大學(xué)生生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能大賽初賽試題及答案

大學(xué)生生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能大賽初賽試題及答案大學(xué)生生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能大賽初賽試題及答案/1919/19答：(1)對(duì)溶劑的要求：①對(duì)含量測(cè)定無(wú)干擾，如含有雜原子的有機(jī)溶劑，常常含有較強(qiáng)的末端吸收，因此在使用時(shí)，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長(zhǎng)。所以，在測(cè)定供試品之前，先對(duì)溶劑的吸光度進(jìn)行測(cè)定，220-240nm范圍內(nèi)不得過(guò)0.40,在241?250nm范圍內(nèi)，不得過(guò)0.20，在251?300nm之間不得過(guò)0.10,在300nm以上不得過(guò)0.05nm；②注意溶劑的揮發(fā)性，在選用時(shí)盡量避免溶劑揮發(fā)帶來(lái)的影響；③注意溶液的pH值穩(wěn)定，在測(cè)定時(shí)如果必須要求一定pH，則盡量選用緩沖鹽調(diào)節(jié)pH,以保證pH的穩(wěn)定性。對(duì)波長(zhǎng)的選擇：①進(jìn)行供試品和對(duì)照品的全波長(zhǎng)掃描，要以該物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行含量測(cè)定；②該檢測(cè)波長(zhǎng)不能與其他物質(zhì)或溶劑產(chǎn)生交叉干擾。28、簡(jiǎn)述721型(尤尼柯UV-2000型)紫外-可見(jiàn)分光光度儀的使用規(guī)程。答：(1)接通電源、打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，打開(kāi)暗箱蓋，預(yù)熱20?30min；(2)通過(guò)“疋旋鈕，選定所需波長(zhǎng)；(3)將參比液裝入比色皿，放入比色架中，蓋上暗盒蓋，此時(shí)光路開(kāi)啟，讓參比溶液置于光路上，調(diào)節(jié)透光率或吸光度按鈕，調(diào)到透光率100%或吸光度0；(4)利用拉桿將待測(cè)液推入光路，讀取吸光度值(或相應(yīng)T值)，讀取后將暗盒蓋打開(kāi)；(5)每當(dāng)改變波長(zhǎng)測(cè)量時(shí)，必須重新調(diào)零、調(diào)滿；(6)儀器使用完畢，取出比色皿，洗凈、晾干，關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)，拔下電源插頭，然后罩好防塵護(hù)罩，復(fù)原儀器。(7)清理實(shí)驗(yàn)材料，填寫使用記錄，打掃實(shí)驗(yàn)室。29、紫外-可見(jiàn)分光光度儀進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，如何繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線？答：(1)稱取對(duì)照品適量，按比例稀釋，配制好各種濃度的稀釋液；(2)調(diào)試紫外分光光度儀，設(shè)定最大吸收波長(zhǎng)，參比溶液校正；(3)將供試液放入吸收池，進(jìn)行測(cè)定，記錄讀數(shù)；(4)以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，利用exce1或者其他軟件，計(jì)算得到回歸方程，求得r值，要求r值達(dá)到0.999以上。30、簡(jiǎn)述薄層色譜法的一般程序有哪些？并簡(jiǎn)要說(shuō)明各步驟的注意事項(xiàng)。答：薄層色譜法一般需要：制板、點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色4大步驟。制板：①硅膠類型的選擇，如硅膠G、硅膠H、硅膠GF25等；②硅膠與粘合劑的配比為1:3,有時(shí)還需要用0.2%?0.5%的CMC-Na溶液；③活化時(shí)，一定要等自然晾干后，再放入105°C烘箱20?30min。點(diǎn)樣：①點(diǎn)樣量2?5此：②點(diǎn)樣時(shí)要盡量控制點(diǎn)的大小，在3mm以下；③點(diǎn)樣間距一般要大于8mm；④點(diǎn)樣的基線與玻璃下沿要有1cm?1.5cm的距離。展開(kāi)：①展開(kāi)劑一定要配精確，混合好后，加入到展開(kāi)槽中；②加入展開(kāi)劑后要飽和20?30min,必要時(shí)，將薄層板也放入雙槽層析缸中共同飽和，以控制邊緣效應(yīng)；③注意控制溶劑前沿，不要展開(kāi)太過(guò)；④計(jì)算Rff直，控制在0.2?0.8之間。顯色：①本身有顏色的，日光下檢識(shí)即可；②需要噴顯色劑的，可以顯色后檢識(shí);③有熒光的，可以在254nm或365nm下進(jìn)行檢識(shí)。31、以硅膠為填料，試述濕法裝柱和干法裝柱、加樣及洗脫的步驟要點(diǎn)。答：裝柱：濕法裝柱：①先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝?，除去氣泡，并濾掉大顆?；螂s質(zhì)；②將混合溶液沿層析柱的內(nèi)壁緩慢倒入(層析柱下端墊有棉花或碎瓷片)，并不斷敲打柱子兩側(cè)，以使硅膠均勻無(wú)氣泡；③上端緩慢加入淋洗劑，保證柱子上端液面不干涸，進(jìn)行沖洗(避免上層硅膠被沖起)；④用雙連球或者加壓裝置，對(duì)層析柱進(jìn)行加壓，以提高柱效。干法裝柱：①柱子里直接填入硅膠；②輕輕敲打柱子兩側(cè)，至硅膠界面不再下降為止；③然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，使柱子裝的比較結(jié)實(shí)；④用淋洗劑“走柱子”，上面加壓，下面再用油泵抽，增加柱效。加樣：(1)干法是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。(2)濕法上樣就是用少量溶劑(最好就是展開(kāi)劑，如果展開(kāi)劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量)將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻