伴高血壓2型糖尿病大鼠模型的建立

1、伴高血壓2型糖尿病大鼠模型的建立【摘要】目的制備與人類發(fā)病過程類似的伴高血壓2型糖尿病大鼠模型。方法選擇40只SPF級(jí)雄性istar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組12只和實(shí)驗(yàn)組28只，對(duì)照組以標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料飼喂，實(shí)驗(yàn)組以高脂高鹽飼料喂養(yǎng)，兩組均飲用大鼠專用去離子水，16進(jìn)展正糖鉗實(shí)驗(yàn)，確定胰島素抵抗，腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)造成2型糖尿玻實(shí)驗(yàn)過程中每周測(cè)食量、水量和體重，每4測(cè)血糖和尾動(dòng)脈血壓，實(shí)驗(yàn)16時(shí)取血測(cè)空腹血漿胰島素。結(jié)果飼喂高脂高鹽飼料16后，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組尾動(dòng)脈血壓明顯升高，差異顯著P0.01；實(shí)驗(yàn)組空腹胰島素濃度明顯高于對(duì)照組P0.01；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組葡萄糖輸注速率明顯降低，兩

2、組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；STZ注射后實(shí)驗(yàn)組血糖明顯升高，到達(dá)了糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論高脂高鹽飲食配合STZ腹腔注射可成功誘導(dǎo)出伴高血壓2型糖尿病大鼠模型。高血壓是糖尿病患者極為常見的共患病，總體上糖尿病伴高血壓的患病率約在20%50%左右。以往研究多集中于單純2型糖尿病或單純高血壓，對(duì)2型糖尿病合并高血壓的實(shí)驗(yàn)研究相對(duì)較少，而后者的實(shí)驗(yàn)結(jié)論往往對(duì)臨床那么有更高的指導(dǎo)意義。長(zhǎng)期食用以脂肪為代表的高熱量飲食可導(dǎo)致胰島素抵抗(IR)，而高鹽飲食那么和高血壓的發(fā)生有關(guān)，新近已有學(xué)者1，2采用不同配比的高脂高鹽飼料喂養(yǎng)建立代謝綜合征(S)大鼠模型。本研究旨在以高脂肪高鹽飲食誘導(dǎo)配合鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注

3、射建立一種伴高血壓的2型糖尿病大鼠模型。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用SPF級(jí)雄性istar大鼠40只，體質(zhì)量14020g，購(gòu)于山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SXK(魯)20220015。動(dòng)物飼養(yǎng)于半透明IV盒內(nèi)，自由飲食進(jìn)水，明暗周期12h，單籠飼養(yǎng)。動(dòng)物房溫度2226，濕度55%65%。適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，用隨機(jī)數(shù)字法將大鼠分為對(duì)照組12只和實(shí)驗(yàn)組28只。實(shí)驗(yàn)組于注射STZ后第3天和第5天各死亡1只。1.3方法1.3.1造模飼料實(shí)驗(yàn)大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料購(gòu)于山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。造模飼料由質(zhì)量比占75%標(biāo)準(zhǔn)飼料加食用化豬油20%和氯化鈉5%加工而成。1.3.2模型制備實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7

4、d后，對(duì)照組繼續(xù)以標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組那么以高脂飼料取代標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng)，兩組均飲用大鼠專用純潔水，喂養(yǎng)16后，兩組各取6只大鼠進(jìn)展正糖鉗實(shí)驗(yàn)，確定發(fā)生IR后，實(shí)驗(yàn)組給予STZ20g/kg腹腔注射，對(duì)照組予一樣體積枸櫞酸緩沖液pH=7.4。1.3.3正常血糖鉗夾實(shí)驗(yàn)采用羅謀倫3等的方法稍加改進(jìn)，禁食不禁水大鼠12h后，稱重，以1%戊巴比妥鈉40g/kg腹腔注射麻醉。大鼠仰位固定于大鼠手術(shù)臺(tái)上，保持體溫在37.5左右，用0.03硅化膠管進(jìn)展雙側(cè)頸靜脈和左側(cè)頸動(dòng)脈插管，管腔中預(yù)先注入200IU/l的肝素生理鹽水抗凝。雙側(cè)靜脈導(dǎo)管分別連接微量注射泵的兩個(gè)針筒座上，用以分別輸注葡萄糖和胰島素，左頸

5、動(dòng)脈導(dǎo)管用以取血測(cè)血糖。待輸注裝置安裝完畢后，首先經(jīng)左頸動(dòng)脈導(dǎo)管取血0.5l用于根底血糖值和根底血漿胰島素測(cè)定，從右外頸靜脈插管按1l/kg體重注射入1000IU/l肝素生理鹽水溶液使血液抗凝，然后封住插管的出口，以免靜脈血流出。然后從右頸靜脈恒速輸注胰島素，速率為4Ukg-1in-1，當(dāng)血糖值從根底值下降到達(dá)0.5l/L時(shí)，開場(chǎng)從左頸靜脈輸注10%葡萄糖溶液，每5in測(cè)一次血糖，根據(jù)所測(cè)血糖值不斷調(diào)整葡萄糖輸注速率(GIR)，連續(xù)30in血糖值穩(wěn)定在根底血糖值0.5l/L范圍內(nèi)，稱之為“鉗夾形成，記錄穩(wěn)態(tài)下連續(xù)60in的GIR。取穩(wěn)態(tài)下6次GIR的平均值。1.3.5生化及一般指標(biāo)檢測(cè)每周測(cè)1

6、次食量、飲水量和體重。每4周同一時(shí)間點(diǎn)剪尾尖取血測(cè)血糖，采用葡萄糖氧化酶法，以血糖13l/L診斷為糖尿玻正糖鉗實(shí)驗(yàn)同時(shí)頸動(dòng)脈取血0.5l，肝素抗凝，4恒溫3000r/in離心，取血漿采用放免法測(cè)空腹血漿胰島素(FINS)。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SAS8.1軟件進(jìn)展數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以xs表示，組間差異采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1兩組大鼠食量、飲水量和體重變化情況與對(duì)照組大鼠比擬，實(shí)驗(yàn)前8實(shí)驗(yàn)組大鼠食量無明顯差異，8后實(shí)驗(yàn)組24h攝食量有所下降，STZ注射后1食量進(jìn)一步下降，從第2周實(shí)驗(yàn)組食量明顯增加；飲水量自實(shí)驗(yàn)起始至終止實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組(P0.01)，STZ注射后2實(shí)驗(yàn)組飲水量較注射前增加近3倍；STZ注射前兩組大鼠體重?zé)o顯著差異，注射后實(shí)驗(yàn)組大鼠體重急劇下降，范圍在4550g左右，見表1。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.表1兩組大鼠食量、飲水量以及體重的變化略與對(duì)照組比擬：1P0.05，2P0.01，下表同2.2兩組大鼠尾動(dòng)脈血壓、FINS和GIR的比擬飼喂高脂高鹽飼料16后，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組尾動(dòng)脈血壓明顯升高P0.01；實(shí)驗(yàn)組FINS明顯高于對(duì)照組P0.01；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組GIR明顯降低，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05。見表2。表2STZ注射前兩組大鼠血壓、FINS和GIR的比擬略圖1STZ注射后兩組大鼠血糖的變化略2.3STZ注射前后兩組大鼠血糖值的變