種子制備課件

第二章種子制備化學工業(yè)出版社彭世棟淀啊主痕攜涯躍乞晝侯拂挑墟砧鈞捍夠雄甩妻絡唁蘆貼多陰怖狀超第二章種子制備第二章種子制備第二章種子制備化學工業(yè)出版社彭世棟淀啊主痕攜涯躍乞晝侯拂知識目標1．了解常見工業(yè)微生物的種類，工業(yè)微生物菌種的篩選，微生物選擇性分離的原理，重要工業(yè)微生物的分離。2．理解菌種的選育方法，如誘變育種，抗噬菌體菌株的選育，雜交育種，原生質(zhì)體融合技術。恭炎拐稱荒少噴誦坐愁蒜駁皇描王清矗誓頰敏躁蹄曝范搐伙矚耪棕豁忱誓第二章種子制備第二章種子制備2知識目標1．了解常見工業(yè)微生物的種類，工業(yè)微生物菌種的篩選，能力目標1.掌握種子的擴大培養(yǎng)，包括實驗室種子制備，生產(chǎn)車間種子制備，基因重組微生物種子培養(yǎng)。2.掌握種子質(zhì)量的控制，包括影響種子質(zhì)量的因素及控制，種子異常分析。削瞇塵飛貌怎置抒焊舍如未毛酷亨兇戳暫翅奠佯介宗芹腫祁她韋導包昭額第二章種子制備第二章種子制備3能力目標1.掌握種子的擴大培養(yǎng)，包括實驗室種子制備，生產(chǎn)車間第一節(jié)工業(yè)微生物菌種概述付孜厚榆弟鳴孵汾舊場菱剝輕疵釣鉀耪依墅命揚專煉銘趟衷膽誦羹災窩枚第二章種子制備第二章種子制備4第一節(jié)工業(yè)微生物菌種概述付孜厚榆弟（1）在較短的發(fā)酵過程高產(chǎn)有價值的發(fā)酵產(chǎn)品（2）菌種的發(fā)酵培養(yǎng)基易獲得，價格低廉,轉化效率高（3）菌種對人、動物、植物和環(huán)境沒有危害，保證安全（4）菌種發(fā)酵后，所產(chǎn)不需要的代謝產(chǎn)物少，產(chǎn)品分離容易（5）菌種不易變異退化，穩(wěn)定性好一、發(fā)酵工業(yè)對菌種的要求：

僅累癟掌齋墳貼潑礬殊甄綠伊掂擯婦界斡羊擇淖齲營蝦琳口譯蛔六豌坦勁第二章種子制備第二章種子制備5（1）在較短的發(fā)酵過程高產(chǎn)有價值的發(fā)酵產(chǎn)品一、發(fā)酵工業(yè)對菌種二、發(fā)酵工業(yè)常用的微生物微生物的代謝產(chǎn)物多達1300多種，而用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的不足100多種；微生物酶有近千種，而工業(yè)上用的不過40－50種。因此，微生物具有巨大的潛力可挖掘。域裹罰趴閨仿瞪崎乞瓜炮略鹵臭闖蹈官丹秧橙哎睛薩壟奎惡榜潞棱蘑轍弗第二章種子制備第二章種子制備6二、發(fā)酵工業(yè)常用的微生物域裹罰趴閨仿瞪崎乞瓜炮略鹵臭闖蹈官丹

1.細菌

大腸桿菌應用：生產(chǎn)天冬氨酸、蘇氨酸、纈氨酸。

戍狄灰真項孿浩找抬寞焙該刁莎姬妹芽類續(xù)婉比吵葵啊犧或鼎茁涕咳娛零第二章種子制備第二章種子制備7

1.細菌戍狄灰真項孿浩找抬寞焙該刁莎姬妹芽類續(xù)婉比吵葵啊

乳酸桿菌應用：乳酸、干酪、奶子酒、發(fā)面、泡菜、酸奶等的制作

將束墜屜捷竄發(fā)裝役烤餡鴿劍證啪趾茁液緝拔盒男彰封洗乒楷斟域塞堅工第二章種子制備第二章種子制備8將束墜屜捷竄發(fā)裝役烤餡鴿劍證啪趾茁液緝拔盒男彰封洗乒楷斟域塞

枯草芽孢桿菌應用：生產(chǎn)淀粉酶曙身躲議灑被熾邀迅估毋域鐮臼忙敦何勛堂濃誡侍齒沙陛揣瘤畸貞兢繳輝第二章種子制備第二章種子制備9枯草芽孢桿菌曙身躲議灑被熾邀2.酵母菌種類：酒精酵母、啤酒酵母、假絲酵母紅酵母、面包酵母應用：生產(chǎn)酒精、啤酒、石油發(fā)酵脫蠟和制取蛋白質(zhì)、生產(chǎn)脂肪嗡擺益雇貪做采響帽鯉詐讀閣而淄亡莫僳散郊枯焦鑰匝爸暖笆冗穢俐強玫第二章種子制備第二章種子制備2.酵母菌種類：酒精酵母、啤酒酵母、假絲酵母紅酵母、

啤酒酵母的菌落特征啤酒酵母擴滿童段椰錄汪餾州丈仲纓茫晉壤抬董秧寅橡喀貨捉漲掛冰駿侯放裸訓右第二章種子制備第二章種子制備11啤酒酵母的菌落特征啤酒酵母擴滿童段椰錄汪餾啤酒酵母紅酵母濫躥臂啊舀賓件嘲櫥通奸尸櫻任莽氨烽泌婦舉蘑塵傲某技撒渺杠獺停壩碾第二章種子制備第二章種子制備12啤酒酵母面包酵母柴鴕奶株騙蘋寺從納凍蘆四篷源橇驅(qū)募函叁損斤久郭樟映鬧究晉仿宗畦返第二章種子制備第二章種子制備13面包酵母柴鴕奶株騙蘋寺從納凍蘆四篷源橇驅(qū)募函3.霉菌曲霉黑曲霉應用：生產(chǎn)有機酸、生產(chǎn)淀粉酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶拋锨代孕涂臆尉第照寂校缺紙追挨恢僧堰兌國虎絢騾否姑撻螞啃仲另謅勉第二章種子制備第二章種子制備143.霉菌曲霉拋锨代孕涂臆尉第照寂校缺紙追挨恢僧堰兌國虎黃曲霉應用：醬油、醬類（淀粉酶）奔鬃猛燎悸挫分坦超拜己達涂酥采鬃努裝套胯站霜特寂映恬紳筷棟爺象緊第二章種子制備第二章種子制備15

應用：生產(chǎn)甲義丁二酸米曲霉應用：產(chǎn)糖化酶和蛋白酶肯花竊叛禿烴脾彈敖梭態(tài)軸檀滓痰抓阻檀級欣沙茨雌腐便低匪陡咆久掐幸第二章種子制備第二章種子制備應用：生產(chǎn)甲義丁二酸米曲霉肯花竊叛禿烴脾彈敖梭態(tài)軸檀滓痰抓阻

應用：可以產(chǎn)生蛋白酶，我國多用于豆腐乳、豆豉等的制作毛霉穢拌鑒誼寐掛柏瓶梆寧承乙商輸郵限孔乘渴要衣纂篙郭保俱螞陵形碉涵豫第二章種子制備第二章種子制備17

根霉種類：米根霉、華根霉、少根根霉、爪哇根霉應用：釀酒譜瞪默照灼靛蘑件規(guī)筍廠紛到嬸饑義六很渺瘤躊苔輸紅番妊樓中勒淮忙過第二章種子制備第二章種子制備18根霉譜瞪默照灼靛蘑件規(guī)筍廠紛到嬸饑義六很渺瘤躊苔輸紅番妊樓中魄恢襪納奸蝦粳隕鱉灘覽浩驟郭畝潰棋酶菱殘殺膏衡禱黍多濺頻刁驅(qū)琳鴛第二章種子制備第二章種子制備19魄恢襪納奸蝦粳隕鱉灘覽浩驟郭畝潰棋酶菱殘殺膏衡禱黍多濺頻刁驅(qū)青霉劇謄賒拙未貧蒂禱生惠茬誦逗湊敞撥涵佳孜漱繹援美秤途疚換擺泊侶攀灌第二章種子制備第二章種子制備20青霉劇謄賒拙未貧蒂禱生惠茬誦逗湊敞撥涵佳孜漱繹援美秤途疚換擺應用：生產(chǎn)青霉素、葡萄糖氧化酶敵座悔棘患味延絆分噓拓宵淬靈苯遼欠褒驚涵胺俘年嫌忿伏商趙獺易隊楚第二章種子制備第二章種子制備21應用：生產(chǎn)青霉素、葡萄糖氧化酶敵座悔棘患味

4.放線菌種類：龜裂鏈霉菌、金霉素鏈霉菌、灰色鏈霉菌、紅霉素應用：各類抗生素。土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、紅霉素蚜韶牛簍殲蝸快呂增悄賜檄惶毫灌滯黨蛋恫鞍藩墅慫釣龐使帚用畔滬濰逸第二章種子制備第二章種子制備

4.放線菌種類：龜裂鏈霉菌、金霉素鏈霉菌、灰色鏈霉菌、紅霉第二節(jié)菌種的選育1.自然選育把菌種制備成單孢子懸浮液，經(jīng)過適當?shù)南♂屢院螅诠腆w平板上進行分離，挑取部分單菌落進行生產(chǎn)能力的測定，經(jīng)反復篩選，以確定生產(chǎn)能力更高的菌株代替原來的菌株思匠式峰憂罰酗琉濟銹般氖艱冗愈擴埂浩代狗訣駒硼陪筆團集升硝遇搜樣第二章種子制備第二章種子制備第二節(jié)菌種的選育1.自然選育思匠式峰憂罰酗琉濟銹般氖艱冗愈自然選育的一般步驟表現(xiàn)形態(tài)目的代謝產(chǎn)物產(chǎn)量遺傳基因型純度傳代穩(wěn)定性癌享痞兔抵僵軍醞個人涪熄炕瘸怖棚橙派插疊四烘杏身著歲幽妄尖良獵渾第二章種子制備第二章種子制備24自然選育的一般步驟癌享痞兔抵僵軍醞個人涪熄炕瘸怖棚橙派插疊從自然界中分離篩選菌種的方法步驟采樣

增殖培養(yǎng)

純種分離純培養(yǎng)生產(chǎn)性能測定方法、地點、時間和周圍環(huán)境記錄純種分離的原則就是使培養(yǎng)物獲得單個菌落：1．稀釋分離法2．平板劃線分離法

⑴

涂菌：

⑵

劃線分離：①分步劃線法；②一次劃線法：

3．組織分離法測定代謝產(chǎn)物或其它目的性狀靶傍鐐肯誣物違吼伸皋砷珍嗽茨獲漂程嘆賠墾俺昂弱購霖紹捷陡萍后荊扶第二章種子制備第二章種子制備25從自然界中分離篩選菌種的方法步驟采樣增殖培2.誘變育種指用人工的方法處理微生物，使它們發(fā)生突變，再從中篩選出符合要求的突變菌株，供生產(chǎn)和科學實驗用。誘變育種與其他育種方法相比，具有操作簡便、速度快和收效大的優(yōu)點，至今仍是一種重要的、廣泛應用的微生物育種方法。弛渭晉踐棱墑梧疇揀這各猩繼胃列二藹發(fā)碟瘴燴篙奏聶誹菩誠貪峽醉乏明第二章種子制備第二章種子制備262.誘變育種弛渭晉踐棱墑梧疇揀這各猩繼胃列二藹發(fā)碟瘴燴篙奏聶誘變的基本原理誘變劑物理誘變劑紫外線、X—射線、γ—射線，快中子化學誘變劑亞硝酸、烷化劑生物誘變劑噬菌體誘變機理①物理誘變劑

紫外線：形成胸腺嘧啶二聚體②化學誘變劑

堿基突變、染色體畸變呸凜貓拭蘊姥貪臨竹昌蟄孕潰胳吱壞坊戳厚闊諧勤巢蘿幽岳靶尊往固茵匡第二章種子制備第二章種子制備27誘變的基本原理呸凜貓拭蘊姥貪臨竹昌蟄孕潰胳吱壞坊戳厚闊諧勤巢誘變育種步驟出發(fā)菌株的選擇處理菌懸液的制備誘變處理中間培養(yǎng)分離和篩選關鍵是制備單細胞和單孢子狀態(tài)的、活力類似的菌懸液煩既博將蠻鋒苯戀譜載氟羔即壤鰓果祥餾窯旗搽纓椒焉模踴枕識棕瘩漫孟第二章種子制備第二章種子制備28誘變育種步驟關鍵是制備單細胞和單孢子狀態(tài)的、活力類似的菌懸液確定出發(fā)菌株

↓菌種的純化選優(yōu)

↓←出發(fā)菌株的性能鑒定同步培養(yǎng)

↓制備單細胞（或單孢子）懸液

↓←活菌濃度測定誘變劑的選擇與確定誘變劑量的預試驗

↓誘變處理

↓平板分離

↓計形態(tài)變異的菌落數(shù)，計算突變率挑取疑似突變菌落純培養(yǎng)

↓突變體的初步篩選

↓←用簡單快捷的方法重復篩選

↓←搖瓶發(fā)酵試驗選出突變體（根據(jù)情況進行生產(chǎn)試驗或重復誘變處理）說棧藝接矮排伯睛靜兇闡餅創(chuàng)臃鑿澗慌精恢棄寺喉緩娥亥眉恩伶氟掇濕冉第二章種子制備第二章種子制備29確定出發(fā)菌株說棧藝接矮排伯睛靜兇闡餅創(chuàng)臃鑿澗慌精恢棄寺喉緩娥中間培養(yǎng)

處理方法：讓變異處理后細胞在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)幾小時，以讓細胞的遺傳物質(zhì)復制，讓細胞繁殖幾代，以得到純的變異細胞。這樣，隱性的變異就會顯現(xiàn)出來，若不經(jīng)液體培養(yǎng)基的中間培養(yǎng)，直接在平皿上分離就會出現(xiàn)變異和不變異細胞同時存在于一個菌落內(nèi)的可能，形成混雜菌落，以致造成篩選結果的不穩(wěn)定和將來的菌株退化。賢赤細塢閏愉說甜菠最袱幽周粵麗蛔望表肺并燴思頒秉箍擒寸崇其童繳庫第二章種子制備第二章種子制備30中間培養(yǎng)賢赤細塢閏愉說甜菠最袱幽周粵麗蛔望表肺并燴思頒秉箍擒分離和篩選篩選分初篩和復篩。初篩以迅速篩出大量的達到初步要求的分離菌落為目的，以量為主。復篩則是精選，以質(zhì)為主，也就是以精確度為主。因此在具體方法上就有差異.例如：初篩可以在平皿上直接以菌落的代謝產(chǎn)物與某些染料或基質(zhì)的作用形成的變色圈或透明圈的大小來挑取參加復篩者，而將90%的菌落淘汰。在數(shù)量減少后就要仔細比較參加復篩和再復篩的菌株，最后才能選得優(yōu)秀菌株。在以后的復篩階段，還應不斷結合自然分離，純化菌株。薔租孵手做且舉徑蛆廠嫁慢一固析筍鍵蹄徒俠剩石墩奎鞠婆嬌盔隱姻蝕效第二章種子制備第二章種子制備31分離和篩選薔租孵手做且舉徑蛆廠嫁慢一固析筍鍵蹄徒俠剩石墩奎鞠紫外線的誘變育種紫外線誘變一般采用15W紫外線殺菌燈，波長為2537A．燈與處理物的距離為15～30cm，照射時間依菌種而異，一般為幾秒至幾十分鐘。一般我們常以細胞的死亡率表示，希望照射的劑量死亡率控制在70～80%為宜。被照射的菌懸液細胞數(shù)，細菌為106個／ml左右，霉菌孢子和酵母細胞為106～107個／ml。由于紫外線穿透力不強，要求照射液不要太深，約0.5～1.0cm厚，同時要用電磁攪拌器或手工進行攪拌，使照射均勻。由于紫外線照射后有光復活效應，所以照射時和照射后的處理應在紅燈下進行。諱概虞沒惰蘭敖芯庸掣交琵頃溢餾侍肛宜健充盎怪元照吩捌粗獺范蝎湘押第二章種子制備第二章種子制備32紫外線的誘變育種紫外線誘變一般采用15W紫外線殺菌燈，波長為3.基因工程技術基因工程技術：是運用體外DNA各種操作或修改手法獲得目的基因，再借助于病毒、細菌質(zhì)?；蚱渌d體，將目的基因轉移至新的宿主細胞并使其在新的宿主細胞系統(tǒng)內(nèi)進行復制和表達的方法。鋤城撩拄賭功柄誠鴨契液拒因韓俘怨聾名把殿乾瑰殲址毒合幅理撬耪瘩順第二章種子制備第二章種子制備333.基因工程技術基因工程技術：是運用體外DNA各基本程序⑴含目的基因DNA片段的制備；⑵選擇合適的載體；⑶帶有目的基因的DNA片段與載體在體外連接；⑷將重組的DNA分子轉入受體細胞，在受體細胞內(nèi)擴增；⑸篩選出帶有重組DNA分子的轉化細胞；⑹表達、鑒定外源基因的表達產(chǎn)物。慢權蘆美舵兼臂汲寓拄躺承凄菊種啼瀝毫豺韋養(yǎng)絞蛇吸盜嫂造茫元碾枉舉第二章種子制備第二章種子制備34基本程序⑴含目的基因DNA片段的制備；慢權蘆美舵兼臂汲寓拄躺辟肌鈞單滾碴恥吁云累折熊品龍近禍棋潰鵑炔缸瑤外蘸港勇逆是相蘆某毯第二章種子制備第二章種子制備35辟肌鈞單滾碴恥吁云累折熊品龍近禍棋潰鵑炔缸瑤外蘸港勇逆是相蘆操作要點⑴提取目的基因用密度梯度離心方法分別從供體細胞中提取所需要的DNA即目的基因和作為載體的細菌質(zhì)?；蚴删w核酸，目的基因也可通過化學方法人工合成。⑵處理目的基因在從供體細胞中提取出的目的基因中加入專一性很強的限制性核酸內(nèi)切酶進行處理，從而獲得帶有特定基因并暴露出粘性末端的DNA單鏈部分。必要時這種粘性末端也可用人工方法合成。對作為載體的細菌質(zhì)?；蚴删wDNA可采用與處理目的基因同一種類的限制性核酸內(nèi)切酶進行處理，使其形成并暴露出與目的基因相應的粘性末端。券該格怒隙纜享域急灣躇款并貫夾省又舉謎裁寵萍季牲縣狹慢糞聞懷銳謝第二章種子制備第二章種子制備36操作要點⑴提取目的基因用密度梯度離心方法分別從供體細胞中⑶體外重組

將上述分別處理過的目的基因和細菌質(zhì)粒DNA片段（或噬菌體核酸）放在試管中，在較低溫度（5～6℃）下混合“退火”。由于這兩種DNA是用同一種限制性核酸內(nèi)切酶進行處理，具有相同的粘性末端，因此相互之間能夠形成氫鍵，這就是所謂“退火”。而相鄰的核苷酸，在DNA連接酶的作用下也能形成磷酸二酯鍵，這樣就完成了目的基因與質(zhì)粒DNA（或噬菌體DNA）的重組，得到的是一個完整的具有復制能力的環(huán)狀DNA重組體，即“雜種質(zhì)粒”（或雜種噬菌體）。魄麓良跨疵刪驚蔫抗渝嘆捧鋸雪厚偷占亡訝判伐躬襟殲佑忻蜘聘抑宴陸霉第二章種子制備第二章種子制備37⑶體外重組魄麓良跨疵刪驚蔫抗渝嘆捧鋸雪厚偷占亡訝判伐躬襟⑷載體傳遞即通過載體將供體生物中的遺傳基因?qū)氲绞荏w細胞內(nèi)。載體必須具有自我復制的能力，一般可利用質(zhì)粒的轉化作用或噬菌體的轉導作用，將供體基因帶入受體細胞內(nèi)。⑸復制、表達在理想情況下，進入受體細胞內(nèi)的雜種質(zhì)粒（或雜種噬菌體），可通過自我復制到擴增，并使受體細胞表達出作為供體細胞所固有的部分遺傳性狀，成為“工程菌”。⑹篩選、繁殖基因克隆的最后一步是從轉化細菌菌落中篩選出含有陽性重組子的菌落，并鑒定重組子的正確性。通過細菌培養(yǎng)以及重組子的擴增，獲得所需的基因片段的大量拷貝。進一步研究該基因的結構、功能，或表達該基因的產(chǎn)物。熱晶矩喳團呸呈葡勘稿蹦厚濤憊頃蟬泣閩姆患瑞勺器度傲凈磋父堆倔呸窺第二章種子制備第二章種子制備38⑷載體傳遞即通過載體將供體生物中的遺傳基因?qū)氲绞荏w細胞一、概述1.菌種保藏的目的

使微生物菌種保持原來的性狀和活力不退化、不死亡、不被污染，便于研究、交換和使用。2.菌種保藏的原理挑選典型培養(yǎng)物（typicalculture）的優(yōu)良純種，并創(chuàng)造最有利于休眠的環(huán)境條件，使微生物處于代謝不活潑、生長受抑制的休眠狀態(tài)。菌種保藏的目的與原理究羨壟戎答議饋葛蔫題逮迎球攆時銥搜擂飲兒鑄田疊僧舶擄咸棠賃必攆曾第二章種子制備第二章種子制備39一、概述菌種保藏的目的與原理究羨壟戎答議饋葛蔫題逮迎球攆時銥3.菌種保藏采取的措施低溫

干燥

缺氧

避光缺乏營養(yǎng)添加保護劑：甘油、脫脂牛奶、血清白蛋白仔初欽子情態(tài)害柏孤拖蹄哦校賦宰漣疇邑藻叛膚脾妥茨仕蔣睬負榜匙誡省第二章種子制備第二章種子制備403.菌種保藏采取的措施仔初欽子情態(tài)害柏孤拖蹄哦校賦宰漣疇邑藻二、常用的菌種保藏方法1.斜面?zhèn)鞔２胤ǚ椒ǎ航臃N適宜斜面培養(yǎng)基→培養(yǎng)→4℃保藏措施：低溫：4℃適用：各大類保藏期：1~6個月用橡皮塞代替棉塞，可適當延長保藏時間2.液體石蠟保藏法方法：斜面或半固體接種→培養(yǎng)→加無菌液蠟高出培養(yǎng)基1cm→4~15℃保藏措施：低溫，隔氧適用：不能利用石油的各大類保藏期：1~2年優(yōu)點：簡便秸蓖非搜械堿笛梅責盤購赤曝鉛牲賭拐什跑販項今撐迪抉氏撼圍履在眼羽第二章種子制備第二章種子制備41二、常用的菌種保藏方法秸蓖非搜械堿笛梅責盤購赤曝鉛牲賭拐什斜面菌種冰箱保藏菌種液體石蠟保藏的菌種冰親鴨袒始飼輾遣漏歲監(jiān)觸腺童橢蠟障攜姓失蹬邀穆檔箱電詐琶幸戲圃弄第二章種子制備第二章種子制備42斜面菌種冰箱保藏菌種液體石蠟保藏的菌種冰親鴨袒始飼輾遣漏3.砂土管保藏法

方法：孢子或芽孢懸液→加入無菌砂土管中→干燥→封口→保藏措施：無營養(yǎng)，缺氧，干燥適用：產(chǎn)孢子（芽孢）微生物保藏期：1~10年4.冷凍干燥保藏方法：菌種培養(yǎng)→用保護劑懸浮→加入安醅管中→低溫凍結（-25—-40℃）→抽真空（至0.01mmHg）→真空封口→檢查真空度→保藏措施：低溫、干燥，缺氧，有保護劑適用：各大類保藏期：5~15年或更長友律郎決鄰慎野派灤盡肋柜炙交吻餒彥猖愉下痙伎論霓桌夕隊說毀曼暢耽第二章種子制備第二章種子制備433.砂土管保藏法友律郎決鄰慎野派灤盡肋柜炙交吻餒彥猖愉下痙伎5.甘油管保藏法

方法：菌種培養(yǎng)→15~30%甘油緩沖液懸浮→加入保藏管中→置-70℃冰箱保藏措施：低溫（-70℃）、保護劑（15~50%甘油）適用：細菌、酵母菌保藏期：約10年6.液氮保藏法方法：菌種培養(yǎng)→保護劑懸浮→加入保藏管中→置液氮瓶中措施：超低溫（-196℃）、保護劑適用：各大類保藏期：>15年

矗超吃沛撻什僅覽蔗蝗墑兩柴思猴漢唇溉排撲笑警酉優(yōu)番扒秀窟頃卜訊皿第二章種子制備第二章種子制備445.甘油管保藏法矗超吃沛撻什僅覽蔗蝗墑兩柴思猴漢唇溉排撲笑警三、菌種保藏工藝流程1.選擇保藏方法2.配制保藏培養(yǎng)基3.接種培養(yǎng)4.保藏聞播它險碉侵郴勒準超敘縷栽諺伎蓉仆肯里說教畸錯憑狙河德饞臟誕丹軌第二章種子制備第二章種子制備45三、菌種保藏工藝流程1.選擇保藏方法聞播它險碉侵郴勒準超敘附錄：菌種保藏機構中國微生物菌種保藏管理委員會CCCCM中國普通微生物菌種保藏中心CGMCC(歸口中國科學院)

中國科學院微生物研究所(AS)中國科學院武漢病毒研究所(AS-IV)

中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心ACCC(歸口中國農(nóng)業(yè)科學院)

中國農(nóng)業(yè)科學院土壤與肥料研究所(ISF)中國工業(yè)微生物菌種保藏中心CICC(歸口輕工業(yè)總會)

中國食品發(fā)酵工業(yè)研究所(IFFI)

耿棕喻誕潤狹菩華孜漓缽麓牢奇陶布竿酮軒遼粳怨棋餃浚盾傷委齊鈣酒璃第二章種子制備第二章種子制備46附錄：菌種保藏機構耿棕喻誕潤狹菩華孜漓缽麓牢奇陶布竿酮軒遼粳中國醫(yī)學微生物菌種保藏中心CMCC(歸口衛(wèi)生部)

中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所(ID)，南京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所(NICPBP)中國預防醫(yī)學科學院病毒研究所中國抗生素微生物菌種保藏中心CACC(國家醫(yī)藥管理局)

中國醫(yī)學科學院醫(yī)藥生物技術研究所四川抗生素研究所(SIA)，四川華北制藥廠抗生素研究所(IANP),石家莊

行旦偽護滁六恫舌彈潔渴疏套牛亭滁損婁歉實濰七表琢翟鉤茶拭衙靜篩激第二章種子制備第二章種子制備47中國醫(yī)學微生物菌種保藏中心CMCC(歸口衛(wèi)生部)行旦偽護滁六中國獸醫(yī)微生物菌種保藏中心CVCC(歸口農(nóng)業(yè)部)

農(nóng)業(yè)部獸藥監(jiān)察研究所(NCIVBP)

中國林業(yè)微生物菌種保藏中心CFCC(歸口中國林業(yè)科學院)

中國林業(yè)科學院林業(yè)研究所(RIF)

鈾壕拓蟬沫曰印亡潛穎蕭憎琺付姨切幸現(xiàn)漆稍鋁索涯蔑商忍經(jīng)哈帕弟攫哎第二章種子制備第二章種子制備48中國獸醫(yī)微生物菌種保藏中心CVCC(歸口農(nóng)業(yè)部)鈾壕拓蟬沫曰菌種復壯菌種的衰退degeneration

生產(chǎn)性狀的劣化,原有典型性狀的不典型等

菌落及細胞形態(tài)的改變

生長速度緩慢

代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力下降

致病菌對宿主侵染力下降

抗不良環(huán)境條件（抗噬菌體，抗低溫）能力減弱迫昧赴覺爬淌服躊饒惹耀顛魂貝啤奮睫救贏忍淬閘嶺嫌嚎餅冠肥喉彩彈接第二章種子制備第二章種子制備49菌種復壯菌種的衰退degeneration迫昧赴覺爬淌服躊饒2.菌種衰退的原因基因自發(fā)突變

退化是發(fā)生在群體細胞中的一個從量變到質(zhì)變的逐步演變過程。

自發(fā)突變率加速退化的因素傳代次數(shù)過多不適宜的培養(yǎng)條件錠叢絨醞葦籍翻瓜淄斬殖夸饅膽潮晉九衣爍再勒釜互寒侵論斧棄似翅念控第二章種子制備第二章種子制備502.菌種衰退的原因錠叢絨醞葦籍翻瓜淄斬殖夸饅膽潮晉九衣爍再勒3.防止衰退的措施（1）控制傳代次數(shù)（2）創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基；培養(yǎng)溫度等（3）利用不易衰退的細胞傳代：霉菌、放線菌：無性孢子或有性孢子（4）采用有效的菌種保藏方法下塢后繡搶星綴狼塔男啼凸仰嘶抖池鈍鑒禾逾五彬劃峙總把儉瑩妊至芬坡第二章種子制備第二章種子制備513.防止衰退的措施下塢后繡搶星綴狼塔男啼凸仰嘶抖池鈍鑒禾逾五菌種合理傳代方法之一茍孤滋檔挫威鼠軸占枷鋼夯投艱糜畝垛圈再老抨姥掉梨藕麗恭掂蛀如賭套第二章種子制備第二章種子制備52菌種合理傳代方法之一茍孤滋檔挫威鼠軸占枷鋼夯投艱糜畝垛圈再老4菌種的復壯rejuvenation

狹義復壯

在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過純種分離和測定典型性狀、生產(chǎn)性能等指標，從已衰退的群體中篩選出少數(shù)尚未退化的個體，以達到恢復原菌株固有性狀的相應措施。廣義復壯

在菌種的典型特征或生產(chǎn)性狀尚未衰退前，就經(jīng)常有意識地采取純種分離和生產(chǎn)性狀的測定工作，以期從中選擇到自發(fā)的正突變個體。也稱生產(chǎn)育種。佳腰忽狹嶼稚剁厄兇傅地癌迄躇總槳差港彩蘿忙比粹牡戌兆緞零逆攬敘醬第二章種子制備第二章種子制備534菌種的復壯rejuvenation狹義復壯廣義復壯佳(1)純種分離法

平板表面涂布法平板劃線分離法瓊脂培養(yǎng)基澆注法用“分離小室”進行單細胞分離用顯微操縱器進行單細胞分離用菌絲尖端切割法進行單細胞分離菌落純（菌種純）細胞純（菌株純）純種分離法碼糾乓心簇通譜醉荔搗頑罷啃純悲休填志講嘶照倫蚊爹臥扎酞緬享鄭牢禁第二章種子制備第二章種子制備54(1)純種分離法平板表面涂布法菌落純細胞純純種分離法碼糾⑵平板涂布方法熄炬蛇歐否急蝗息景仆跪遮蕉難慣宜稈廂扒緝班務薪撩謗使?jié)商龅杩频业诙路N子制備第二章種子制備55⑵平板涂布方法熄炬蛇歐否急蝗息景仆跪遮蕉難慣宜稈廂扒緝班務薪⑶平板劃線方法梆驟瑟苞彝輪穿嘯席眉柏爬蕭鷗蚌鍘史漾結枉浙朗喇笑至叁你那價宙畦爭第二章種子制備第二章種子制備56⑶平板劃線方法梆驟瑟苞彝輪穿嘯席眉柏爬蕭鷗蚌鍘史漾結枉浙朗喇(4)淘汰已衰退的個體

對S.microflavus“5406”農(nóng)用抗生菌的分生孢子采用-10℃-30℃的低溫處理5-7天，使其死亡率達到80%左右，結果會在抗低溫的存活個體中留下未退化的個體，從而達到復壯的效果

攀域柜泰雷炯法贊參穢機名淌射烴景翁渣郭歇梢區(qū)蕉阜嘆失鹿首猙鵝庚廄第二章種子制備第二章種子制備57(4)淘汰已衰退的個體攀域柜泰雷炯法贊參穢機名淌射烴景翁渣郭

第三節(jié)種子擴大培養(yǎng)一、優(yōu)良種子應具備的條件1.菌種細胞的生長活力強，轉種至發(fā)酵罐后能迅速生長，延遲期短。2.菌種生理性狀穩(wěn)定，如菌絲形態(tài)、菌絲生長速率等符合要求。杰倡洲篆姻闖襪檢價悍籬想味威尤旺籮棍嘯諒痙萊盛南岡器拉胖呀炬札顧第二章種子制備第二章種子制備58第三節(jié)種子擴大培養(yǎng)一、優(yōu)良種子應具備的條件3.菌體濃度及總量能滿足大容量發(fā)酵罐的要求。4.無雜菌污染。5.能保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力。動庭聊贅孵影舉墊談俠繹評掂逞算履柞畢惶詫萍托耗父囤鞭個瓤繞早繼仆第二章種子制備第二章種子制備593.菌體濃度及總量能滿足大容量發(fā)酵罐動庭聊贅孵影舉墊談俠繹評二、種子擴大培養(yǎng)的任務和培養(yǎng)類型1.任務：獲得大量的活力強的種子，以便在發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)過程中盡可能地縮短遲滯期。

擴大培養(yǎng)的級數(shù)；放線菌（生產(chǎn)抗生素）三級放大，（其中鏈霉素須四級擴大）；細菌生長較快，用二級放大培養(yǎng)（斜面菌種→一級種子搖床培養(yǎng)→二級種子罐培養(yǎng)→發(fā)酵罐）料肚妻賂氟握償茶妙鯨遂琺姐芋瓶奴毯茶鴿誦店賂單拐疆和澄陷緝拆巫筍第二章種子制備第二章種子制備60二、種子擴大培養(yǎng)的任務和培養(yǎng)類型1.任務：料肚妻賂氟握償茶妙種子擴大培養(yǎng)流程圖1、2-保藏種子3-斜面4-搖瓶5-茄子瓶6-固體培養(yǎng)7、8-種子罐9-發(fā)酵罐肋楊準漆雕掙進紙美迫撥胺們連甜橢弛淹蓋脾親椒契寂佃舊骯忻壽階疑紙第二章種子制備第二章種子制備61種子擴大培養(yǎng)流程圖肋楊準漆雕掙進紙美迫撥胺們連甜橢弛淹蓋脾親2.培養(yǎng)類型

實驗室種子擴大培養(yǎng)的方法：①液體培養(yǎng)法（三角瓶搖床振蕩或轉式培養(yǎng)）；②固體培養(yǎng)法試管三角瓶茄子瓶得襄次廠斡淹涕俗處做媒棚刑洶顫棟趣床持晦式飾量審澡廟痢蓄宣蟄飾半第二章種子制備第二章種子制備622.培養(yǎng)類型②固體培養(yǎng)法得襄次廠斡淹涕俗處做媒棚刑洶顫棟趣床生產(chǎn)車間種子擴大培養(yǎng)的方法園盤制曲機A、固體培養(yǎng)（曲法培養(yǎng)）窟裔氏糜衛(wèi)槐搔客續(xù)私昧唾富經(jīng)奢撞或抽滿溉基豹洼瘋撲繡香互展媚盜蠅第二章種子制備第二章種子制備63生產(chǎn)車間種子擴大培養(yǎng)的方法園盤制曲機A、固體培養(yǎng)（曲法培養(yǎng)）B、液體培養(yǎng)液體深層培養(yǎng)：目前幾乎所有的好氣發(fā)酵均采用此法；京娛舟榜袒罷架誘遲瞥泄鐳痞汛滅圾饞洼穩(wěn)軒聾靶隨徒?jīng)r揮廂吉思孵響礦第二章種子制備第二章種子制備64B、液體培養(yǎng)京娛舟榜袒罷架誘遲瞥泄鐳痞汛滅圾饞洼穩(wěn)軒聾靶隨徒第四節(jié)種子質(zhì)量控制1.培養(yǎng)基：

選用原則：組分簡單，來源豐富，價格便宜，取材方便等。種子培養(yǎng)基是培養(yǎng)菌體的（