實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備培訓(xùn)課件

1、實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備培訓(xùn)課件實(shí)驗(yàn)原理 血液是一種結(jié)締組織（細(xì)胞間質(zhì)）。血液系統(tǒng)是各種重要的免疫細(xì)胞、免疫分子的載體，也是各種免疫事件發(fā)生的場(chǎng)所。組成：1、血漿 血漿蛋白（白蛋白、球蛋白、纖維蛋白原） 脂蛋白、無機(jī)鹽、氧等成分 激素、酶、抗體 細(xì)胞代謝產(chǎn)物等。 2、血細(xì)胞 紅血球、 白血球（有粒白細(xì)胞：中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞和無粒白細(xì)胞：?jiǎn)魏思?xì)胞和淋巴細(xì)胞) 血小板3實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)原理 血液是一種結(jié)締組織（細(xì)胞間質(zhì)）。血液系統(tǒng)是各實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)研究中，要采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液進(jìn)行檢查或分析，故必須掌握血液的正確采集、分離和保存的操作技術(shù)。采血方

2、法的選擇，主要決定于實(shí)驗(yàn)的目的所需血量以及動(dòng)物種類。 用血量較少可刺破組織取毛細(xì)血管的血 當(dāng)需血量較多時(shí)可作靜脈采血（原則：靜脈采血時(shí)，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈)4實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)研究中，要采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液進(jìn)行檢查或分析，故必實(shí)驗(yàn)原理現(xiàn)將采用血方法按動(dòng)物和部位分別加以介紹。 小鼠和大鼠采血方法：割尾采血法、尾靜脈穿刺采血、眼眶后靜脈叢采血、摘眼球法、斷頭采血、頸（股）動(dòng)靜脈采血豚鼠采血法：耳緣剪口采血 、心臟采血 、股動(dòng)脈采血 、背中足靜脈取血 兔采血法：耳靜脈采血 、耳中央動(dòng)脈采血 、心臟取血 、后肢脛部皮下靜脈取血 、股動(dòng)靜脈、頸動(dòng)靜脈取

3、血 、雞采血法 ：翼根靜脈采血、心臟采血、頸靜脈采血5實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)原理現(xiàn)將采用血方法按動(dòng)物和部位分別加以介紹。5實(shí)驗(yàn)血清紅實(shí)驗(yàn)原理家兔采血方法 （1）耳緣靜脈采血： 家兔固定，將耳緣靜脈皮膚上的毛拔去或剪去，75%酒精消毒，用左手食指和中指夾住靜脈近心端，以使其血管怒張拇指和小指夾住耳緣部分，以左手無名指和小指放在耳下作墊，待靜脈充盈后，右手持注射器使針頭由靜脈末端刺入，順血管方向向心端刺約1-1.5cm，放松左手拇指和食指對(duì)血管的壓迫，右手緩慢抽吸注射器，若注射阻力較大，說明針頭沒有刺入靜脈，應(yīng)調(diào)整針頭或重新穿刺；也可以刀片在血管上切一小口，讓血自然流出，滴入盛器內(nèi)，采血完畢，用干

4、棉球按壓止血。6實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)原理家兔采血方法 6實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備（2）兔心臟穿刺取血： 家兔背位固定，在左胸第24肋間剪毛一塊，用75%酒精和碘伏消毒。然后用510ml注射器，在胸骨左緣3-4肋間心尖搏動(dòng)最明顯處作垂直穿刺。注意事項(xiàng)有：動(dòng)作宜迅速，以縮短在心臟內(nèi)的留針時(shí)間和防止血液凝固；如針頭已進(jìn)入心臟但抽不出血時(shí)，應(yīng)將針頭稍微后退一點(diǎn)。在胸腔內(nèi)針頭不應(yīng)左右擺動(dòng)以防止傷及心，肺、7實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備7實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)原理豚鼠采血方法 （1）背中足靜脈取血 固定動(dòng)物，將動(dòng)物腳背面用酒精消毒，找出背中足靜脈后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射針刺入靜脈。采血后，用紗

5、布或脫脂棉壓迫止血。反復(fù)采血時(shí)，兩后肢交替使用。 （2）心臟采血 通常在胸骨左緣的正中，選心跳最強(qiáng)的部位作穿刺。針頭宜稍細(xì)長(zhǎng)些，以免發(fā)生手術(shù)后穿刺孔出血，其操作手法詳見兔心臟采血。8實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)原理豚鼠采血方法8實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血量動(dòng)物種類最大安全采血量（ml）最大致死采血量（ml）小白鼠0.10.3大白鼠12豚鼠510家兔1040狗50300猴15609實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血量動(dòng)物種類最大安全采血量（ml）最大致死采血量血清的制備血清的制備：不加抗凝劑無菌靜脈采血2ml，37自然凝固，待血清開始出現(xiàn)后，放冰箱內(nèi)12小時(shí)或24小時(shí)，離心分離血清（3000rpm

6、，5-10min），得到的上清液即為血清，小心將上清吸出（注意切勿吸出細(xì)胞成分）。血漿的制備：需加抗凝劑（抗凝劑：血液 = 1：9） 無菌靜脈采血2ml（注射器用抗凝劑潤(rùn)洗），將血液加入到有抗凝劑的離心管中顛倒混勻，離心（3000rpm，5-10min）后所得的上清液即為血漿。注意：血清的保存可以在每50ml血清中加1硫柳汞水溶液1ml防腐。10實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備血清的制備血清的制備：不加抗凝劑10實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備11實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備11實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備紅細(xì)胞及懸液制備標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞的制備： 取全血1ml，加等滲鹽水23ml，充分搖勻離心沉淀，棄去上清液，然后再加生理鹽水23ml 按上述方法

7、洗滌，共三次，離心去上清，余下的為壓積紅細(xì)胞。紅細(xì)胞懸液的制備： 2紅細(xì)胞懸液：壓積紅細(xì)胞2滴+新鮮等滲鹽水4ml 5紅細(xì)胞懸液：壓積紅細(xì)胞5滴+新鮮等滲鹽水4ml 10紅細(xì)胞懸液：壓積紅細(xì)胞5滴+新鮮等滲鹽水2ml注意： 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞鹽水懸液臨用前制備，最多存放3天，用檸檬酸葡萄糖溶液（ACD）溶液保存最長(zhǎng)可保存1周12實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備紅細(xì)胞及懸液制備標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞的制備：12實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：豚鼠、兔實(shí)驗(yàn)試劑：血液抗凝劑（1:500u肝素鈉注射液） 生理鹽水實(shí)驗(yàn)器材：5ml注射器、 一次性離心管（5、10、15ml規(guī)格）、 普通吸管、尖吸管、1ml刻度吸管 75%酒精棉球 水平離心機(jī)13實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：豚鼠、兔13實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)步驟1.用75酒精棉球消毒采血部位皮膚2.用5ml注射器分別抽取豚鼠或兔靜脈血2ml豚鼠采血法 ：背中足靜脈取血 心臟采血、兔采血法：耳緣靜脈采血 心臟采血 3.制備血清、紅細(xì)胞（如上述流程）14實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)步驟1.用75酒精棉球消毒采血部位皮膚14實(shí)驗(yàn)血清紅細(xì)注意事項(xiàng)：1、采血部位需要進(jìn)行消毒2、采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；3、注意血清與血漿制備的區(qū)別：抗凝劑的使用4、不同規(guī)格離心管的使用一次性離心管規(guī)格用途15ml血漿、紅細(xì)胞制備的離心10ml放置不同用途的吸管5ml血清制備