免疫細(xì)胞的分離技術(shù)課件

1、免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/41免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/21免疫細(xì)胞1、概念 直接參與免疫應(yīng)答及與免疫應(yīng)答相關(guān)的所有細(xì)胞。2、分類 單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)：單核細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞（DCs) 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：T 淋巴細(xì)胞 （Th / Tc) B 淋巴細(xì)胞 NK 細(xì)胞 粒細(xì)胞系統(tǒng): 中性粒細(xì)胞 噬酸性粒細(xì)胞 噬堿性粒細(xì)胞免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/42免疫細(xì)胞1、概念免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/22免疫細(xì)胞的分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞亞群的分離免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/43免疫細(xì)胞的分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的

2、分離免疫細(xì)胞的分離技術(shù)20細(xì)胞分離原理細(xì)胞的大小和比重細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞黏附于各種物質(zhì)表面的特性免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/44細(xì)胞分離原理細(xì)胞的大小和比重免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10 一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 Ficoll分層離心法人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC): Monocyte、Lymphocyte。原理：血液中各細(xì)胞成分的比重不同，經(jīng)離心沉淀，即可在分層液與血漿之間獲得比較純的單個(gè)核細(xì)胞，其中淋巴細(xì)胞占90%以上。 免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/45 一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 不同細(xì)胞密度不同 紅

3、細(xì)胞和多形核白細(xì)胞 1.092 單個(gè)核細(xì)胞 1.070 分層液 1.077免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/46不同細(xì)胞密度不同 紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞 1.092一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 Ficoll分層離心法Ficoll分層液：蔗糖聚合物+泛影葡胺，密度1.077+0.001g/L。免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/47一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 二、淋巴細(xì)胞的分離尼龍棉柱法E花環(huán)分離法補(bǔ)體細(xì)胞毒法免疫熒光法 免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/48二、淋巴細(xì)胞的分離尼龍棉柱法免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/1二、淋巴細(xì)胞的分離 尼龍棉柱法原理：B細(xì)胞和單核細(xì)胞具有易黏附的特性，將淋巴細(xì)胞懸

4、液加至尼龍纖維柱上，37 作用12h后，洗脫的為非黏附性的T細(xì)胞。PBMC尼龍纖維棉柱B細(xì)胞單核細(xì)胞T細(xì)胞免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/49二、淋巴細(xì)胞的分離 二、淋巴細(xì)胞的分離 E花環(huán)分離法（純化T細(xì)胞）原理成熟T細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞受體（E受體，CD2分子），可和SRBC形成E花環(huán)，B細(xì)胞則無。 E花環(huán)比重大，沉淀，經(jīng)分離液分離來。 E花環(huán)周圍的綿羊RBC可 用低滲法除去。免疫細(xì)胞的分離技術(shù) 二、淋巴細(xì)胞的分離 三、免疫細(xì)胞亞群的分離免疫磁珠分離法流式細(xì)胞術(shù)免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/411三、免疫細(xì)胞亞群的分離免疫磁珠分離法免疫細(xì)胞的分離技術(shù)202三、免疫細(xì)胞亞群的分離 免疫磁

5、珠分離法原理：將抗體交聯(lián)于磁珠表面形成免疫磁珠 （Immunomagnetic bead，IMB），免疫磁珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連， 在高強(qiáng)度、梯度磁場中達(dá)到細(xì)胞磁性分離的目的。2022/10/412免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離技術(shù)三、免疫細(xì)胞亞群的分離 三、免疫細(xì)胞亞群的分離 免疫磁珠分離法1. 直接法： 抗細(xì)胞表面分子抗體+磁性微球 免疫磁珠+細(xì)胞懸液 與免疫磁珠結(jié)合的細(xì)胞2. 間接法： 第二抗體+磁性微粒 第一抗體+細(xì)胞 特定細(xì)胞免疫細(xì)胞的分離技術(shù) 三、免疫細(xì)胞亞群的分離 免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫細(xì)胞的分離技術(shù)免疫磁珠法分選裝置免疫細(xì)胞

6、的分離技術(shù)免疫磁珠法分選裝置免疫細(xì)胞的分離技術(shù)三、免疫細(xì)胞亞群的分離 流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）FCM將免疫熒光技術(shù)應(yīng)用于流式細(xì)胞儀，對(duì)單個(gè)細(xì)胞的表面標(biāo)志（抗原或受體）進(jìn)行快速、精確的分析和自動(dòng)檢測(cè)，并將不同類型的細(xì)胞分選收集。原理：細(xì)胞經(jīng)熒光染色后，通過高速流動(dòng)系統(tǒng)，細(xì)胞排成單行，逐個(gè)流經(jīng)檢測(cè)區(qū)。當(dāng)細(xì)胞從流動(dòng)室噴嘴處流出時(shí)，超聲震動(dòng)液流，使液流段裂成一連串的均勻小滴，每個(gè)小滴內(nèi)最多含一個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞經(jīng)激光束照射產(chǎn)生熒光和散射光，由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成脈沖信號(hào)，數(shù)據(jù)經(jīng)電腦處理，分辨細(xì)胞類型。免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/417三、免疫細(xì)胞亞群的分離 流式細(xì)胞術(shù)（流式細(xì)胞儀工作原理免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/418流式細(xì)胞儀工作原理免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/218流式細(xì)胞儀免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/419流式細(xì)胞儀免疫細(xì)胞的分離技術(shù)2022/10/219免疫細(xì)胞的分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離Ficoll分層離 心法淋巴細(xì)胞的分離尼龍棉柱法、E花環(huán)分離法、補(bǔ)體細(xì)胞毒法免疫熒光法免疫