羅氏試劑盒說明書 CYFRA 21-1 11867555001v12

1、11867555001V12細胞角蛋白19片段（CYFRA 21-1） 200-07, V 12 中文 5/5 Elecsys 和 cobas e 分析儀11820966 122 100測試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 1010Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601注意：CYFRA 21-1的檢測結果與檢測方法密切相關。因此實驗室結果報告應注明檢測方法。不同檢測方法間的結果不能直接比較，以免引起臨床解釋的錯誤。在療效觀察過程中，如果檢測方法變動，必須使用原檢測方法同時平行測定。主要用途用于體外定量檢測人體血清或血漿

2、中的細胞角蛋白19片段。Elecsys和cobase 免疫分析儀的工作原理是電化學發(fā)光免疫分析“ECLIA”。臨床應用細胞角蛋白是構成上皮細胞間絲狀體亞基的結構蛋白。有二十種不同的細胞角蛋白多肽迄今已經(jīng)被證實。由于其特異的分布模式，適合作為不同腫瘤病理的標志物。完整細胞角蛋白多肽的可溶性較差，但溶于血清中片段可被檢測1,2,3,4 。借助特異性單克隆抗體（KS 19-1和BM 19-21)的識別能夠檢測細胞角蛋白19片段（CYFRA 21-1），這個片段的分子量約30000道爾頓5。CYFRA 21-1主要用于監(jiān)測非小細胞性肺癌（NSCLC）的病程2,5,6。CYFRA 21-1也適用于監(jiān)測橫

3、紋肌浸潤性膀胱癌的病程7 。CYFRA 21-1較好的特異性可鑒別診斷肺部良性疾病（如：肺炎，結節(jié)病，結核病，慢性支氣管炎，支氣管哮喘，肺氣腫）8,9 。個別良性肝臟疾病和腎功能衰竭的病例CYFRA 21-1水平會輕微上升（小于10 ng/mL）。CYFRA 21-1濃度與性別，年齡或吸煙習慣無相關性10，且不受妊娠影響。肺癌的臨床診斷主要根據(jù)臨床癥狀、影像學或內(nèi)窺鏡檢查和外科手術。 肺部不能明確診斷的病灶，如果伴有CYFRA 21-1檢測結果的增高（ 30 ng/mL），預示患原發(fā)性支氣管癌的可能性相當高。 血清高水平的CYFRA 21-1提示腫瘤晚期和預后較差11。血清CYFRA 21-1

4、水平正?；蜉p微上升，不能排除腫瘤存在的可能。 血清CYFRA 21-1水平快速下降到正常范圍內(nèi)提示治療有效。血清CYFRA 21-1水平持續(xù)性保持、輕微改變或緩慢下降提示腫瘤可能切除不完全。在疾病進展過程中，CYFRA 21-1水平的升高往往早于臨床癥狀及影像學檢查。檢測原理雙抗體夾心法，總檢測時間：18分鐘第一次孵育：20l標本、生物素化的細胞角蛋白19單克隆特異性抗體和釕（Ru）a標記的細胞角蛋白19特異性單克隆抗體一起孵育，形成抗原抗體夾心復合物。第二次孵育：添加包被鏈霉素的磁珠微粒進行孵育，復合體與磁珠通過生物素和鏈霉素的作用結合。將反應液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面

5、。未與磁珠結合的物質通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復合體化學發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強度。儀器自動通過2點校正的定標曲線計算得到檢測結果。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三聯(lián)吡啶釕試劑工作溶液M 包被鏈霉素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶6.5ml；包被鏈霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑R1 生物素化的抗細胞角蛋白19抗體（灰蓋），每瓶，10ml；生物素化的單克隆抗細胞角蛋白19抗體（KS 19.1；鼠）濃度1.5mg/L，磷酸緩沖液100 mmol/L，pH 7.2；防腐劑R2 Ru(bpy

6、)32+標記的抗細胞角蛋白19抗體（黑蓋），每瓶，10ml，釕標記的抗單克隆抗細胞角蛋白19抗體（BM 19.21；鼠）濃度2.0mg/L，磷酸緩沖液100mmol/l，pH7.2；防腐劑警告和注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當?shù)胤ㄒ?guī)進行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報告。避免試劑和樣本（樣本、定標液和質控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒（M,R1和R2）為即用型，不能分開使用。試劑相關信息可以通過試劑條形碼閱讀獲取。儲存及穩(wěn)定性存放于28。請垂直擺放Elecsys CYFRA 21-1試劑盒，確保儀器的自動攪拌器能夠完全混勻磁珠微

7、粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開封試劑，2812周放置分析儀MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e 601上8周放置分析儀Elecsys 2010 和 cobas e 411上8周放置分析儀Elecsys 1010上4周（試劑交替放置于冰箱和20-25的分析儀中，持續(xù)開蓋的情況下至多20小時）樣本的采集和準備僅以下羅列的樣本類型通過實驗符合檢測要求。血清樣本須用標準試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰、肝素鈉、K3-EDTA和枸櫞酸抗凝的血漿都適用。使用枸櫞酸抗凝血漿檢測結果需+10糾正。標準：回收率90-110%，斜率0.9-1.1，截距0.95。穩(wěn)定性：

8、 2-8可保存4周；-20可保存6個月12，只可一次凍融。 建議樣本在檢測前使用回旋混勻器混勻（時間不超過5分鐘）。使用振蕩混勻器混時間不超過5秒?；靹驎r間過長會導致檢測結果偏低。被唾液污染的樣本會導致結果假性增高12。選擇合適的試管進行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質，某些情況下會影響檢測結果。如果使用原始管進行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應遵循生產(chǎn)商所提供的指導。有沉淀的樣本檢測前必須先作離心處理。避免使用熱滅活的樣本。添加疊氮化合物的樣本和質控品均不能使用。檢測前，樣本、定標液及質控品須室溫平衡(20-25)。由于蒸發(fā)因素的影響，樣本

9、、定標液及質控品在分析儀上的檢測必須2小時內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號11820974, CYFRA 21-1 CalSet , 規(guī)格4 x1 ml貨號11776452, PreciControl Tumor Marker，規(guī)格2 x3 ml，分別為PreciControl Tumor Marker 1和2 貨號11732277，Diluent Universal，2*16 ml 樣本稀釋液，或者貨號03183971. Diluent Universal，2*36 ml樣本稀釋液實驗室基礎設備Elecsys 1010/2010 、MODULAR ANAL

10、YTICS E170或cobas e分析儀Elecsys 1010/2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號11662988, ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液貨號11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,測量池洗液 貨號11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液貨號11933159, SysClean 適配器 貨號11706829, Elecsys 1010分析杯, 12 x 32反應管或者貨號11706802, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反應管貨號11706799, E

11、lecsys 2010 分析吸頭, 30 x 120移液管吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號04880340,ProCell M, 2 x 2 L 系統(tǒng)緩沖液貨號04880293, CleanCell M, 2 x 2 L測量池洗液 貨號03023141, PC/CC杯, 12個用于在檢測前預熱Procell M及Cleancell M。貨號03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。貨號12102137,反應杯/吸頭 組合裝84反應杯/吸頭 組合裝48盒,廢物袋 貨

12、號03023150, WasteLiner,廢物袋 貨號03027651,系統(tǒng)清潔適配器 M所有分析儀需要：貨號11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 檢測要優(yōu)化檢測性能，請遵照本說明書中有關分析儀的相關指導，并參照分析儀操作手冊。試劑使用前分析儀自動攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關信息可通過條形碼自動讀取，在特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)

13、。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動調(diào)節(jié)試劑溫度和開、關各試劑盒瓶蓋。Elecsys 1010 分析儀: 將冷藏試劑室溫平衡至20-25C左右，放置分析儀的試劑盤（20- 25C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。使用前后手動開關試劑盒瓶蓋。使用后保存于2-8C冰箱。定標溯源性：該檢測方法可溯源至CYFRA 21-1 Enzymun測量程序。每套Elecsys CYFRA 21-1試劑的條碼標簽上均含有其批特異的定標信息。使用Elecsys CYFRA 21-1定標液可調(diào)整預設置的定標曲線。定校頻率：新批號試劑必須進行定標（新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時）。以下情況建議重新進行定標：MODULAR ANALY

14、TICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析儀:使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）Elecsys 1010 分析儀:每盒試劑7天后（室溫 20-25C）3天后（室溫 25-32C）所有儀器根據(jù)需要：如失控。質控可使用Elecsys PreciControl Tumor Marker1和2進行質量控制。其他合適的質控品也適用。各濃度質控至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒或定標后也須進行質控。每個實驗室可根據(jù)各自的情況設定合適的控制限和質控周期。質控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個試驗室必須采取相應的糾正措施。計算儀器會自動計算

15、每個樣本中的分析物濃度，單位是ng/mL或g/L，干擾因素檢測結果不受黃疸（膽紅素1112mol/L或65 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白0.93mmol/L或1.5 g/dL）, 脂血(脂肪乳劑 1500mg/dL)和生物素50 ng/mL或 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時后采集樣本。檢測結果不受類風濕因子影響（RF1500 IU/ml）。CYFRA 21-1檢測不受hook效應影響（濃度2000 ng/mL）體外對28種常用藥物進行試驗未發(fā)現(xiàn)會影響檢測結果。由于檢測試劑中含有單克隆鼠抗體，因此某些接受單克隆鼠抗體治療或診斷的患者樣本檢測結果可能有誤。少數(shù)病例中高濃度的釕抗體會影響

16、檢測結果。試劑添加的適宜成份可將這些影響降到最低。少數(shù)病例中極高濃度的鏈霉素抗體會影響檢測結果。作為診斷指標，必須結合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結果。檢測范圍0.100-500 ng/mL（通過最低檢出限和廠商定標曲線的最高值確定）。低于檢出限的值報告500ng/mL。(1：2稀釋結果可報告至1000 ng/mL)稀釋高于檢測范圍的標本可用通用稀釋液（Elecsys Diluent Universal）稀釋。建議1:2稀釋（MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 1010/2010 和cobas e 分析儀可以自動稀釋，也可以手工稀釋）。稀釋的標本C

17、YFRA 21-1濃度必須高于250 ng/mL。如用手工稀釋，結果應乘稀釋倍數(shù)。如果是儀器自動稀釋，MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 1010/2010 和cobas e儀器軟件會自動計算結果。期望值cutoff值為3.3ng/mL。通過一組良性肺部疾病患者（526例）的調(diào)查數(shù)據(jù)，取95 置信區(qū)間決定的。CYFRA 21-1濃度升高可見于急性肺炎，肺結核和間質性肺部疾病的患者。濃度高于參考范圍也可見于肝硬化和腎衰竭7。每個實驗室應通過實驗確定參考范圍的適用性，必要時建立本實驗室的參考范圍。特殊的性能指標試劑在分析儀上的性能試驗數(shù)據(jù)如下。各實驗室由于具體情況不同，

18、所得出的數(shù)據(jù)可能會稍有差異。精密度應用Elecsys試劑盒、人混合血清樣本和質控品驗證重復性，按照NCCLS的EP5-A執(zhí)行：每天6次，共10天 (n=60)。批內(nèi)精密度由 MODULAR ANALYTICS E170分析儀完成，n=21下面是獲得的結果。分析靈敏度（最低檢出限） 0.10 ng/mL最低檢出限指區(qū)別于零濃度的分析物最低檢測濃度。最低檢出限是最低濃度標準品+2SD得到的濃度（廠商定標品1+2SD，批內(nèi)精密度，n=21）。方法學比較使用臨床標本比較Elecsys CYFRA 21-1檢測（y）和Enzymun檢測CYFRA 21-1方法（x），相關性數(shù)據(jù)如下：標本數(shù)n=76Pas

19、sing/Bablok13 線性回歸y = 0.98x - 0.30 y = 0.95x -0.10T = 0.941 r = 0.993樣品比較的濃度范圍約為1.044 ng/mL。分析特異性抗細胞角蛋白19單克隆抗體識別細胞角蛋白19肽片段。與細胞角蛋白8和18不存在交叉反應。參考文獻1. Bodenmueller H, Ofenloch-Hhnle B, Lane EB, Dessauer A.Lung Cancer associated Keratin 19 Fragments:Development and Biochemical Characterization of the ne

20、w Serum AssayEnzymun-Test CYFRA 21-1. Int J Biol Markers 1994;9:75-81.2. Bodenmueller H. The biochemistry of CYFRA 21-1 and other cytokeratin-tests. Scand J Clin Lab Invest 1995;55,Suppl 221:60-66.3. Stieber P, Dienemann H, Hasholzner U, Mueller C, Poley S,Hofmann K, Fateh-Moghadam. Comparison of Cy

21、tokeratin Fragment 19 (CYFRA 21-1) Tissue Polypeptide Antigen (TPA) and Tissue Polypeptide Specific Antigen (TPS) as Tumor Markers in Lung Cancer. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:689-694.4. Bodenmueller H, Donie F, Kaufmann M, Banauch D. The tumor markers TPA, TPS TPACYK and CYFRA 21-1 react di

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