現(xiàn)代分子生物學(xué)-課后思考題答案

第一章緒論1.染色體具有哪些作為遺傳物質(zhì)的特征？答：①分子結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定；②能夠自我復(fù)制，使親子代之間保持連續(xù)性；③能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成，從而控制整個(gè)生命過(guò)程；④能夠產(chǎn)生可遺傳的變異。O2.什么是核小體？簡(jiǎn)述其形成過(guò)程。答：由DNA和組蛋白組成的染色質(zhì)纖維細(xì)絲是許多核小體連成的念珠狀結(jié)構(gòu)。核小體是由H2A,H2B,H3,H4各兩個(gè)分子生成的八聚體和由大約200bp的DNA組成的。八聚體在中間，DNA分子盤(pán)繞在外，而H1則在核小體外面核小體的形成是染色體中DNA壓縮的第一階段。在核小體中DNA盤(pán)繞組蛋白八聚體核心，從而使分子收縮至原尺寸的1/7o200bpDNA完全舒展時(shí)長(zhǎng)約68nm,卻被壓縮在10nm的核小體中。核小體只是DNA壓縮的第一步。核小體長(zhǎng)鏈200bpf核酸酶初步處理一核小體單體200bpf核酸酶繼續(xù)處理一核心顆粒146bp3簡(jiǎn)述真核生物染色體的組成及組裝過(guò)程答：組成：蛋白質(zhì)+核酸。組裝過(guò)程：1,首先組蛋白組成盤(pán)裝八聚體，DNA纏繞其上，成為核小體顆粒，兩個(gè)顆粒之間經(jīng)過(guò)DNA連接，形成外徑10nm的纖維狀串珠，稱為核小體串珠纖維；2,核小體串珠纖維在酶的作用下形成每圈6個(gè)核小體，外徑30nm的螺線管結(jié)構(gòu)；3,螺線管結(jié)構(gòu)再次螺旋化，形成超螺旋結(jié)構(gòu)；4,超螺線管，形成絆環(huán)，即線性的螺線管形成的放射狀環(huán)。絆環(huán)在非組蛋白上纏繞即形成了顯微鏡下可見(jiàn)的染色體結(jié)構(gòu)。4.簡(jiǎn)述口岫的一.二.三級(jí)結(jié)構(gòu)的特征答：DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)：4種核甘酸的的連接及排列順序，表示了該DNA分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)：指兩條多核甘酸鏈反向平行盤(pán)繞所生成的雙螺旋結(jié)構(gòu)DNA三級(jí)結(jié)構(gòu)：指DNA雙螺旋進(jìn)一步扭曲盤(pán)繞所形成的特定空間結(jié)構(gòu)6簡(jiǎn)述DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)及其在現(xiàn)代分子生物學(xué)發(fā)展中的意義(1)DNA雙螺旋是由兩條互相平行的脫氧核甘酸長(zhǎng)鏈盤(pán)繞而成的，多核甘酸的方向由核甘酸間的磷酸二酯鍵的走向決定，一條是53,另一條是3——5。(2)DNA雙螺旋中脫氧核糖和磷酸交替連接，排在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架，堿基排列在內(nèi)側(cè)(3)其兩條鏈上的堿基通過(guò)氫鍵相結(jié)合，形成堿基對(duì)意義：該模型揭示YDNA作為遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性特征，最有價(jià)值的是確認(rèn)了堿基配對(duì)原則，這是DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄的分子基礎(chǔ)，亦是遺傳信息傳遞和表達(dá)的分子基礎(chǔ)。該模型的提出是20世紀(jì)生命科學(xué)的重大突破之一，它奠定了生物化學(xué)和分子生物學(xué)乃至整個(gè)生命科學(xué)飛速發(fā)展的基石。.DNA復(fù)制通常采取哪些方式？①線性DNA雙鏈的復(fù)制將線性復(fù)制子轉(zhuǎn)變?yōu)榄h(huán)狀或多聚分子在DNA末端形成發(fā)夾式結(jié)構(gòu)使分子沒(méi)有游離末端在某種蛋白質(zhì)的介入下，在真正的末端啟動(dòng)復(fù)制②環(huán)狀DNA雙鏈的復(fù)制5五2型滾環(huán)型D一環(huán)型.簡(jiǎn)述原核生物DNA的復(fù)制特點(diǎn)。(1)復(fù)制的起始：1,DNA雙螺旋的解旋DNA在復(fù)制時(shí)，其雙鏈?zhǔn)紫冉忾_(kāi)，形成復(fù)制叉，這是一個(gè)有多種蛋白質(zhì)和酶參與的復(fù)雜過(guò)程。(2)DNA復(fù)制的引發(fā)：RNA引物的合成前導(dǎo)鏈：DNA雙鏈解開(kāi)為單鏈后，由引發(fā)酶(RNA聚合酶，Primase)在5'-3'DNA模板上合成一段RNA引物，再由DNA聚合酶從RNA引物3’端開(kāi)始合成新的DNA鏈。然后以此為起點(diǎn)，進(jìn)入DNA復(fù)制的延伸。后隨鏈：后隨鏈的引發(fā)過(guò)程由引發(fā)體(Primosome)來(lái)完成。引發(fā)體由6種蛋白組成的引發(fā)前體(Preprimosome)和引發(fā)酶(Primase)組成。引發(fā)體催化生成滯后鏈的RNA引物短鏈，再由DNA聚合酶HI作用合成后續(xù)DNA,直至遇到下一個(gè)引物或?qū)槠螢橹?。在滯后鏈上所合成的RNA引物非常短，一般只有3-5個(gè)核甘酸。而且，在同一種生物體細(xì)胞中這些引物都具有相似的序列。(3)復(fù)制的延伸： 岡崎片段與半不連續(xù)復(fù)制在原核生物中，DNA新生鏈的合成主要由DNA聚合酶III所催化。當(dāng)岡崎片段形成后，DNA聚合酶I通過(guò)其5'f3'外切酶活性切除岡崎片段上的RNA引物，同時(shí)，利用后一個(gè)岡崎片段作為引物由5'-3'合成DNA。最后兩個(gè)岡崎片段由DNA連接酶將其接起來(lái)，形成完整的DNA滯后鏈。（4）復(fù)制的終止：DNA復(fù)制的終止依賴與Tus蛋白（Terminusutilizationsubstance，36kD）和DNA鏈上特殊的重復(fù)序列Ter（約22bp）。Tus-ter復(fù)合體將阻止DNA解鏈，等反方向的復(fù)制叉到達(dá)后停止復(fù)制，然后兩條鏈解開(kāi)。最后，釋放子鏈DNA，依靠拓?fù)涿笇⒊菪Y(jié)構(gòu)引入DNA分子。.真核生物DNA的復(fù)制在哪些水平上受到調(diào)控答：①細(xì)胞生活周期水平調(diào)控（限制點(diǎn)調(diào)控）即決定細(xì)胞停留在G1期還是進(jìn)入5期；②染色體水平調(diào)控即決定不同染色體或同一染色體不同部位的復(fù)制子按一定順序在S期起始復(fù)制；③復(fù)制子水平調(diào)控即決定復(fù)制的起始與否。.細(xì)胞通過(guò)哪幾種修復(fù)系統(tǒng)對(duì)DNA損傷進(jìn)行修復(fù)錯(cuò)配修復(fù)、切除修復(fù)、重組修復(fù)‘、DNA直接修復(fù)、SOS系統(tǒng)。.什么是轉(zhuǎn)座子？可分為哪些種類？答：DNA的轉(zhuǎn)座，或稱移位，是由可移位因子介導(dǎo)的遺傳物質(zhì)重排現(xiàn)象。轉(zhuǎn)座子（transposon,Tn）是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和移位的基本單位。轉(zhuǎn)座子分為兩大類：插入序列（IS）和復(fù)合型轉(zhuǎn)座子。（1）插入序列：插入序列是最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子，它不含有任何宿主基因。它們是細(xì)菌染色體或質(zhì)粒DNA的正常組成部分。一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞常帶有少于10個(gè)序列。轉(zhuǎn)座子常常被定為到特定的基因中，造成該基因突變。（2）復(fù)合型轉(zhuǎn)座子:復(fù)合型轉(zhuǎn)座子是一類帶有某些抗藥性基因（或其他宿主基因）的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往是兩個(gè)相同或高度同源的IS序列，表明IS序列插入到某個(gè)功能基因兩端時(shí)就可能產(chǎn)生復(fù)合轉(zhuǎn)座子。一旦形成復(fù)合轉(zhuǎn)座子，IS序列就不能再單獨(dú)移動(dòng)，因?yàn)樗鼈兊墓δ鼙恍揎椓耍荒茏鳛閺?fù)合體移動(dòng)。大部分情況下，這些轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座能力是由IS序列決定和調(diào)節(jié)的。 除了末端帶有IS序列的復(fù)合轉(zhuǎn)座子外，還存在一些沒(méi)有IS序列的，體積龐大的轉(zhuǎn)座子（5000bp以上）——TnA家族。12請(qǐng)說(shuō)說(shuō)插入序列與復(fù)合型轉(zhuǎn)座子之間異同。答：轉(zhuǎn)座子是存在于染色體DNA上的可自主復(fù)制和位移的基本單位。最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子不含有任何宿主基因而被稱為插入序列（IS）,他們是細(xì)菌染色體或質(zhì)粒DNA的正常組成部分。她常常被定位到特定的基團(tuán)中，造成基因突變。、復(fù)合式轉(zhuǎn)座子是一類帶有某些抗藥性基因的轉(zhuǎn)座子，其兩翼是相同的或高度同源的IS序列，且IS序列是不能單獨(dú)移動(dòng)的只能作為復(fù)合體移動(dòng)而且IS序列也決定和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座能力。也是有沒(méi)有IS序列的轉(zhuǎn)座子Tna家族，其兩翼帶有38bp的倒置重復(fù)序列.組蛋白上都存在哪些修飾？其作用是什么？（P27）答：甲基化、乙?；⒘姿峄?、泛素化及ADP核糖基化等。以甲基化（基因激活與沉默）、乙?；ㄞD(zhuǎn)錄激活，轉(zhuǎn)錄延伸，DNA修復(fù)拼接復(fù)制，染色體組裝，基因沉默，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)）為主。影響染色體的結(jié)構(gòu)和功能、基因的表達(dá)和沉默。第三章生物信息的傳遞（上）從DNA到RNA1，什么是編碼鏈？什么是模版鏈？答：與mRNA序列相同的那條DNA鏈稱為編碼鏈（或有意義鏈）；另一條根據(jù)堿基互補(bǔ)原則指導(dǎo)mRNA合成DNA鏈稱為模版鏈（或反義鏈）。2,簡(jiǎn)述RNA轉(zhuǎn)錄的概念及其基本過(guò)程。答：RNA轉(zhuǎn)錄：以DNA中的一條單鏈為模板，游離堿基為原料，在DNA依賴的RNA聚合酶催化下合成RNA鏈的過(guò)程?；具^(guò)程：模版識(shí)別—轉(zhuǎn)錄開(kāi)始;轉(zhuǎn)錄延伸:轉(zhuǎn)錄終止。3,大腸桿菌的RNA聚合醯有哪些組成成分？各個(gè)亞基的作用如何？答：大腸桿菌的RNA聚合酶由2個(gè)a亞基、一個(gè)B亞基、一個(gè)B'亞基和一個(gè)3亞基組成的核心酶，加上一個(gè)。亞基后則成為聚合酶全酶。a亞基肯能與核心酶的組裝及啟動(dòng)子的識(shí)別有關(guān)，并參與RNA聚合酶和部分調(diào)節(jié)因子的相互作用；B亞基和B'亞基組成了聚合酶的催化中心，8亞基能與模版DNA、新生RNA鏈及核甘酸底物相結(jié)合。4,什么是封閉復(fù)合物、開(kāi)放復(fù)合物以及三元復(fù)合物？答：模版的識(shí)別階段，聚合酶與啟動(dòng)子可逆性結(jié)合形成封閉性復(fù)合物；封閉性復(fù)合物形成后，此時(shí)，DNA鏈仍然處于雙鏈狀態(tài)，伴隨著DNA構(gòu)象的重大變化，封閉性復(fù)合物轉(zhuǎn)化為開(kāi)放復(fù)合物；開(kāi)放復(fù)合物與最初的兩個(gè)NTP相結(jié)合并在這兩個(gè)核甘酸之間形成磷酸二脂鍵后即轉(zhuǎn)變成包括RNA聚合酶、DNA和新生RNA的三元復(fù)合物。5,簡(jiǎn)述。因子的作用。答：1,。因子的作用是負(fù)責(zé)模版鏈的選擇和轉(zhuǎn)錄的起始，它是酶的別構(gòu)效應(yīng)物，使酶專一性識(shí)別模版上的啟動(dòng)子;2,。因子可以極大的提高RNA聚合酶對(duì)啟動(dòng)子區(qū)DNA序列的親和力；3,。因子還能使RNA聚合酶與模版DNA上非特異性位點(diǎn)結(jié)合常數(shù)降低。6,什么是Pribnowbox?它的保守序列是什么？答：pribnowbox是原核生物中中央大約位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游10bp處的TATA區(qū)，所以又稱作-10區(qū)。它的保守序列是TATAATo7,什么是上升突變？什么是下降突變？答：上升突變：細(xì)菌中常見(jiàn)的啟動(dòng)自突變之一，突變導(dǎo)致Pribnow區(qū)共同序列的同一性增加；下降突變：細(xì)菌中常見(jiàn)的啟動(dòng)子突變之一，突變導(dǎo)致結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平大大降低，如Pribnow區(qū)從TATAAT變成AATAAT。9,大腸桿菌的終止子有哪兩大類？請(qǐng)分別介紹一下它們的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。答：大腸桿菌的終止子可以分為不依賴于p因子和依賴于p因子兩大類。不依賴于p因子的終止子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1,位于位點(diǎn)上游一般存在一個(gè)富含GC堿基的二重對(duì)稱區(qū)，由這段DNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA容易形成發(fā)卡式結(jié)構(gòu)。2,在終止位點(diǎn)前面有一端由4—8個(gè)A組成的序列，所以轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3’端為寡聚U。依賴于p因子的終止子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：10,真核生物的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物必須經(jīng)過(guò)哪些加工才能成為成熟的mRNA,以用作蛋白質(zhì)合成的模版。答：1,裝上5,端帽子；2,裝上3,端多聚A尾巴；3,剪接：將mRNA前體上的居間順序切除，再將被隔開(kāi)的蛋白質(zhì)編碼區(qū)連接起來(lái)。剪接過(guò)程是由細(xì)胞核小分子RNA參與完成的，被切除的居間順序形成套索形；4,修飾：mRNA分子內(nèi)的某些部位常存在N6-甲基腺甘，它是由甲基化酶催化產(chǎn)生的，也是在轉(zhuǎn)錄后加工時(shí)修飾的。12,什么是RNA編輯？其生物學(xué)意義是什么？答：RNA編輯是指某些RNA特別是mRNA前體經(jīng)過(guò)插入、刪除或取代一些核甘酸殘疾等操作，導(dǎo)致DNA所編碼的遺傳信息的改變，使得經(jīng)過(guò)RNA編輯的mRNA序列發(fā)生了不同于模版的DAN的變化。生物學(xué)意義：1,校正作用，有些基因在突變的途中丟失的遺傳信息可能通過(guò)RNA的編輯得以恢復(fù)；2,調(diào)控翻譯，通過(guò)編輯可以構(gòu)建或去除其實(shí)密碼子和終止密碼子，是基因表達(dá)調(diào)控的一種方式；3,擴(kuò)充遺傳信息，能使基因產(chǎn)物獲得心得結(jié)構(gòu)核功能，有利于生物的進(jìn)化。13,核酶具有哪些結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？其生物學(xué)意義是什么？答：核酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：核酶的錘頭結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是：三個(gè)莖區(qū)形成局部的雙鏈結(jié)構(gòu)；其中含13個(gè)保守的核甘酸，N代表任何核甘酸；生物學(xué)意義：1,核酶是繼反轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象之后對(duì)中心法則的有一個(gè)重要的修正，說(shuō)明RNA既是遺傳物質(zhì)又是酶；2,核酶的發(fā)現(xiàn)為生命起源的研究提供了新思路--也許曾經(jīng)存在以RNA為基礎(chǔ)的原始生命。第四章生物信息的傳遞(下)從mRNA到蛋白質(zhì)1，遺傳密碼有哪些特征？答：1，密碼的連續(xù)性，密碼之間無(wú)間斷也沒(méi)有重疊；2,密碼的簡(jiǎn)并性，許多氨基酸都有多個(gè)密碼子；3,密碼的通用性和特殊性，遺傳密碼無(wú)論在體內(nèi)還是在體外，無(wú)論是對(duì)病毒、細(xì)菌、動(dòng)物還是植物而言都是通用的，但是也有少數(shù)例外；4,密碼子和反密碼子的相互作用。2,有幾種終止密碼子？它們的序列和別名分別是什么？答：3種，UAA、UAG和UGA，別名是無(wú)意義密碼。3,簡(jiǎn)述擺動(dòng)學(xué)說(shuō)。答：1966年，Crick根據(jù)立體化學(xué)原理提出擺動(dòng)學(xué)說(shuō)，解釋了反密碼子中某些稀有成分的配對(duì)。擺動(dòng)學(xué)說(shuō)認(rèn)為，在密碼子與反密碼子的配對(duì)中，前兩對(duì)嚴(yán)格遵守堿基配對(duì)原則，第三對(duì)堿基有一定的自由度，可以“擺動(dòng)”，因而使某些tRNA可以識(shí)別1個(gè)以上的密碼子。認(rèn)為除A-U、G-C配對(duì)外，還有非標(biāo)準(zhǔn)配對(duì)，I-A、I-C、I-U，并強(qiáng)調(diào)密碼子的5’端第1、2個(gè)堿基嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)配對(duì)，而第3個(gè)堿基可以非標(biāo)準(zhǔn)配對(duì)，具有一定程度的擺動(dòng)靈活性。4，tRNA在組成和結(jié)構(gòu)上有哪些特點(diǎn)？答：中含有稀有堿基，除ACGU外還含有雙氫尿嘧啶、假尿嘧啶等；分子形成莖環(huán)節(jié)構(gòu)；分子末端有氨基酸接納莖；分子序列中很有反密碼子。6,什么是SD序列？其功能是什么？答：SD序列是指信使核糖核酸(mRNA)翻譯起點(diǎn)上游與原核16S核糖體RNA或真核18SrRNA3,端富含嘧啶的7核甘酸序列互補(bǔ)的富含嘌吟的3?7個(gè)核甘酸序列(AGGAGG),是核糖體小亞基與mRNA結(jié)合并形成正確的前起始復(fù)合體的一段序列。功能：SD序列對(duì)mRNA的翻譯起重要作用。7,核糖體有哪些活性中心？答：核糖體包括多個(gè)活性中心，即mRNA結(jié)合部位、結(jié)合或接受AA-tRNA部位，結(jié)合或接受肽酰-tRNA部位，肽基轉(zhuǎn)移部位及形成肽鍵的部位，此外還有負(fù)責(zé)肽鏈延伸的各種延伸因子的結(jié)合位點(diǎn)。9,鏈霉素為什么能夠抑制蛋白質(zhì)的合成?答：鏈霉素是是一種氨基葡萄糖型抗生素，分子式C21H39N7O12,可以多種方式抑制原核生物核糖體，能干擾fMet-tRNA與核糖體的結(jié)合，從而阻止蛋白質(zhì)合成的正確起始，也會(huì)導(dǎo)致mRNA的錯(cuò)讀。10，什么是信號(hào)肽？它在序列組成上有什么特點(diǎn)？有什么功能？答：絕大部分被運(yùn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔的蛋白質(zhì)都帶有一個(gè)信號(hào)肽，該序列常常位于蛋白質(zhì)的氨基端，長(zhǎng)度一般都在13-16個(gè)殘基，有如下三個(gè)特征：1，一般帶有10-15個(gè)疏水殘基；2,在靠近該序列N端常常帶有一個(gè)或者數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸；3,在其C端靠近蛋白酶切割位點(diǎn)處常常帶有數(shù)個(gè)極性氨基酸。功能：完整的信號(hào)肽是保證蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的必要條件。11，簡(jiǎn)述葉綠體蛋白質(zhì)的跨膜運(yùn)輸機(jī)制。答：1，活性蛋白水解酶位于葉綠體基質(zhì)內(nèi)；2,葉綠體膜能夠特異性的與葉綠體蛋白的前體結(jié)合；3,葉綠體蛋白質(zhì)前體內(nèi)可降解序列因植物和蛋白質(zhì)種類不同而表現(xiàn)出明顯的差異；12,蛋白質(zhì)有哪些翻譯后的加工修飾？答：1、氨基端和竣基端的修飾；2.共價(jià)修飾：磷酸化、糖基化、羥基化、二硫鍵的形成；3.亞基的聚合；4.水解斷鏈，切除新生肽中非功能片段。13,什么是核定位序列？其主要功能是什么？答：核定位序列：蛋白質(zhì)的一個(gè)結(jié)構(gòu)域，通常為一短的氨基酸序列，它能與入核載體相互作用，使蛋白能被運(yùn)進(jìn)細(xì)胞核。在絕大多數(shù)多細(xì)胞真核生物中，每當(dāng)細(xì)胞發(fā)生分裂時(shí)，核膜被破壞，等到細(xì)胞分類完成后，核膜被重新建成，分散在細(xì)胞內(nèi)的核蛋白必須被重新運(yùn)入核內(nèi)，為了核蛋白的重復(fù)定位，這些蛋白質(zhì)中的信號(hào)肽■被稱為核定位序列。.什么是核信號(hào)序列，其序列組成有哪些特點(diǎn)？主要功能是什么？存在于核蛋白中，引導(dǎo)核蛋白出核的序列，稱為出核信號(hào)序列（NES）。經(jīng)典的NES序列是由疏水性氨基酸尤其是亮氨酸和異亮氨酸富集的區(qū)域構(gòu)成。功能：經(jīng)典的NES大多為CRM1依賴性。它能夠被出核因子識(shí)別并結(jié)合，從而攜帶該蛋白出核。16.增強(qiáng)子具有哪些特點(diǎn)？答：（1）增強(qiáng)相鄰啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄；（2）兩個(gè)方向都能起作用；（3）位于相鄰啟動(dòng)子的上游或下游都能起作用；（4）在遠(yuǎn)距離外也能起作用；（5）具有細(xì)胞類型的特異性。.說(shuō)出分子克隆的主要改進(jìn)過(guò)程試述基因克隆載體進(jìn)化過(guò)程。①PSC101質(zhì)粒載體，第一個(gè)基因克隆載體②ColEl質(zhì)粒載體，松弛型復(fù)制控制的多拷貝質(zhì)粒③PBR322質(zhì)粒載體，具有較小的分子量（4363bp）。能攜帶6-8kb的外源DNA片段，操作較為便利④pUC質(zhì)粒載體，具有更小的分子量和更高的拷貝數(shù)⑤PGEM-3Z質(zhì)粒，編碼有一個(gè)氨芐青霉素抗性基因和一個(gè)lacZ'基因⑥穿梭質(zhì)粒載體，由人工構(gòu)建的具有原核和真核兩種不同復(fù)制起點(diǎn)和選擇標(biāo)記，可在不同的寄主細(xì)胞內(nèi)存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體⑦pBluescript噬菌粒載體，一類從pUC載體派生而來(lái)的噬菌粒載體.試述PCR擴(kuò)增的原理和步驟。原理：首先將雙鏈DNA分子在臨近沸點(diǎn)的溫度下加熱分離成兩條單鏈DNA分子，DNA聚合酶以單鏈DNA為模板并利用反應(yīng)混合物中的四種脫氧核甘三磷酸、合適的Mg2+濃度和實(shí)驗(yàn)中提供的引物序列合成新生的DNA分子。步驟：①將含有待擴(kuò)增DNA樣品的反應(yīng)混合物放置在高溫（＞94℃）環(huán)境下加熱1分鐘，使雙鏈DNA變性，形成單鏈模板DNA②降低反應(yīng)溫度（退火，約50℃），約1分鐘，使寡核甘酸引物與兩條單鏈模板DNA結(jié)合在靶DNA區(qū)段兩端的互補(bǔ)序列位置上③將反應(yīng)混合物的溫度上升到72℃左右保溫1-數(shù)分鐘，在DNA聚合酶的作用下，從引物的3'-端加入脫氧核甘三磷酸，并沿著模板分子按5'-3'方向延伸，合成新生DNA互補(bǔ)鏈.篩選基因文庫(kù)主要有哪些方法核酸雜交法：其以廣泛的適用性和快速性成為基因文庫(kù)篩選中最常用方法之一。PCR篩選法：有很強(qiáng)的通用性，操作簡(jiǎn)單，但前提是已知足夠的序列信息并獲得基因特異性引物。免疫篩選法：免疫篩選法：基于抗體特異性結(jié)合原理，即使實(shí)驗(yàn)中靶基因的序列完全未知，只要有針對(duì)該基因產(chǎn)物的抗體，也能篩選。.基因定點(diǎn)突變的原理答：定點(diǎn)突變是重組DNA進(jìn)化的基礎(chǔ)，該方法通過(guò)改變基因特定位點(diǎn)核甘酸序列來(lái)改變所編碼的氨基酸序列，常用于研究某個(gè)氨基酸殘基對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、催化活性以及結(jié)合配體能力的影響。.基因敲除原理：又稱基因打靶，通過(guò)外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進(jìn)行精確的定點(diǎn)修飾和基因改造，具有專一性強(qiáng)、染色體DNA可與目的片段共同穩(wěn)定遺傳等特點(diǎn)方法：高等動(dòng)物基因敲除技術(shù)，植物基因敲除技術(shù).什么是完全基因敲除和條件基因敲除。完全基因敲除：是指通過(guò)同源重組法完全消除細(xì)胞或者動(dòng)物個(gè)體中的靶基因活性；條件基因敲除：是指通過(guò)定位重組系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)特定時(shí)間和空間的基因敲除。4.免疫共沉淀CoIP的原理和過(guò)程。該技術(shù)的核心是通過(guò)抗體來(lái)特異性識(shí)別候選蛋白。首先將靶蛋白的抗體通過(guò)親和反應(yīng)連接到固體基質(zhì)上，再將可能與靶蛋白發(fā)生相互作用的待篩選蛋白加入反應(yīng)體系中，用低離心力沉淀或微膜過(guò)濾法在固體基質(zhì)和抗體的共同作用下將蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀到試管的底部或微膜上。如果靶蛋白質(zhì)與待篩選蛋白質(zhì)發(fā)生了相互作用，那么這個(gè)待篩選蛋白質(zhì)就通過(guò)靶蛋白與抗體和固體基質(zhì)相互作用而被分離出來(lái)。酵母菌單雙雜交系統(tǒng)的基本原理和作用。酵母菌單雜交系統(tǒng)基本原理：首先將已知的特定順式作用元件構(gòu)建到最基本啟動(dòng)子的上游，把報(bào)告基因連接到Pmin下游。然后將編碼待測(cè)轉(zhuǎn)錄因子cDNA與已知酵母轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域融合表達(dá)載體倒導(dǎo)入酵母細(xì)胞，該基因產(chǎn)物如果能夠與順式作用元件相結(jié)合，就能激發(fā)Pmin啟動(dòng)子，是報(bào)告基因得到表達(dá)。作用：酵母單雜交系統(tǒng)主要被用于確定某DNA分子與某個(gè)蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用，用于分離編碼結(jié)合于特定順式調(diào)控元件或其他DNA位點(diǎn)的功能蛋白編碼基因，驗(yàn)證反式轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，準(zhǔn)確定位參與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的核甘酸序列。酵母雙雜交系統(tǒng)巧妙的利用真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的組件式結(jié)構(gòu)特征，因?yàn)檫@些蛋白往往由兩個(gè)或兩個(gè)以上相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。其中DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD）是轉(zhuǎn)錄激活因子發(fā)揮功能所必需的。單獨(dú)的BD能與特定基因的啟動(dòng)區(qū)結(jié)合，但不能激活基因的轉(zhuǎn)錄，而由不同轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的BD和AD所形成的雜合蛋白卻能行使激活轉(zhuǎn)錄的功能。.說(shuō)出經(jīng)典遺傳學(xué)和現(xiàn)代遺傳學(xué)的異同。經(jīng)典遺傳學(xué)認(rèn)為基因是一個(gè)最小的單位，不能分割，既是結(jié)構(gòu)單位又是功能單位。現(xiàn)代基因概念：基因是DNA分子上帶有遺傳信息的特定核甘酸序列區(qū)段；基因由重組子、突變子序列構(gòu)成，重組子是DNA重組的最小交換單位，突變子是基因突變的最小單位，重組子和突變子都是一個(gè)核甘酸對(duì)堿基對(duì)；基因決定某一性狀表現(xiàn)，可以包含多個(gè)功能單位（順?lè)醋樱Ｕ婧嗽说谋容^5,比較原核與真核的核糖體組成。答：1，真核細(xì)胞中的核糖體數(shù)量多余原核；2,真核細(xì)胞中核糖體RNA占細(xì)胞中總RNA的量少于原核；3,原核生物的核糖體通過(guò)與mRNA的相互作用，被固定在核基因組上，真核生物的核糖體則直接或間接的與細(xì)胞骨架有關(guān)聯(lián)或者與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相連；4,原核生物核糖體由約RNA占2/3及1/3的蛋白組成，真核生物核糖體中RNA占3/5,蛋白質(zhì)占2/5。1.比較真核生物與原核生物轉(zhuǎn)錄起始的第一步有什么不同。答：原核生物中，具有特異識(shí)別能力的。亞基識(shí)別轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游的啟動(dòng)字同源序列，這樣可以使全酶與啟動(dòng)子序列結(jié)合力增加，形成閉合的二元起始復(fù)合物。關(guān)鍵的作用時(shí)RNA聚合酶與DNA的相互作用。真核生物中，當(dāng)含TBP的轉(zhuǎn)錄因子與DNA相互作用時(shí)，其它轉(zhuǎn)錄因子也結(jié)合上來(lái)，形成起始復(fù)合體，這一復(fù)合物在于RNA聚合酶結(jié)合，因此主要是RNA與蛋白質(zhì)之間的作用。5.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？①結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)練原核DNA分子的絕大部分是用來(lái)編碼蛋白質(zhì)，只有非常小的一部分不轉(zhuǎn)錄，這與真核DNA的冗余現(xiàn)象不同。存在轉(zhuǎn)錄單元原核生物DNA序列中功能相關(guān)的RNA和蛋白質(zhì)基因，往往叢集在基因組的一個(gè)或幾個(gè)特定部位，形成功能單元或轉(zhuǎn)錄單元，它們可被一起轉(zhuǎn)錄為含多個(gè)mRNA的分子，稱為多順?lè)醋觤RNA。有重疊基因 重疊基因，即同一段DNA能攜帶兩種不同蛋白質(zhì)信息。主要有以下幾種情況①一個(gè)基因完全在另一個(gè)基因里面②部分重疊③兩個(gè)基因只有一個(gè)堿基對(duì)是重疊的15.列舉原核生物同真核生物轉(zhuǎn)錄的差異原核生物真核生物1、一種RNA聚合酶1、三種RNA聚合酶2、不同啟動(dòng)子具相當(dāng)大的同源性2、不同啟動(dòng)子的差異大3、聚合酶直接與啟動(dòng)子結(jié)合3、聚合酶通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子相互作用進(jìn)行結(jié)合4、沒(méi)有增強(qiáng)子4、有增強(qiáng)子5、轉(zhuǎn)錄作用的終止腌幾個(gè)多聚U前面形成莖環(huán)5、轉(zhuǎn)錄的終止是靠轉(zhuǎn)錄過(guò)程特殊的核酸內(nèi)切酶切割的序列介導(dǎo)6、聚合酶III的啟動(dòng)子位于被轉(zhuǎn)錄的序列之中6、啟動(dòng)子通常位于基因的上游7、轉(zhuǎn)錄單位只含一基因7、轉(zhuǎn)錄單位常常含有多基因期中考過(guò)的2..解釋在DNA復(fù)制過(guò)程中，后隨鏈?zhǔn)窃鯓雍铣傻摹４穑篋NA聚合酶只能朝5'-3'方向合成DNA,后隨鏈不能像前導(dǎo)鏈一樣一直進(jìn)行合成。后隨鏈?zhǔn)且源罅开?dú)立片段（岡崎片段）合成的，每個(gè)片段都以5'-3'方向合成，這些片段最后由連接酶連接在一起。每個(gè)片段獨(dú)立引發(fā)、聚合、連接。8,簡(jiǎn)述原核生物和真核生物0處人的區(qū)別。答：1,原核生物mRNA常以多順?lè)醋拥男问酱嬖?。真核生物mRNA一般以單順?lè)醋拥男问酱嬖冢?,原核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄與翻譯一般是偶聯(lián)的，真核生物轉(zhuǎn)錄的mRNA前體則需經(jīng)轉(zhuǎn)錄后加工，加工為成熟的mRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合生成信息體后才開(kāi)始工作；3,原核生物mRNA半壽期很短，一般為幾分鐘，最長(zhǎng)只有數(shù)小時(shí)。真核生物mRNA的半壽期較長(zhǎng)，如胚胎中的mRNA可達(dá)數(shù)日；4,原核與真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)也不同，原核生物的mRNA的5’端無(wú)帽子結(jié)構(gòu)，3’端沒(méi)有或只有較短的polyA結(jié)構(gòu)。11,簡(jiǎn)述1、11類內(nèi)含子的剪接特點(diǎn)。答：1類內(nèi)含子的剪接主要是轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，即剪接反應(yīng)實(shí)際上是發(fā)生了兩次磷酸二脂鍵的轉(zhuǎn)移。在I類內(nèi)含子的切除體系中，第一個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)由一個(gè)游離的鳥(niǎo)昔或者鳥(niǎo)甘酸介導(dǎo)，鳥(niǎo)昔或鳥(niǎo)甘酸的3'一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子5’端的磷酸二脂鍵，從上游切開(kāi)RNA鏈。在第二個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中，上游外顯子的自由3’一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子3’位核甘酸上的磷酸二脂鍵，使內(nèi)含子被完全切開(kāi)，上下游兩個(gè)外顯子通過(guò)新的磷酸二脂鍵相連。II類內(nèi)含子主要存在于真核生物的線粒體和葉綠體rRNA基因中，在H類內(nèi)含子切除體系中，轉(zhuǎn)酯反應(yīng)無(wú)需游離鳥(niǎo)昔或鳥(niǎo)甘酸，而是由內(nèi)含子本身的靠近3’端的腺甘酸2’一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子5’端的磷酸二脂鍵，從上游切開(kāi)RNA鏈后形成套索結(jié)構(gòu)。再由上游外顯子的自由3’一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子3’位核甘酸上的磷酸二脂鍵，使得內(nèi)含子被完全切開(kāi)，上下游兩個(gè)內(nèi)含子通過(guò)新的磷酸二脂鍵相連。8,真核生物與原核生物在翻譯起始過(guò)程中有哪些區(qū)別？答：原核生物的起始tRNA是fMet-tRNA，真核生物是Met-tRNAMet。原核生物中30S小亞基首先與mRNA模版相結(jié)合，再與fMet-tRNA結(jié)合，最后與50S大亞基結(jié)合。而在真核生物中，40S小亞基首先與Met-tRNAMet相結(jié)合，再與模版mRNA結(jié)合，最后與60S大亞基結(jié)合生成起始復(fù)合物。簡(jiǎn)述代謝物對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的兩種方式。原核生物代謝物對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的方式有兩種：可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)和可阻遏調(diào)節(jié)?？烧T導(dǎo)調(diào)節(jié)：是指一些基因在特殊的代謝物或化合物的作用下，由原來(lái)關(guān)閉的狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣ぷ鳡顟B(tài)，即在某些物質(zhì)的誘導(dǎo)下使基因活化;可阻遏調(diào)節(jié)：這類基因平時(shí)都是開(kāi)啟的，處在產(chǎn)生蛋白質(zhì)或酶的工作過(guò)程中，由于一些特殊代謝物或化合物的積累而將其關(guān)閉，阻遏了基因的表達(dá)。什么是操縱子學(xué)說(shuō)？操作子學(xué)說(shuō)是關(guān)于原核生物基因結(jié)構(gòu)及基因表達(dá)調(diào)控的學(xué)說(shuō)，由雅各布（F.Jacob）和莫諾于1961年提出，并在10年內(nèi)經(jīng)許多科學(xué)家的補(bǔ)充和修正得以完成。簡(jiǎn)述乳糖操縱子的調(diào)控模型。乳糖操縱子包括調(diào)節(jié)基因、啟動(dòng)基因、操縱基因和結(jié)構(gòu)基因。大腸桿菌的lac操縱子受到兩方面的調(diào)控：一是對(duì)RNA聚合酶結(jié)合到啟動(dòng)子上去的調(diào)控（陽(yáng)性）；二是對(duì)操縱基因的調(diào)控（陰性）。在含葡萄糖的培養(yǎng)基中大腸桿菌不能利用乳糖，只有改用乳糖時(shí)才能利用乳糖。DNA甲基化對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。大量研究表明，DNA甲基化能關(guān)閉某些基因達(dá)的活性，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。三種調(diào)控機(jī)制：一是DNA甲基化導(dǎo)致了某些區(qū)域DNA構(gòu)象變化，從而影響了蛋白質(zhì)和DNA的相互作用，抑制了轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)區(qū)DNA的結(jié)合效率。二是促進(jìn)阻遏蛋白的阻遏作用。三是DNA的甲基化還提高了該位點(diǎn)的突變頻率。簡(jiǎn)述增強(qiáng)子的作用機(jī)理。增強(qiáng)子是指能使與它連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列?？赡苡?種作用機(jī)制：（1）影響模版附近的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致DNA雙螺旋彎折或在反式因子的參與下，以蛋白質(zhì)之間的相互作用為媒介形成增強(qiáng)子魚(yú)啟動(dòng)子之間“成環(huán)”連接，活化基因轉(zhuǎn)錄。（2）將模版固定在細(xì)胞核內(nèi)特定位置，如連接在核基質(zhì)上，有利于DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶改變0附雙螺旋結(jié)構(gòu)的張力，促進(jìn)RNA聚合酶H在DNA鏈上的結(jié)合和滑動(dòng)。（3）增強(qiáng)子區(qū)可以作為反式作用因子或RNA聚合酶^進(jìn)入染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的“入口”。第一章1簡(jiǎn)述孟德?tīng)?、摩爾根和沃森等人?duì)分子生物學(xué)發(fā)展的主要貢獻(xiàn)答：孟德?tīng)柕膶?duì)分子生物學(xué)的發(fā)展的主要貢獻(xiàn)在于他通過(guò)豌豆實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了遺傳規(guī)律、分離規(guī)律及自由組合規(guī)律；摩爾根的主要貢獻(xiàn)在于發(fā)現(xiàn)染色體的遺傳機(jī)制，創(chuàng)立染色體遺傳理論，成為現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)生物學(xué)奠基人；沃森和克里克在1953年提出DAN反向雙平行雙螺旋模型。2寫(xiě)出DNARNA的英文全稱答：脫氧核糖核酸（DNA,Deoxyribonucleicacid）,核糖核酸（RNA,Ribonucleicacid）3試述“有其父必有其子”的生物學(xué)本質(zhì)答：其生物學(xué)本質(zhì)是基因遺傳。子代的性質(zhì)由遺傳所得的基因決定，而基因由于遺傳的作用，其基因的一半來(lái)自于父方，一般來(lái)自于母方。4早期主要有哪些實(shí)驗(yàn)證實(shí)DNA是遺傳物質(zhì)？寫(xiě)出這些實(shí)驗(yàn)的主要步驟答：一，肺炎雙球菌感染實(shí)驗(yàn)，1,R型菌落粗糙，菌體無(wú)多糖莢膜，無(wú)毒，注入小鼠體內(nèi)后，小鼠不死亡。2,S型菌落光滑，菌體有多糖莢膜，有毒，注入到小鼠體內(nèi)可以使小鼠患病死亡。3,用加熱的方法殺死5型細(xì)菌后注入到小鼠體內(nèi)，小鼠不死亡；二，噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)：1,噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)過(guò)程：吸附一侵入一復(fù)制一組裝f釋放。2,DNA中P的含量多，蛋白質(zhì)中P的含量少；蛋白質(zhì)中有S而DNA中沒(méi)有S,所以用放射性同位素35S標(biāo)記一部分噬菌體的蛋白質(zhì)，用放射性同位素32P標(biāo)記另一部分噬菌體的DNA。用35P標(biāo)記蛋白質(zhì)的噬菌體侵染后，細(xì)菌體內(nèi)無(wú)放射性，即表明噬菌體的蛋白質(zhì)沒(méi)有進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部；而用32P標(biāo)記DNA的噬菌體侵染細(xì)菌后，細(xì)菌體內(nèi)有放射性，即表明噬菌體的DNA進(jìn)入了細(xì)菌體內(nèi)。三，煙草TMV的重建實(shí)驗(yàn)：1957年，F(xiàn)raenkel-Conrat等人，將兩個(gè)不同的TMV株系（S株系和HR株系）的蛋白質(zhì)和RNA分別提取出來(lái)，然后相互對(duì)換，將S株系的蛋白質(zhì)和HR株系的RNA,或反過(guò)來(lái)將HR株系的蛋白質(zhì)和S株系的RNA放在一起，重建形成兩種雜種病毒，去感染煙草葉片。5請(qǐng)定義DNA重組技術(shù)和基因工程技術(shù)答：DNA重組技術(shù)：目的是將不同的DNA片段（如某個(gè)基因或基因的一部分）按照人們的設(shè)計(jì)定向連接起來(lái)，然后在特定的受體細(xì)胞中與載體同時(shí)復(fù)制并得到表達(dá)，產(chǎn)生影響受體細(xì)胞的新的遺傳性狀?；蚬こ碳夹g(shù)：是除了包含DNA重組技術(shù)外還包括其他可能是生物細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)得到改造的體系，基因工程是指技術(shù)重組DNA技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化設(shè)計(jì)與應(yīng)用，包括上游技術(shù)和下游技術(shù)兩大組成部分。上游技術(shù)指的是基因重組、克隆和表達(dá)的設(shè)計(jì)與構(gòu)建（即重組DNA技術(shù)）；而下游技術(shù)則涉及到基因工程菌或細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)以及基因產(chǎn)物的分離純化過(guò)程。6寫(xiě)出分子生物學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容。答：1，DNA重組技術(shù)；2,基因表達(dá)調(diào)控研究；3,生物大分子的結(jié)構(gòu)功能研究結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)；4,基因組、功能基因組與生物信息學(xué)研究。7.分子生物學(xué)的定義答：廣義的分子生物學(xué)：蛋白質(zhì)及核酸等生物大分子結(jié)構(gòu)和功能的研究都屬于分子生物學(xué)的范疇，即從分子水平闡明生命現(xiàn)象和生物學(xué)規(guī)律狹義的分子生物學(xué)：偏重于核酸（基因）的分子生物學(xué)，主要研究基因或DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、表達(dá)和調(diào)控等過(guò)程，當(dāng)然也涉及與這些過(guò)程相關(guān)的蛋白質(zhì)和酶的結(jié)構(gòu)與功能的研究第二章1，染色體具備哪些作為遺傳物質(zhì)的特性？答：1，分子結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定；2,能夠自我復(fù)制，使得親子代之間保持連續(xù)性；3,能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成，從而控制整個(gè)生命活動(dòng)的過(guò)程；4,能夠產(chǎn)生可遺傳的變異。2,什么是核小體？簡(jiǎn)述其形成過(guò)程。答：核小體是染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位，由~200bpDNA和組蛋白八聚體組成。形成過(guò)程：核小體是由H2A、H2B、H3、H4各兩個(gè)分子生成的八聚體和由大約200bp的DNA組成的。形成核小體時(shí)八聚體在中間，DNA分子盤(pán)繞在外組成真核細(xì)胞染色體的一種重復(fù)珠狀結(jié)構(gòu)。3簡(jiǎn)述真核生物染色體的組成及組裝過(guò)程答：組成：蛋白質(zhì)+核酸。組裝過(guò)程：1,首先組蛋白組成盤(pán)裝八聚體，DNA纏繞其上，成為核小體顆粒，兩個(gè)顆粒之間經(jīng)過(guò)DNA連接，形成外徑10nm的纖維狀串珠，稱為核小體串珠纖維；2,核小體串珠纖維在酶的作用下形成每圈6個(gè)核小體，外徑30nm的螺旋結(jié)構(gòu)；3,螺旋結(jié)構(gòu)再次螺旋化，形成超螺旋結(jié)構(gòu)；4,超螺線管，形成絆環(huán)，即線性的螺線管形成的放射狀環(huán)。絆環(huán)再非組蛋白上纏繞即形成了顯微鏡下可見(jiàn)的染色體結(jié)構(gòu)。4,簡(jiǎn)述DNA的一、二、三級(jí)結(jié)構(gòu)特征。答：1,DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)，就是指4種核甘酸的連接及排列順序，表示了該DNA分子的化學(xué)成分；2,DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)是指兩條多核甘酸連反向平行盤(pán)繞所形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)；3,DNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)是指0附雙螺旋進(jìn)一步扭曲盤(pán)繞所形成的特定空間結(jié)構(gòu)。6,原核生物DNA與真核生物有哪些不同的特征？答：（1）DNA雙螺旋是由兩條互相平行的脫氧核甘酸長(zhǎng)鏈盤(pán)繞而成的，多核甘酸的方向由核甘酸間的磷酸二酯鍵的走向決定，一條是53,另一條是3——5。（2）DNA雙螺旋中脫氧核糖和磷酸交替連接，排在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架，堿基排列在內(nèi)側(cè)（3）其兩條鏈上的堿基通過(guò)氫鍵相結(jié)合，形成堿基對(duì)意義：該模型揭示YDNA作為遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性特征，最有價(jià)值的是確認(rèn)了堿基配對(duì)原則，這是DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄的分子基礎(chǔ)，亦是遺傳信息傳遞和表達(dá)的分子基礎(chǔ)。該模型的提出是20世紀(jì)生命科學(xué)的重大突破之一，它奠定了生物化學(xué)和分子生物學(xué)乃至整個(gè)生命科學(xué)飛速發(fā)展的基石DNA復(fù)制通常采取哪些方式。答：一，線性DNA雙鏈的復(fù)制：1，將線性復(fù)制子轉(zhuǎn)變?yōu)榄h(huán)裝或者多聚分子；2,在DNA末端形成發(fā)卡式結(jié)構(gòu)，使分子沒(méi)有游離末端；3,在某種蛋白質(zhì)的介入下（如末端蛋白，terminalprotein）,在真正的末端上啟動(dòng)復(fù)制。二，環(huán)狀DNA的復(fù)制：1,。型；2,滾環(huán)形；3,D一環(huán)形（D--loop）。8,簡(jiǎn)述原核生物的DNA復(fù)制特點(diǎn)。答：1,與真核生物不同，原核生物的DNA復(fù)制只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；2,真核生物的染色體全部完成復(fù)制之前，各個(gè)起始點(diǎn)上DNA的復(fù)制不能在開(kāi)始，而在快速生長(zhǎng)的原核生物中，復(fù)制起始點(diǎn)上可以連續(xù)開(kāi)始新的DNA的復(fù)制，變現(xiàn)為雖然只有一個(gè)復(fù)制單元，但可有多個(gè)復(fù)制叉；9,真核生物的DNA的復(fù)制在那些水平上受到調(diào)控？答：1,細(xì)胞生活周期水平調(diào)控；2,染色體水平調(diào)控；3,復(fù)制子水平調(diào)控。10,細(xì)胞通過(guò)哪些修復(fù)系統(tǒng)對(duì)DNA損傷進(jìn)行修復(fù)？答：1,錯(cuò)配修復(fù)，恢復(fù)錯(cuò)配；2,切除修復(fù)，切除突變的堿基和核甘酸序列；3,重組修復(fù)，復(fù)制后的修復(fù)，重新啟動(dòng)停滯的復(fù)制叉；4,DNA的直接修復(fù)，修復(fù)嘧啶二聚體和甲基化的DNA；5,SOS系統(tǒng)，DNA的修復(fù)，導(dǎo)致突變。11,什么是轉(zhuǎn)座子？可以分為哪些種類？答：轉(zhuǎn)座子是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和移位的基本單位。轉(zhuǎn)座子可分為兩大類：插入序列和復(fù)合型轉(zhuǎn)座子。12,請(qǐng)說(shuō)說(shuō)插入序列與復(fù)合型轉(zhuǎn)座子之間的異同。答：插入序列是最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子，它不含有任何宿主基因，它們是細(xì)菌染色體或質(zhì)木iDNA的正常組成部分，一般插入序列都是很小的DNA片段，末端帶有倒置重復(fù)序列；復(fù)合型轉(zhuǎn)座子是一類帶有某些抗藥性基因的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往帶有兩個(gè)或者相同高度同源的IS序列，一旦形成復(fù)合轉(zhuǎn)座子，IS序列就不能移動(dòng)，因?yàn)樗麄兊墓δ鼙恍揎椓?，只能作為?fù)合體移動(dòng)。第三章1,什么是編碼鏈？什么是模版鏈？答：與mRNA序列相同的那條DNA鏈稱為編碼鏈（或有意義鏈）；另一條根據(jù)堿基互補(bǔ)原則指導(dǎo)mRNA合成DNA鏈稱為模版鏈（或反義鏈）。2,簡(jiǎn)述RNA轉(zhuǎn)錄的概念及其基本過(guò)程。答：RNA轉(zhuǎn)錄：以DNA中的一條單鏈為模板，游離堿基為原料，在DNA依賴的RNA聚合酶催化下合成RNA鏈的過(guò)程?；具^(guò)程：模版識(shí)別一轉(zhuǎn)錄開(kāi)始一轉(zhuǎn)錄延伸一轉(zhuǎn)錄終止。3,大腸桿菌的RNA聚合酶有哪些組成成分？各個(gè)亞基的作用如何？答：大腸桿菌的RNA聚合酶由2個(gè)a亞基、一個(gè)B亞基、一個(gè)B'亞基和一個(gè)3亞基組成的核心酶，加上一個(gè)。亞基后則成為聚合酶全酶。a亞基肯能與核心酶的組裝及啟動(dòng)子的識(shí)別有關(guān)，并參與RNA聚合酶和部分調(diào)節(jié)因子的相互作用；B亞基和B'亞基組成了聚合酶的催化中心，8亞基能與模版DNA、新生RNA鏈及核甘酸底物相結(jié)合。4,什么是封閉復(fù)合物、開(kāi)放復(fù)合物以及三元復(fù)合物？答：模版的識(shí)別階段，聚合酶與啟動(dòng)子可逆性結(jié)合形成封閉性復(fù)合物；封閉性復(fù)合物形成后，此時(shí)，DNA鏈仍然處于雙鏈狀態(tài)，伴隨著DNA構(gòu)象的重大變化，封閉性復(fù)合物轉(zhuǎn)化為開(kāi)放復(fù)合物；開(kāi)放復(fù)合物與最初的兩個(gè)NTP相結(jié)合并在這兩個(gè)核甘酸之間形成磷酸二脂鍵后即轉(zhuǎn)變成包括RNA聚合酶、DNA和新生RNA的三元復(fù)合物。5,簡(jiǎn)述。因子的作用。答：1,。因子的作用是負(fù)責(zé)模版鏈的選擇和轉(zhuǎn)錄的起始，它是酶的別構(gòu)效應(yīng)物，使酶專一性識(shí)別模版上的啟動(dòng)子;2,。因子可以極大的提高RNA聚合酶對(duì)啟動(dòng)子區(qū)DNA序列的親和力；3,。因子還能使RNA聚合酶與模版DNA上非特異性位點(diǎn)結(jié)合常數(shù)降低。6,什么是Pribnowbox？它的保守序列是什么？答：pribnowbox是原核生物中中央大約位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游10bp處的TATA區(qū)，所以又稱作-10區(qū)。它的保守序列是TATAATo7,什么是上升突變？什么是下降突變？答：上升突變：細(xì)菌中常見(jiàn)的啟動(dòng)自突變之一，突變導(dǎo)致Pribnow區(qū)共同序列的同一性增加；下降突變：細(xì)菌中常見(jiàn)的啟動(dòng)子突變之一，突變導(dǎo)致結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平大大降低，如Pribnow區(qū)從TATAAT變成AATAATo8,簡(jiǎn)述原核生物和真核生物mRNA的區(qū)別。答：1,原核生物mRNA常以多順?lè)醋拥男问酱嬖?。真核生物mRNA一般以單順?lè)醋拥男问酱嬖冢?,原核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄與翻譯一般是偶聯(lián)的，真核生物轉(zhuǎn)錄的mRNA前體則需經(jīng)轉(zhuǎn)錄后加工，加工為成熟的mRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合生成信息體后才開(kāi)始工作；3,原核生物mRNA半壽期很短，一般為幾分鐘，最長(zhǎng)只有數(shù)小時(shí)。真核生物mRNA的半壽期較長(zhǎng)，如胚胎中的mRNA可達(dá)數(shù)日；4,原核與真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)也不同，原核生物的mRNA的5’端無(wú)帽子結(jié)構(gòu)，3’端沒(méi)有或只有較短的polyA結(jié)構(gòu)。9,大腸桿菌的終止子有哪兩大類？請(qǐng)分別介紹一下它們的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。答：大腸桿菌的終止子可以分為不依賴于p因子和依賴于p因子兩大類。不依賴于p因子的終止子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1，位于位點(diǎn)上游一般存在一個(gè)富含GC堿基的二重對(duì)稱區(qū)，由這段DNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA容易形成發(fā)卡式結(jié)構(gòu)。2,在終止位點(diǎn)前面有一端由4—8個(gè)A組成的序列，所以轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3’端為寡聚U。依賴于p因子的終止子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：10，真核生物的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物必須經(jīng)過(guò)哪些加工才能成為成熟的mRNA，以用作蛋白質(zhì)合成的模版。答：加工包括：（1）5’端連接“帽子”結(jié)構(gòu)；（2）3’端添加polyA“尾巴”；（3）hnRNA被剪接，把內(nèi)含子①NA上非編碼序列）轉(zhuǎn)錄序列剪掉，把外顯子DNA上的編碼序列）轉(zhuǎn)錄序列拼接上（真核生物一般為不連續(xù)基因）。（4）分子內(nèi)部的核甘酸甲基化修飾11,簡(jiǎn)述i、n類內(nèi)含子的剪接特點(diǎn)。答：I類內(nèi)含子的剪接主要是轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，即剪接反應(yīng)實(shí)際上是發(fā)生了兩次磷酸二脂鍵的轉(zhuǎn)移。i類內(nèi)含子的切除體系中，在第一個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)由一個(gè)游離的鳥(niǎo)昔或者鳥(niǎo)甘酸介導(dǎo)，鳥(niǎo)昔或鳥(niǎo)甘酸的3’一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子5’端的磷酸二脂鍵，從上游切開(kāi)RNA鏈。在第二個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中，上游外顯子的自由3’一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子3’位核甘酸上的磷酸二脂鍵，使內(nèi)含子被完全切開(kāi)，上下游兩個(gè)外顯子通過(guò)新的磷酸二脂鍵相連。II類內(nèi)含子主要存在于真核生物的線粒體和葉綠體rRNA基因中，在H類內(nèi)含子切除體系中，轉(zhuǎn)酯反應(yīng)無(wú)需游離鳥(niǎo)苷或鳥(niǎo)甘酸，而是由內(nèi)含子本身的靠近3’端的腺甘酸2'一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子5’端的磷酸二脂鍵，從上游切開(kāi)RNA鏈后形成套索結(jié)構(gòu)。再由上游外顯子的自由3’一OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子3’位核昔酸上的磷酸二脂鍵，使得內(nèi)含子被完全切開(kāi)，上下游兩個(gè)內(nèi)含子通過(guò)新的磷酸二脂鍵相連。12,什么是RNA編輯？其生物學(xué)意義是什么？答：RNA編輯是指某些RNA特別是mRNA前體經(jīng)過(guò)插入、刪除或取代一些核甘酸殘疾等操作，導(dǎo)致DNA所編碼的遺傳信息的改變，使得經(jīng)過(guò)RNA編輯的mRNA序列發(fā)生了不同于模版的DAN的變化。生物學(xué)意義：1,校正作用，有些基因在突變的途中丟失的遺傳信息可能通過(guò)RNA的編輯得以恢復(fù)；2,調(diào)控翻譯，通過(guò)編輯可以構(gòu)建或去除其實(shí)密碼子和終止密碼子，是基因表達(dá)調(diào)控的一種方式；擴(kuò)充遺傳信息，3,能使基因產(chǎn)物獲得心得結(jié)構(gòu)核功能，有利于生物的進(jìn)化。13,核酶具有哪些結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？其生物學(xué)意義是什么？答：核酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：核酶的錘頭結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是：三個(gè)莖區(qū)形成局部的雙鏈結(jié)構(gòu)；其中含13個(gè)保守的核甘酸，N代表任何核甘酸；生物學(xué)意義：1,核酶是繼反轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象之后對(duì)中心法則的有一個(gè)重要的修正，說(shuō)明RNA既是遺傳物質(zhì)又是酶；2,核酶的發(fā)現(xiàn)為生命起源的研究提供了新思路——-也許曾(經(jīng)存在以RNA為基礎(chǔ)的原始生命.第四章1，遺傳密碼有哪些特征？答：1，密碼的連續(xù)性，密碼之間無(wú)間斷也沒(méi)有重疊；2,密碼的簡(jiǎn)并性，許多氨基酸都有多個(gè)密碼子；3,密碼的通用性和特殊性，遺傳密碼無(wú)論在體內(nèi)還是在體外，無(wú)論是對(duì)病毒、細(xì)菌、動(dòng)物還是植物而言都是通用的，但是也有少數(shù)例外；4,密碼子和反密碼子的相互作用。2,有幾種終止密碼子？它們的序列和別名分別是什么？答：3種，UAA、UAG和UGA，別名是無(wú)意義密碼。3,簡(jiǎn)述擺動(dòng)學(xué)說(shuō)。答：1966年，Crick根據(jù)立體化學(xué)原理提出擺動(dòng)學(xué)說(shuō)，解釋了反密碼子中某些稀有成分的配對(duì)。擺動(dòng)學(xué)說(shuō)認(rèn)為，在密碼子與反密碼子的配對(duì)中，前兩對(duì)嚴(yán)格遵守堿基配對(duì)原則，第三對(duì)堿基有一定的自由度，可以“擺動(dòng)”，因而使某些tRNA可以識(shí)別1個(gè)以上的密碼子。認(rèn)為除A-U、G-C配對(duì)外，還有非標(biāo)準(zhǔn)配對(duì)，I-A、I-C、I-U，并強(qiáng)調(diào)密碼子的5’端第1、2個(gè)堿基嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)配對(duì)，而第3個(gè)堿基可以非標(biāo)準(zhǔn)配對(duì)，具有一定程度的擺動(dòng)靈活性。4,tRNA在組成和結(jié)構(gòu)上有哪些特點(diǎn)答：中含有稀有堿基，除ACGU外還含有雙氫尿嘧啶、假尿嘧啶等；分子形成莖環(huán)節(jié)構(gòu)；分子末端有氨基酸接納莖；分子序列中很有反密碼子。5,比較原核與真核的核糖體組成。答：1，真核細(xì)胞中的核糖體數(shù)量多余原核；2,真核細(xì)胞中核糖體RNA占細(xì)胞中總RNA的量少于原核；3,原核生物的核糖體通過(guò)與mRNA的相互作用，被固定在核基因組上，真核生物的核糖體則直接或間接的與細(xì)胞骨架有關(guān)聯(lián)或者與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相連；4,原核生物核糖體由約RNA占2/3及1/3的蛋白組成，真核生物核糖體中RNA占3/5,蛋白質(zhì)占2/5。6,什么是SD序列？其功能是什么？答：SD序列是指信使核糖核酸(mRNA)翻譯起點(diǎn)上游與原核16S核糖體RNA或真核18SrRNA3,端富含嘧啶的7核甘酸序列互補(bǔ)的富含嘌吟的3?7個(gè)核甘酸序列(AGGAGG),是核糖體小亞基與mRNA結(jié)合并形成正確的前起始復(fù)合體的一段序列。功能：SD序列對(duì)mRNA的翻譯起重要作用。7,核糖體有哪些活性中心？答：核糖體包括多個(gè)活性中心，即mRNA結(jié)合部位、結(jié)合或接受AA-tRNA部位，結(jié)合或接受肽酰-tRNA部位，肽基轉(zhuǎn)移部位及形成肽鍵的部位，此外還有負(fù)責(zé)肽鏈延伸的各種延伸因子的結(jié)合位點(diǎn)。8,真核生物與原核生物在翻譯起始過(guò)程中有哪些區(qū)別?答：原核生物的起始tRNA是fMet-tRNA,真核生物是Met-tRNAMet。原核生物中30S小亞基首先與mRNA模版相結(jié)合，再與fMet-tRNA結(jié)合，最后與50S大亞基結(jié)合。而在真核生物中，40S小亞基首先與Met-tRNAMet相結(jié)合，再與模版mRNA結(jié)合，最后與60S大亞基結(jié)合生成起始復(fù)合物。9,鏈霉素為什么能夠抑制蛋白質(zhì)的合成？答：鏈霉素是是一種氨基葡萄糖型抗生素，分子式C21H39N7O12,可以多種方式抑制原核生物核糖體，能干擾fMet-tRNA與核糖體的結(jié)合，從而阻止蛋白質(zhì)合成的正確起始，也會(huì)導(dǎo)致mRNA的錯(cuò)讀。10，什么是信號(hào)肽？它在序列組成上有什么特點(diǎn)？有什么功能？答：絕大部分被運(yùn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔的蛋白質(zhì)都帶有一個(gè)信號(hào)肽，該序列常常位于蛋白質(zhì)的氨基端，長(zhǎng)度一般都在13-16個(gè)殘基，有如下三個(gè)特征：1，一般帶有10-15個(gè)疏水殘基；2,在靠近該序列N端常常帶有一個(gè)或者數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸；3,在其C端靠近蛋白酶切割位點(diǎn)處常常帶有數(shù)個(gè)極性氨基酸。功能：完整的信號(hào)肽是保證蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的必要條件。11，簡(jiǎn)述葉綠體蛋白質(zhì)的跨膜運(yùn)輸機(jī)制。答：1，活性蛋白水解酶位于葉綠體基質(zhì)內(nèi)；2,葉綠體膜能夠特異性的與葉綠體蛋白的前體結(jié)合；3,葉綠體蛋白質(zhì)前體內(nèi)可降解序列因植物和蛋白質(zhì)種類不同而表現(xiàn)出明顯的差異；12,蛋白質(zhì)有哪些翻譯后的加工修飾？答：1、氨基端和竣基端的修飾；2.共價(jià)修飾：磷酸化、糖基化、羥基化、二硫鍵的形成；3.亞基的聚合；4.水解斷鏈，切除新生肽中非功能片段。13,什么是核定位序列？其主要功能是什么？答：核定位序列：蛋白質(zhì)的一個(gè)結(jié)構(gòu)域，通常為一短的氨基酸序列，它能與入核載體相互作用，使蛋白能被運(yùn)進(jìn)細(xì)胞核。在絕大多數(shù)多細(xì)胞真核生物中，每當(dāng)細(xì)胞發(fā)生分裂時(shí)，核膜被破壞，等到細(xì)胞分類完成后，核膜被重新建成，分散在細(xì)胞內(nèi)的核蛋白必須被重新運(yùn)入核內(nèi)，為了核蛋白的重復(fù)定位，這些蛋白質(zhì)中的信號(hào)肽■被稱為核定位序列。AA**第五章分子生物學(xué)的研究方法（上）1，哪些重要的科學(xué)發(fā)現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)推動(dòng)YDNA重組技術(shù)的產(chǎn)生和發(fā)展？答：1，確定遺傳信息的攜帶者是DNA而不是蛋白質(zhì)；2,DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)制的提出；3，中心法則，操縱子學(xué)說(shuō)的提出和密碼子的破譯；4,重組工具酶的發(fā)現(xiàn)；5,運(yùn)載體重組質(zhì)粒的發(fā)現(xiàn)。2,如何理解PCR擴(kuò)增的原理和過(guò)程。答：原理：DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。過(guò)程：1，變性，將DNA在臨近沸點(diǎn)的溫度下加熱使變性，雙鏈打開(kāi)；2,退火，引物與模版的相結(jié)合；3,鏈的延伸，DNA合成。3,簡(jiǎn)述定量PCR的原理和過(guò)程。答：實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)在帶透明蓋的塑料小管中進(jìn)行，激發(fā)光可以直接頭孤傲管蓋，使其中的熒光探針被激發(fā)。一逛探針事先混合在PCR反應(yīng)液中，只有與DNA結(jié)合之后，才能被激發(fā)發(fā)出熒光。隨著新和成DNA片段的增加，結(jié)合到DNA上的熒光探針，即被激發(fā)產(chǎn)生的熒光增加。4,基因組DNA文庫(kù)和cDNA文庫(kù)在構(gòu)建原理和用途上的主要區(qū)別是什么？答：基因組DNA是把某種生物的基因組DNA切成適當(dāng)大小，分別與載體結(jié)合，導(dǎo)入微生物細(xì)胞形成克隆。應(yīng)用：主要用于基因組作圖、測(cè)序和克隆序列的對(duì)比。cDNA文庫(kù)是以mRNA為模版反轉(zhuǎn)錄而成的序列，與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA,并能繁殖擴(kuò)增。應(yīng)用：篩選目的基因、大規(guī)模測(cè)序、金銀芯片雜交等功能基因組學(xué)的研究。5,基因克隆的方法主要有哪幾種？簡(jiǎn)述各種方法的作用和用途。答：1,RACE技術(shù)，用于在已知cDNA序列的基礎(chǔ)上克隆5’端和3’端缺失的序列；2,應(yīng)用cDNA差示分析法克隆基因，在沒(méi)有任何探針的情況下，通過(guò)降低cDNA群體復(fù)雜性和更換cDAN兩端接頭的方法特異性的擴(kuò)增目的基因片段。3,Gateway大規(guī)?？寺〖夹g(shù)，用于實(shí)現(xiàn)不需要傳統(tǒng)的酶切連接過(guò)程的基因快速克隆和載體間平行轉(zhuǎn)移，為大規(guī)模克隆基因組注視的可譯框架提供保障；4,基因的圖位克隆法，用于分離未知形狀目的基因。6,在基因操作實(shí)踐中有哪些檢測(cè)核酸和蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的方法？答：核酸凝膠電泳、蛋白質(zhì)SDS,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究對(duì)象和目的是什么？主要有哪些技術(shù)和方法。答：研究對(duì)象：某遺物種、個(gè)體、器官、組織或細(xì)胞在特定條件、特定時(shí)間所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)圖譜。技術(shù)：雙向電泳技術(shù)、蛋白質(zhì)印跡法、蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析技術(shù)SNP作為第三代遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是什么？答：(1)SNPs在基因組中的相對(duì)高頻分布，非常適合用于關(guān)聯(lián)分析。SNP在人群中是二等位基因性的，在任何人群中其等位基因頻率都可估計(jì)出來(lái)；(3)與串聯(lián)重復(fù)的微衛(wèi)星位點(diǎn)相比，SNP是高度穩(wěn)定的，尤其是處于編碼區(qū)的SNP(cSNP)，而前者的高突變率容易引起對(duì)人群的遺傳分析出現(xiàn)困難；(4)部分位于基因內(nèi)部的SNP可能會(huì)直接影響產(chǎn)物蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)或基因表達(dá)水平，因此，它們本身可能就是疾病遺傳機(jī)制的候選改變位點(diǎn)；(5)易于進(jìn)行自動(dòng)化、規(guī)?；治觯s短了研究時(shí)間。9,基因分型的方法有哪些？簡(jiǎn)述其原理。答：基因分型是利用生物學(xué)檢測(cè)方法測(cè)定個(gè)體基因型的技術(shù)。又稱為基因型分析，PCR基因分型技術(shù)，使用技術(shù)包括聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、DNA片段分析、寡核甘酸探針(ASOprobes)、基因測(cè)序、核酸雜交、基因芯片技術(shù)等。10，已知一個(gè)cDNA3’端的部分序列，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程得到該基因的全長(zhǎng)cDNA。答：1，根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)三條巢式引物，進(jìn)行5’RACE，拿到5’序列；2,同時(shí)設(shè)計(jì)巢氏引物，進(jìn)行3’RACE拿到3’序列；3,序列拼接；4,設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增全長(zhǎng)序列第七章基因的表達(dá)與調(diào)控1.簡(jiǎn)述代謝物對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的兩種方式。答：①轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控②轉(zhuǎn)錄后水平上的調(diào)控，包括mRNA加工成熟水平上的調(diào)控)和翻譯水平上的調(diào)控3.簡(jiǎn)述乳糖操縱子的調(diào)控模型。答：A、乳糖操縱子的組成：大腸桿菌乳糖操縱子含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖甘酶、透酶和半乳糖昔乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O,一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I。B、阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：沒(méi)有乳糖存在時(shí)，I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開(kāi)放合成分解乳糖的三種酶。所以，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。C、CAP的正性調(diào)節(jié)：在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。D、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。5.什么是弱化作用？答：1.當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸的濃度很低時(shí)，負(fù)載有色氨酸的tRNATr也就少，這樣翻譯通過(guò)兩個(gè)相鄰色氨酸密碼子的速度就會(huì)很慢，當(dāng)4區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時(shí)，核糖體才進(jìn)