中小學(xué)優(yōu)質(zhì)課件菠菜中色素的提取與分離課件

1、菠菜色素的提取和色素分離菠菜色素的提取和色素分離一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^綠色植物色素的提取和分離，了解天然物質(zhì)分離提純方法。 通過薄層色譜分離操作，加深了解微量有機(jī)物色譜分離鑒定的原理。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^綠色植物色素的提取和分離，了解天然物質(zhì)分離提二、實(shí)驗(yàn)原理 綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素（綠）、胡蘿卜素（橙）和葉黃素（黃）等多種天然色素。 葉綠素存在兩種結(jié)構(gòu)相似的形式即葉綠素 a(C55 H72O5N4Mg) 和葉綠素 b(C55H7O6N4Mg) ，其差別僅是 a 中一個(gè)甲基被 b 中的甲酰基所取代。它們都是吡咯衍生物與金屬鎂的絡(luò)合物，是植物進(jìn)行光合作用所必需的催化劑。植物中葉綠素 a 的含量通常是

2、 b 的 3 倍。盡管葉綠素分子中含有一些極性基團(tuán)，但大的烴基結(jié)構(gòu)使它易溶于醚、石油醚等一些非極性的溶劑。二、實(shí)驗(yàn)原理 綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素（綠）二、實(shí)驗(yàn)原理 胡蘿卜素(C40H56 )是具有長鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯。它有三種異構(gòu)體，即 a-, - 和 - 胡蘿卜素，其中 - 異構(gòu)體含量最多，也最重要。在生物體內(nèi)， - 體受酶催化氧化即形成維生素 A 。目前 - 胡蘿卜素已可進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)，可作為維生素 A 使用，也可作為食品工業(yè)中的色素。 葉黃素(C40H56O2 )是胡蘿卜素的羥基衍生物，它在綠葉中的含量通常是胡蘿卜素的兩倍。與胡蘿卜素相比，葉黃素較易溶于醇而在石油醚中溶解度較小。 二、實(shí)

3、驗(yàn)原理 胡蘿卜素(C40H56 )是具有二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理三、基本操作與技術(shù)薄層色譜 薄層色譜常用TLC表示，又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固-液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，因此，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。 薄層色譜的原理是利用吸附劑（硅膠、氧化鋁等）對(duì)不同組分吸附能力

4、的差異從而達(dá)到分離目的的方法。 三、基本操作與技術(shù)薄層色譜三、基本操作與技術(shù)薄層板的制備 吸附劑：最常用硅膠 GF254； 硅膠HF254。粘結(jié)劑：一般用所羧甲基纖維素鈉（CMC），也有用淀粉的。 CMC 配成1水溶液使用。制板：以小板的制備為例，將硅膠加 1 CMC，調(diào)成槳狀（在平鋪玻璃板上能晃動(dòng)但不能流動(dòng)），將其涂在載玻片上（ 75 25），為使其坦平，可將載玻片用手端平晃動(dòng)，致坦平為止，放在干凈平坦的臺(tái)面上，晾干之后放入110烘箱活 化1小時(shí)即可使用。三、基本操作與技術(shù)薄層板的制備 吸附劑：最常用硅膠 GF25 三、基本操作與技術(shù)點(diǎn)樣 點(diǎn)樣用的毛細(xì)管為內(nèi)徑1mm的管口平整的毛細(xì)管，將樣品

5、溶于低沸點(diǎn)的溶劑（乙醚、丙酮、乙醇、四氫呋喃等）配成1溶液。 點(diǎn)樣前，可先用鉛筆在小板上距一端5mm處輕輕劃一橫線，作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品在起始線上小心點(diǎn)樣，如需重復(fù)點(diǎn)樣，則應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后方可重點(diǎn)。若在同一塊板上點(diǎn)幾個(gè)樣，樣品點(diǎn)間距離為5mm以上。 三、基本操作與技術(shù)點(diǎn)樣 三、基本操作與技術(shù)展開 展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮。 薄層的展開在密閉的容器中進(jìn)行。先將選擇的展開劑放入色譜器中（小板可用廣口瓶代替），使色譜器內(nèi)空氣飽和5-10min，再將點(diǎn)好試樣的薄層板放入色譜器中進(jìn)行展開，點(diǎn)樣的位置必須在展開劑液面之上，當(dāng)展開劑上升到薄層的前沿

6、（離前端 5-10mm）或多組分已明顯分開時(shí)，取出薄層板放平晾干，用鉛筆劃溶劑前沿的位置后，即可顯色。 三、基本操作與技術(shù)展開 三、基本操作與技術(shù)顯色 如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點(diǎn)。如果本身無色，可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點(diǎn)（有苯環(huán)的物質(zhì)都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點(diǎn)的位置；對(duì)于在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點(diǎn)（因?yàn)樵S多化合物都能和碘成黃棕色斑點(diǎn)），顯色后，立即用鉛筆標(biāo)出斑點(diǎn)的位置。計(jì)算比移值 記下原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中心及展開劑前沿的距離，計(jì)算比移值（Rf）。 三、基本操作與技術(shù)顯色 三、基本操作與技術(shù)三、基本操作與技術(shù)四、主要儀器與試劑 儀器:研缽

7、、布氏漏斗、圓底燒瓶、直形冷凝管、層析缸試劑:硅膠 G ，甲醇，石油醚（ 60-90 ），丙酮，乙酸乙酯，菠菜葉四、主要儀器與試劑 儀器:研缽、布氏漏斗、圓底燒瓶、直形冷凝五、實(shí)驗(yàn)裝置圖薄層板在層析缸中展開五、實(shí)驗(yàn)裝置圖薄層板在層析缸中展開六、實(shí)驗(yàn)流程圖分別用展開劑（ a ）石油醚 - 丙酮 =8:2 （體積比）和 （ b ）石油醚 - 乙酸乙酯 =6:4 （體積比） 展開，比較不同展開劑系統(tǒng)的展開效果。六、實(shí)驗(yàn)流程圖分別用展開劑（ a ）石油醚 - 丙酮 =8:七、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵及注意事項(xiàng) 薄層層析時(shí)，薄層板的制備要厚薄均勻，表面平整光潔。點(diǎn)樣與展開應(yīng)按要求進(jìn)行：點(diǎn)樣不能戳破薄層板面；展開時(shí)，不要讓展開劑前沿上升至底線。否則，無法確定展開劑上升高度，即無法求得Rf值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中各組分在薄層板上的相對(duì)位置。七、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵及注意事項(xiàng) 薄層層析時(shí)，薄層板的制備要厚