兩種方法測定辛酸鈉含量的比較2

1、兩種定量測定人血白蛋白中辛酸鈉含量方法的比較李榮貞 1， 趙軍 1 ， 李慶英1，王彬 2，王霞 2，李偉 2（1山東生物制品研究所, 山東 泰安 271000；2 山東泰邦生物制品有限公司 ，山東 泰安 271000）摘要： 目的：建立一種準(zhǔn)確性高，簡便快速的方法，對(duì)人血白蛋白中間品的辛酸鈉含量進(jìn) 行質(zhì)量控制；方法：通過采用氣相法和乙醚萃取法，分析比較T公司20批制品，結(jié)果：乙 醚萃取法與氣相法相比，回收率均在97%101%的范圍內(nèi)，相對(duì)誤差小于2%，萃取法與氣 相法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。結(jié)論：此法簡便快速，結(jié)果可靠，可應(yīng)用于中間產(chǎn)品辛 酸鈉含量的測定。關(guān)鍵詞：辛酸鈉含量；乙醚萃取

2、法；氣相法Study on two methods of Sodium Caprilate assay determination in Human Serum AlbuminLi nong-zhen1, Zhao jun1, Li qing-ying1, Wang bin2, Wang xia, 2 Li wei 2（1Shandong Institute of Biological Products, Taian 271000, China;2 Shandong Taibang Biological Products Co. Ltd., Taian 271000 ,China）Abstra

3、ct： In order to establish an accurate and rapid method to detect sodium caprylate during the process of human serum albumin （HSA）, the authors analyzed 20 samples of company T with ether extraction and gas chromatography （GC）. The mean recovery ranged from 97% to 101%, and RSD was less than 2%.The r

4、esults showed that this method was rapid, convenient and accurate, which could meet the quality control during the production of HSA.Key words： sodium caprylate assay; ether extraction ;gas chromatography概述： 長期以來，辛酸鈉廣泛作為血液制品的保護(hù)劑1 2，用以增加白蛋白的穩(wěn)定性， 已被證明是安全可靠的，現(xiàn)行中國藥典三部人血白蛋白中辛酸鈉的定量測定方法為氣相 色譜法，成品質(zhì)量指標(biāo)要求含量為0

5、.1400.180mmol/g蛋白質(zhì)2，由于氣相色譜法樣品預(yù)處 理時(shí)間長，針對(duì)血液制品中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制，無法及時(shí)反映生產(chǎn)狀態(tài)，為車間提供即時(shí)的 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。因此為更好的控制中間品質(zhì)量，服務(wù)于生產(chǎn)，確保成品質(zhì)量，我們對(duì)用乙醚萃取 法檢測人血白蛋白制品中辛酸鈉含量的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證，并與氣相法檢測的結(jié)果進(jìn)行比較， 證明乙醚萃取法結(jié)果的可靠性。材料和方法：2.1待檢樣品：人血白蛋白 T 公司 2013 年生產(chǎn)的制品，從 201301 至 201320 批連續(xù) 20 個(gè)批 次。2.2主要試劑：1 mol/L鹽酸；乙醚（市售分析純）；正丁醇（市售分析純）； 混合溶解液（無水乙醇：吐溫-80：水= 5： 0

6、.5： 94.5）；1%酚酞指示劑；0.01mol/L 氫氧化鈉滴定液。2.3儀器：分液漏斗、島津 GC-14C 氣相色譜儀2.4.方法：2.4.1乙醚萃取法：取純化水19ml,加入250ml分液漏斗中，依次準(zhǔn)確加入20%供試品溶液 lml, lmol/L鹽酸0.2ml，搖勻后加入乙醚15ml及正丁醇lml,振搖約15秒鐘，靜置分層, 棄去水層，醚層用水洗兩次，每次15ml,將醚層轉(zhuǎn)入100ml三角瓶中，用混合溶解液15ml 充分洗滌分液漏斗后一并轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，振搖混勻后加入1%酚酞指示劑23滴，用標(biāo) 準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定至淡粉紅色即為終點(diǎn)，同時(shí)用純化水作空白，并配制標(biāo)準(zhǔn)辛酸鈉水溶液 作回收試

7、驗(yàn)，回收率在97% 1 0 1 %范圍內(nèi)。(V - V ) x M辛酸鈉含量(mmol/g蛋白)=0V xc1V：樣品消耗標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液量，ml；V0：空白消耗標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液量，ml；M：標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液摩爾濃度，mol/L；c： 蛋白濃度， %；V1：供試品取樣量，ml。2.4.2氣相色譜法：參照2010年版中國藥典三部附錄WK辛酸鈉測定法結(jié)果與討論用兩種方法對(duì)20批人血白蛋白制品進(jìn)行了辛酸鈉含量的測定，(結(jié)果見表1)，乙醚萃 取法所測定的20批人血白蛋白的回收率均在97%101%的范圍內(nèi)，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明：兩種 方法最大相對(duì)偏差均不超過2% (氣相色譜法最大允許誤差為2%)，檢測結(jié)果無

8、顯著差異(P V0.05)。由此可見乙醚萃取法與現(xiàn)行的中國藥典第三部附錄VK GC法測定辛酸鈉含量 結(jié)果具有高度的一致性。表 1 兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比批號(hào)乙醚萃取去(mmol/g pr)回收率氣相色譜法測定結(jié)果(mmol/g pr)平均值(mmol/g pr)CV (%)2013010.15598%0.1530.1540.652013020.156100%0.1570.1560.642013030.15999%0.1610.1600.622013040.16099%0.1590.1600.632013050.159101%0.1610.1600.632013060.15599%0.1580.

9、1571.272013070.159100%0.1610.1600.632013080.163101%0.1630.1630.002013090.15798%0.1530.1551.292013100.15899%0.1550.1561.282013110.169101%0.1660.1681.192013120.164100%0.1610.1621.232013130.15899%0.1600.1590.632013140.165101%0.1670.1660.602013150.167100%0.1690.1680.592013160.167101%0.1670.1670.00201317

10、0.170101%0.1720.1710.582013180.16498%0.1650.1640.612013190.173100%0.1690.1711.172013200.161100%0.1650.1631.224.結(jié)論辛酸鈉是人血白蛋白生產(chǎn)過程中加入的穩(wěn)定劑，現(xiàn)行中國藥典三部規(guī)定用GC法 檢測人白成品，辛酸鈉含量每1g蛋白質(zhì)中應(yīng)為140180mmol,由于質(zhì)量指標(biāo)要求范圍較窄， 血液制品生產(chǎn)企業(yè)為確保成品辛酸鈉含量符合規(guī)定，在制品分裝前對(duì)半成品進(jìn)行辛酸鈉含量 測定，而現(xiàn)行中國藥典中規(guī)定的方法，樣品處理時(shí)間過長，不能即時(shí)反映結(jié)果。通過實(shí) 驗(yàn)分析，乙醚萃取法準(zhǔn)確性與可靠性良好，簡便快速，可

11、用于血液制品人血白蛋白中間產(chǎn)品 辛酸鈉含量的質(zhì)量控制，確保成品辛酸鈉含量符合中國藥典的規(guī)定。在檢測過程中應(yīng)注意下列幾點(diǎn)：（1）隨著混合溶解液放置時(shí)間延長，空白耗堿量會(huì)逐漸增高，混合溶解液使用期限不得 超過 2 個(gè)月；（2）萃取過程中要注意振搖的速度和幅度，振搖太輕，萃取不完全，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低， 振搖過度，容易發(fā)生乳化現(xiàn)象，導(dǎo)致結(jié)果偏高；如遇乳化現(xiàn)象，兩相比重相近難以分離時(shí)， 可采用延長靜止時(shí)間或加少量電解質(zhì)（如氯化鈉）破乳，使兩相分離；（3）若溶液呈堿性而產(chǎn)生乳化，加入少量稀硫酸或采用過濾等方法除去；（4）接近終點(diǎn)時(shí)一定要搖勻，避免局部濃度過高造成假終點(diǎn)；（5）每次試驗(yàn)必須用0.04mmol/L的辛酸鈉做回收實(shí)驗(yàn)，回收率在97%101%范圍內(nèi)， 實(shí)驗(yàn)成立，否則實(shí)驗(yàn)不成立。參考文獻(xiàn)：鄒莉，鄒煒，彭良俊.辛酸鈉對(duì)人免疫球蛋白中病毒的滅活效果J.中國生物制品學(xué)雜 志,2012， 25（5）：585-588.Horowitz B, Piet MP, Pri