腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞表達(dá)miRNA-122對(duì)肝癌患者的作用

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞表達(dá)miRNA—122對(duì)肝癌患者的作用目的分析腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞表達(dá)miRNA-122對(duì)肝癌患者的作用方法選取2015年1月～2018年1月于我院進(jìn)行診斷的20例肝癌患者作為HCC-1組，另選取20例健康者作為C-1組，分別提取兩組患者的外周血單核細(xì)胞采用q-PCR法檢測(cè)兩組患者的血清miRNA-122水平選取40只健康SD裸鼠，將其隨機(jī)分為HCC組（n=2）與Scamble組（n=2。其中，HCC組采用皮下注射0.5ml肝癌Hep-2細(xì)胞懸液而Scamble組則皮下注射0.5ml生理鹽水造模后，連續(xù)5d采用腹股動(dòng)脈取血法收集兩組裸鼠模型動(dòng)脈血，分離獲取外周單核細(xì)胞，以q-PCR定量分析技術(shù)檢測(cè)TMA中miRNA-122水平。結(jié)果HCC-1組患者的miRNA-122水平顯著低于C-1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。造模2d后，HCC組裸鼠模型TAM中的miRNA-122水平顯著低于Scamble組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05。結(jié)論肝癌患者及肝癌裸鼠模型 TAM中miRNA-122水平偏低，miRNA-122具有調(diào)控肝腫瘤生長(zhǎng)的作用。[Abstract]ObjectiveToanalyzetheeffectofmiRNA-122expressionintumorassociatedmacrophagesonhepatocellularcarcinomapatients.MethodsAtotalof20casesofpatientswithhepatocellularcarcinomadianosedinourhospitalfromJanuary2015toJanuary2018wereselectedastheHCC-1group，andanother20healthypeoplewereselectedastheC-1group.TheperipheralbloodmonocytesinthetwogroupswerecollectedandthelevelofserummiRNA-122wastestedbyq-PCRtechnology.FortyhealthySDnudemicewereselectedandrandomlydividedintotheHCCgroup （n=20）andScamblegroup （n=20）.TheHCCgroupwasinjectedsubcutaneouslywith0.5mlHep-2cellsuspensionoflivercancer，whileScamblegroupwasgiven0.5mlnormalsaline.Aftermodeling，arterialbloodwascollectedfromtwogroupsofnudemicebyabdominalfemoralarterybloodsamplingfor5consecutivedays，andperipheralmononuclearcellswereisolatedandobtained.ThelevelofmiRNA-122inTMAwastestedbyq-PCR quantitativeanalysistechnique.ResultsThelevelofmiRNA-122intheHCC-1groupwassignificantlylowerthanthatintheC-1group，andthedifferencewasstatisticallysignificant（PTwodaysafterthelevelofmiRNA-122inTAMofnudemiceintheHCCgroupwassignificantlylowerthanthatintheScamblegroup，andthedifferencewasstatisticallysignificant（P＜0.05）.ConclusionThelevelofmiRNA-122inTAMoflivercancerpatientsandlivercancernudemiceislower.ThemiRNA-122playsaroleinregulatingthegrowthoflivertumors.[Keywords]Hepatocellularcarcinoma；Macrophages；MiRNA-122肝細(xì)胞癌（HepatocellularCarcinoma，HCC）的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)位列第53[1-2]。有研究表明，在HCC展過(guò)程中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumorassociatedmacrophage，TAM）HCC相互影響、相互作用，促進(jìn)肝癌發(fā)生和發(fā)展[3-4]。miRNA在免疫調(diào)控中起到重要miRNA-122TAMmiRNA-122表達(dá)對(duì)肝癌的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。資料與方法20151月～2018120例肝癌患HCC-111938～64歲，平均歲；患20C-1155例；年齡3～61（41.87.140SD裸鼠，雄性，平均體重心提供[合格證號(hào)：SCXK（贛）2007-0005]HCCScamble20只。實(shí)時(shí)定量檢測(cè)試劑盒、內(nèi)切酶、熒光定量PCR粒提取試劑盒、人外周血淋巴細(xì)胞分離液于南昌長(zhǎng)城生物公司購(gòu)買(mǎi)。方法TAM10ml3000r/min10min，保留分層液及以上部分于-24q-PCRmiRNA-122水平。構(gòu)建肝癌裸鼠模型HCC200.5mlHep-21×105個(gè)/mlScamble20只裸鼠于皮下0.5mlHCCScamble53000r/min10min，保留分層液及以上部分于-245d的外周血單核細(xì)胞。q-PCRmiRNA-122HCC-1C-1HCCScambleTAM6孔板中，經(jīng)短暫孵育后提取RNAmiRNA-122U6CTmiRAN-122q-PCR定量分析[5-6]。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差tP＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果HCC-1C-1TAMmiRNA-122水平的比較HCC-1組患者的miRAN-122水平[（0.52±0.21）ng/ml]顯著低于C-1組[0.840.43）ng/ml]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。HCCScambleTAMmiRNA-122水平的比較2d組裸鼠TAMmiRNA-122Scamble差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05（1。討論M1）和Ⅱ型巨噬細(xì)胞（M2，二者均具有顯著的可塑性、多功能性、極化性等特點(diǎn)[7-8]。但M1M2巨噬細(xì)胞生理功能是絕然不同的。M1是一種典型的活化巨噬細(xì)胞，疫監(jiān)視功能。而M2巨噬細(xì)胞為替代性活化巨噬細(xì)胞，其功能與M1巨噬細(xì)胞相IL-10TGF-βM2巨噬細(xì)胞還具有清除異物、促進(jìn)傷口愈合、血管再生等作用[9-10]。因此，M2T細(xì)胞增殖等方式降低腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答。TAM與腫瘤之間存在密切聯(lián)系。一方面，腫瘤環(huán)境可影響單核巨噬細(xì)胞分TAMIL-6與IL-10因子可通過(guò)招募巨噬細(xì)胞聚集，產(chǎn)生PEG2，從而誘導(dǎo)并促進(jìn)巨噬細(xì)胞分化為近M2TAMEGF、IL-6、CXCL-8等因子維持腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)血管生成和抑制獲得性免疫[12-13]。此外，TAM具有[14]，其水平與腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的下降率成負(fù)相關(guān)，且較多的臨床研究表明，TAM增高與腫瘤患者預(yù)后不良成正相關(guān)[15-17]。（EG、FGF家族因子、TGF-β、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、趨化因子和細(xì)胞因子。IL-1β可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。在IL-1β基因的敲除鼠中黑色素瘤細(xì)胞或乳腺、前列腺腫瘤均不會(huì)轉(zhuǎn)移，表明了IL-1β在腫瘤微環(huán)境中的重要性。在與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)在巨噬細(xì)TNF-αMMP[18]通過(guò)促進(jìn)基質(zhì)和血管生長(zhǎng)因子的生成，TAM可促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。TAM產(chǎn)生和釋放一些免疫調(diào)控因子，如 TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12[19-20]。據(jù)報(bào)道，這些因子可以直接或間接抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)，大量的實(shí)驗(yàn)與臨床研究表明，TAM與癌癥的發(fā)展密切相關(guān)。TAM產(chǎn)生上皮生長(zhǎng)因子血管內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞因子及趨化因子，促進(jìn)腫瘤的存活、增殖和入侵[20]。此外局部炎癥或腫瘤細(xì)胞釋放的免疫抑制介質(zhì)削弱了宿主的抗腫瘤反應(yīng)并且促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。miRNAsmiRNA-122在肝臟中是miR-122肝癌分化越差，暗示著不良預(yù)后。綜上所述，肝癌患者及肝癌裸鼠模型TAM中的miRNA-122水平偏低，miRNA-122[]閆東，曾輝英，史仲華，等.甲磺酸阿帕替尼治療中晚期肝細(xì)胞癌伴發(fā)乙型肝炎后肝硬化患者的臨床療效及安全性研究[J].2（2：129-131..2[J].2018，25（2：105-110..CD163[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版，2017，52（4：438-442.LiH，HuangN，ZhuW，etal.Modulationthecrosstalkbetweentumor-associatedmacrophagesandnon-smallcelllungcancertoinhibitmigrationandinvasionbyginsenosideRh2[J].BmcCance，2018，18（1：579.MaugerF，KernaleguenM，LallemandC，etal.Enrichmentofmethylatedmoleculesusingenhanced-ice-co-amplificationatlowertemperature-PCR（E-ice-COLD-PCR）forthesensitivedetectionofdisease-relatedhypermethylation[J].Epigenomic，2018，10（5：525-537.Zhangal.Effectsof1-octyl-3-methylimidazoliumnitrateonthemicrobesinbrownsoil[J].JEnvironSci（Chin，2018，67：249-259..T水平和病情的相關(guān)性[J].中國(guó)臨床保健雜志，2018，21（2：172-175.黃竹媛，甄俊平.“參與者”[J].2018，18（1：45-46..M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)性研究[J].2018，34（5：555-558..IL-2IL-6及免疫功能的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，201，38（7：1609-1612..D-LPAIL-6水平影響研究[J].中華保健醫(yī)學(xué)雜志，201，20（1：69-70.ZhangYL，LiQ，Yangal.SPON2promotesM1-likemacrophagerecruitmentandinhibitshepatocellularcarcinomametastasisbydistinctintegrin-RhoGTPase-hippopathways[J].CancerRes，2018，78（9：2305-2317.Fangal.Theheterogenictumormicroenvironmenthepatocellularcarcinomaandprognosticanalysisbasedontumorneo-vessels，sdα-SMA[J].OncolLett，2018，15（4：4805-4812.KakoschkyB，PleliT，SchmithalsC，etal.Selectivetargetingoftumorassociatedmacrophagesindifferenttumormodels[J].PLoSe8e0193015.Mengal.Monocytes/MacrophagespromotevascularCXCR4expressionviatheERKpathwayinhepatocellularcarcinoma[J].Oncoimmunolog，2017，7（3：e1408745.FujisakaY，IwataT，TamaiK，etal.Longnon-codingRNAHOTAIRup-regulateschemokine（C-C