酸、富馬酸和己二酸的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于果蔬汁飲料、碳酸飲料、固體飲料、膠基糖果、餅干、糕點、果凍、水果罐頭等食品中7種酸度調(diào)節(jié)劑的測定。2 原理試樣直接用水稀釋或用乙醇溶液提取后，經(jīng)強陰離子交換固相萃取柱凈化，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜柱分離，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。3 試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 甲醇（CH3OH）：色譜純。3.1.2 無水乙醇（CH3CH2OH）

2、。3.1.3 磷酸（H3PO4）：色譜純。3.1.4 氫氧化鈉（NaOH）。3.1.5 聚酰胺粉：柱層析用，100目200目。3.1.6 強陰離子固相萃取柱（SAX）：1 000 mg，6 mL。使用前依次用5 mL甲醇、5 mL水活化。3.2 試劑配制3.2.1 氫氧化鈉溶液（0.1 mol/L）：稱取4 g氫氧化鈉，加水至1 000 mL，溶解，混勻。3.2.2 乙醇溶液（20+80）：量取乙醇20 mL，加水80 mL，混勻。3.2.3 乙醇溶液（40+60）：量取乙醇40 mL，加水60 mL，混勻。3.2.4 甲醇溶液（5+95）：量取甲醇5 mL，加水95 mL，混勻。3.2.5

3、磷酸-甲醇溶液（2%）：量取磷酸2 mL，加甲醇至100 mL，混勻。3.2.6 磷酸溶液（0.1%）：量取磷酸0.1 mL，加水至100 mL，混勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（C3H6O3），純度99%。3.3.2 酒石酸標(biāo)準(zhǔn)品（C4H6O6），純度99%。3.3.3 L-蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品（C4H6O5），純度99%。3.3.4 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品（C6H8N7），純度98%。3.3.5 丁二酸標(biāo)準(zhǔn)品（C4H6N4），純度99%。3.3.6 富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品（C4H4O4），純度99%。3.3.7 己二酸標(biāo)準(zhǔn)品（C6H10N4），純度99%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 酒石酸、L-蘋果酸、

4、乳酸、檸檬酸、丁二酸、富馬酸混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液：分別稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的酒石酸2.5 g、L-蘋果酸5 g、乳酸5 g、檸檬酸5 g、丁二酸12.5 g、富馬酸1.25 g（精確至0.1 mg），置100 mL容量瓶中，加水到刻度，混勻，于4保存，其中酒石酸濃度為2 500 g/mL、L-蘋果酸5 000 g/mL、乳酸5 000 g/mL、檸檬酸5 000 g/mL、丁二酸12 500 g/mL、富馬酸12.5 g/mL。3.4.2 酒石酸、L-蘋果酸、乳酸、檸檬酸、丁二酸、富馬酸混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.4.1）0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、

5、5.00 mL、10.00 mL于25 mL容量瓶中，用磷酸溶液（4.2.6）定容至刻度，混勻，于4保存。3.4.3 己二酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液（500 g/mL）：準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的己二酸12.5 mg，置25 mL容量瓶中，加水到刻度，混勻，于4保存。3.4.4 己二酸標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.4.3）0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL、10.00 mL于25 mL容量瓶中，用磷酸溶液（4.2.6）定容至刻度，混勻，于4保存。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀，帶二極管陣列或紫外檢測器。4.2天平：感量為0.1 mg和0.01 g。4.3

6、高速均質(zhì)器。4.4超聲波振蕩器。4.5 pH計：精度為0.01。4.6 離心機：轉(zhuǎn)速4000 r/min。4.7 固相萃取裝置。4.8 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4.9 水相型微孔濾膜：孔徑0.45 m。5 分析步驟5.1 試樣制備 5.1.1 果汁飲料及果汁、果味碳酸飲料準(zhǔn)確稱取5 g（精確至0.01 g）均勻試樣（若試樣中含二氧化碳應(yīng)先加熱除去；若試樣中含有人工合成色素應(yīng)先加入適量聚酰胺粉混勻后于70水浴中加熱脫色，樣液在4000 r/min下離心5 min，再取上清液進行處理），放入25 mL容量瓶中，加水至刻度，經(jīng)0.45 m水相濾膜過濾，注入高效液相色譜儀分析。5.1.2 果凍、水果罐頭稱取10

7、g（精確至0.01 g）均勻試樣，放入50 mL塑料離心管中，向其中加入20 mL水后均質(zhì)提取2 min，4000 r/min 離心 5min，取上層提取液至50 mL容量瓶中，殘留物再用20 mL水重復(fù)提取一次，合并提取液于同一容量瓶中，并用水定容至刻度，經(jīng)0.45 m水相濾膜過濾，注入高效液相色譜儀分析。5.1.3 膠基糖果 稱取均勻試樣5 g（精確至0.01 g），加水后超聲波震蕩提取30 min，并定容到50 mL，混勻。樣液在4000 r/min下離心5 min，經(jīng)0.45 m水相濾膜過濾，注入高效液相色譜儀分析。5.1.4 固體飲料稱取均勻試樣10 g（精確至0.01 g），放入5

8、0 mL塑料離心管中，向其中加入20 mL乙醇溶液（3.2.2）后均質(zhì)提取2 min，4 000 r/min離心5 min，取上層提取液至50 mL容量瓶中，殘留物再用20 mL乙醇溶液（3.2.2）重復(fù)提取一次，合并提取液于同一容量瓶中，并用水定容至刻度。準(zhǔn)確移取上述提取液10 mL加熱除去乙醇，然后用氫氧化鈉溶液（3.2.1）調(diào)節(jié)試樣溶液的pH值至7.00.1。將上述待凈化液全部轉(zhuǎn)移至經(jīng)過預(yù)活化的SAX固相萃取柱（3.16）中，控制流速在1 mL/min2 mL/min，棄去流出液。依次用5 mL水、5 mL甲醇溶液（3.2.4）淋洗凈化柱，最后用5 mL磷酸-甲醇溶液（3.2.5）洗脫，

9、控制流速在1 mL/min2 mL/min，收集洗脫液于50 mL雞心瓶中，洗脫液在45下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后，用2 mL磷酸溶液（3.2.6）振蕩溶解殘渣后過0.45 m濾膜后，注入高效液相色譜儀分析。5.1.5 米粉、餅干稱取5 g（精確至0.01 g）已粉碎均勻的試樣，放入50 mL塑料離心管中，向其中加入20 mL乙醇溶液（3.2.3）后均質(zhì)提取2 min，以下按“6.1.3 固體飲料”中“4 000 r/min離心5 min”起操作，洗脫液在45下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后，用5 mL磷酸溶液（3.2.6）振蕩溶解殘渣后過0.45 m濾膜后，注入高效液相色譜儀分析。5.2儀器參考條件5.2.1 酒石酸

10、、L-蘋果酸、乳酸、檸檬酸、丁二酸、富馬酸的測定a）色譜柱：CAPECELL PAK MG S5 C18柱，4.6 mm250 mm，5 m，或同等性能的色譜柱；b）流動相：0.1%磷酸溶液-甲醇=97.5+2.5（體積比，V/V）；c）柱溫：40；e）進樣量：20 L；f）檢測波長：210 nm；5.2.2己二酸的測定a）色譜柱：CAPECELL PAK MG S5 C18柱，4.6 mm250 mm，5 m，或同等性能的色譜柱；b）流動相：0.1%磷酸溶液-甲醇=75+25（體積比，V/V）；c）柱溫：40；d）進樣量：20 L；e）檢測波長：210 nm；5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列

11、工作液分別注入高效液相色譜儀中，測定相應(yīng)的峰高或峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰高或峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4 試樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中，得到峰高或峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中酸度調(diào)節(jié)劑的濃度，平行測定次數(shù)不少于2次。6 分析結(jié)果的表述試樣中酸度調(diào)節(jié)劑的含量按公式（1）計算： （1） 式中：X 試樣中酸度調(diào)節(jié)劑的含量，單位為克每千克（g/kg）；C由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣溶液中某酸度調(diào)節(jié)劑的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V試樣稀釋總體積，單位為（mL）；m試樣質(zhì)量，單位為克（g）；1000換算系數(shù)。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的算術(shù)

12、平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8 標(biāo)準(zhǔn)圖譜見附錄A。9 其他本方法定量限：a）固體飲料：酒石酸 50 mg/kg、L-蘋果酸100 mg/kg、乳酸50 mg/kg、檸檬酸50 mg/kg、丁二酸250 mg/kg、富馬酸0.25 mg/kg、己二酸10 mg/kg； b）果汁、飲料、果凍、水果罐頭、米粉、餅干等：酒石酸 250 mg/kg、L-蘋果酸500 mg/kg、乳酸250 mg/kg、檸檬酸250 mg/kg、丁二酸1250 mg/kg、富馬酸1.25 mg/kg、己二酸50 mg/kg；c） 膠基糖果：酒石酸 500 mg/kg、L-蘋果酸1000 mg/kg、乳酸500 mg/kg、檸檬酸500 mg/kg、丁二酸2500