兩種方法測定辛酸鈉含量的比較2

1、兩種定量測定人血白蛋白中辛酸鈉含量方法的比較李榮貞 1， 趙軍 1 ， 李慶英1，王彬 2，王霞 2，李偉 2（1山東生物制品研究所, 山東 泰安 271000；2 山東泰邦生物制品有限公司 ，山東 泰安 271000）摘要： 目的：建立一種準確性高，簡便快速的方法，對人血白蛋白中間品的辛酸鈉含量進 行質量控制；方法：通過采用氣相法和乙醚萃取法，分析比較T公司20批制品，結果：乙 醚萃取法與氣相法相比，回收率均在97%101%的范圍內，相對誤差小于2%，萃取法與氣 相法差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。結論：此法簡便快速，結果可靠，可應用于中間產品辛 酸鈉含量的測定。關鍵詞：辛酸鈉含量；乙醚萃取

2、法；氣相法Study on two methods of Sodium Caprilate assay determination in Human Serum AlbuminLi nong-zhen1, Zhao jun1, Li qing-ying1, Wang bin2, Wang xia, 2 Li wei 2（1Shandong Institute of Biological Products, Taian 271000, China;2 Shandong Taibang Biological Products Co. Ltd., Taian 271000 ,China）Abstra

3、ct： In order to establish an accurate and rapid method to detect sodium caprylate during the process of human serum albumin （HSA）, the authors analyzed 20 samples of company T with ether extraction and gas chromatography （GC）. The mean recovery ranged from 97% to 101%, and RSD was less than 2%.The r

4、esults showed that this method was rapid, convenient and accurate, which could meet the quality control during the production of HSA.Key words： sodium caprylate assay; ether extraction ;gas chromatography概述： 長期以來，辛酸鈉廣泛作為血液制品的保護劑1 2，用以增加白蛋白的穩(wěn)定性， 已被證明是安全可靠的，現行中國藥典三部人血白蛋白中辛酸鈉的定量測定方法為氣相 色譜法，成品質量指標要求含量為0

5、.1400.180mmol/g蛋白質2，由于氣相色譜法樣品預處 理時間長，針對血液制品中間產品的質量控制，無法及時反映生產狀態(tài)，為車間提供即時的 實驗數據。因此為更好的控制中間品質量，服務于生產，確保成品質量，我們對用乙醚萃取 法檢測人血白蛋白制品中辛酸鈉含量的可靠性進行驗證，并與氣相法檢測的結果進行比較， 證明乙醚萃取法結果的可靠性。材料和方法：2.1待檢樣品：人血白蛋白 T 公司 2013 年生產的制品，從 201301 至 201320 批連續(xù) 20 個批 次。2.2主要試劑：1 mol/L鹽酸；乙醚（市售分析純）；正丁醇（市售分析純）； 混合溶解液（無水乙醇：吐溫-80：水= 5： 0

6、.5： 94.5）；1%酚酞指示劑；0.01mol/L 氫氧化鈉滴定液。2.3儀器：分液漏斗、島津 GC-14C 氣相色譜儀2.4.方法：2.4.1乙醚萃取法：取純化水19ml,加入250ml分液漏斗中，依次準確加入20%供試品溶液 lml, lmol/L鹽酸0.2ml，搖勻后加入乙醚15ml及正丁醇lml,振搖約15秒鐘，靜置分層, 棄去水層，醚層用水洗兩次，每次15ml,將醚層轉入100ml三角瓶中，用混合溶解液15ml 充分洗滌分液漏斗后一并轉入三角燒瓶中，振搖混勻后加入1%酚酞指示劑23滴，用標 準氫氧化鈉溶液滴定至淡粉紅色即為終點，同時用純化水作空白，并配制標準辛酸鈉水溶液 作回收試

7、驗，回收率在97% 1 0 1 %范圍內。(V - V ) x M辛酸鈉含量(mmol/g蛋白)=0V xc1V：樣品消耗標準氫氧化鈉溶液量，ml；V0：空白消耗標準氫氧化鈉溶液量，ml；M：標準氫氧化鈉滴定液摩爾濃度，mol/L；c： 蛋白濃度， %；V1：供試品取樣量，ml。2.4.2氣相色譜法：參照2010年版中國藥典三部附錄WK辛酸鈉測定法結果與討論用兩種方法對20批人血白蛋白制品進行了辛酸鈉含量的測定，(結果見表1)，乙醚萃 取法所測定的20批人血白蛋白的回收率均在97%101%的范圍內，統(tǒng)計學結果表明：兩種 方法最大相對偏差均不超過2% (氣相色譜法最大允許誤差為2%)，檢測結果無

8、顯著差異(P V0.05)。由此可見乙醚萃取法與現行的中國藥典第三部附錄VK GC法測定辛酸鈉含量 結果具有高度的一致性。表 1 兩種方法的實驗結果對比批號乙醚萃取去(mmol/g pr)回收率氣相色譜法測定結果(mmol/g pr)平均值(mmol/g pr)CV (%)2013010.15598%0.1530.1540.652013020.156100%0.1570.1560.642013030.15999%0.1610.1600.622013040.16099%0.1590.1600.632013050.159101%0.1610.1600.632013060.15599%0.1580.

9、1571.272013070.159100%0.1610.1600.632013080.163101%0.1630.1630.002013090.15798%0.1530.1551.292013100.15899%0.1550.1561.282013110.169101%0.1660.1681.192013120.164100%0.1610.1621.232013130.15899%0.1600.1590.632013140.165101%0.1670.1660.602013150.167100%0.1690.1680.592013160.167101%0.1670.1670.00201317

10、0.170101%0.1720.1710.582013180.16498%0.1650.1640.612013190.173100%0.1690.1711.172013200.161100%0.1650.1631.224.結論辛酸鈉是人血白蛋白生產過程中加入的穩(wěn)定劑，現行中國藥典三部規(guī)定用GC法 檢測人白成品，辛酸鈉含量每1g蛋白質中應為140180mmol,由于質量指標要求范圍較窄， 血液制品生產企業(yè)為確保成品辛酸鈉含量符合規(guī)定，在制品分裝前對半成品進行辛酸鈉含量 測定，而現行中國藥典中規(guī)定的方法，樣品處理時間過長，不能即時反映結果。通過實 驗分析，乙醚萃取法準確性與可靠性良好，簡便快速，可

11、用于血液制品人血白蛋白中間產品 辛酸鈉含量的質量控制，確保成品辛酸鈉含量符合中國藥典的規(guī)定。在檢測過程中應注意下列幾點：（1）隨著混合溶解液放置時間延長，空白耗堿量會逐漸增高，混合溶解液使用期限不得 超過 2 個月；（2）萃取過程中要注意振搖的速度和幅度，振搖太輕，萃取不完全，導致實驗結果偏低， 振搖過度，容易發(fā)生乳化現象，導致結果偏高；如遇乳化現象，兩相比重相近難以分離時， 可采用延長靜止時間或加少量電解質（如氯化鈉）破乳，使兩相分離；（3）若溶液呈堿性而產生乳化，加入少量稀硫酸或采用過濾等方法除去；（4）接近終點時一定要搖勻，避免局部濃度過高造成假終點；（5）每次試驗必須用0.04mmol/L的辛酸鈉做回收實驗，回收率在97%101%范圍內， 實驗成立，否則實驗不成立。參考文獻：鄒莉，鄒煒，彭良俊.辛酸鈉對人免疫球蛋白中病毒的滅活效果J.中國生物制品學雜 志,2012， 25（5）：585-588.Horowitz B, Piet MP, Pri