三體綜合征產(chǎn)前診斷滿分課件

21，三體綜合征產(chǎn)前診斷

瀘州醫(yī)學院第三組滿分PPT21，三體綜合征產(chǎn)前診斷瀘州醫(yī)學院第三組滿分PPT1案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不正常，前來進行遺傳咨詢。經(jīng)詢問得知，張某的一表姐曾生育一智力低下兒子，經(jīng)某醫(yī)院診斷為先天愚型，但具體核型不詳。張某孕前檢查各項優(yōu)生指標均正常，孕前無感冒服藥史，無有毒有害物質(zhì)接觸史。張某的丈夫，32歲，司機，有煙酒嗜好，在妻子懷孕前半年已戒酒，減少吸煙量。兩人核型檢查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根據(jù)張某的情況，作中孕期唐氏篩查，結(jié)果張某血清的AFP,hCG和uE3檢查結(jié)果陽性，再進行B超檢查胎兒情況，證實胎兒胎齡正確，發(fā)育正常。根據(jù)上述資料，張某所孕胎兒具有21三體綜合癥的高風險，建議進行產(chǎn)前診斷。案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不2

孕婦就診

常規(guī)篩查綜合分析風險值孕期檢查進一步確診羊膜穿刺孕婦就診綜合分析風險值孕期檢查進一步確診羊膜穿刺3產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法4產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷是在遺傳咨詢的基礎上，主要通過遺傳學檢測和影像學檢查，對高風險胎兒進行明確診斷，通過對患胎的選擇性流產(chǎn)達到胎兒選擇的目的，從而降低出生缺陷率，提高優(yōu)生質(zhì)量和人口素質(zhì)。產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷。它是為了了解胎兒在子宮內(nèi)的健康情況，有無先天性畸形或遺傳病，用某些特殊檢查方法在子宮內(nèi)對胎兒進行診斷，以便及早采取措施避免殘疾兒的出生，提高出生人口的素質(zhì)，是有生學的重要組成部分。產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷是在遺傳咨詢的基礎上，主要通過遺傳學檢測和影5產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法6案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不正常，前來進行遺傳咨詢。經(jīng)詢問得知，張某的一表姐曾生育一智力低下兒子，經(jīng)某醫(yī)院診斷為先天愚型，但具體核型不詳。張某孕前檢查各項優(yōu)生指標均正常，孕前無感冒服藥史，無有毒有害物質(zhì)接觸史。張某的丈夫，32歲，司機，有煙酒嗜好，在妻子懷孕前半年已戒酒，減少吸煙量。兩人核型檢查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根據(jù)張某的情況，作中孕期唐氏篩查，結(jié)果張某血清的AFP,hCG和uE3檢查結(jié)果陽性，再進行B超檢查胎兒情況，證實胎兒胎齡正確，發(fā)育正常。根據(jù)上述資料，張某所孕胎兒具有21三體綜合癥的高風險，建議進行產(chǎn)前診斷。案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不7產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法8產(chǎn)前診斷方法1.X線檢查2.超聲波檢查3.胎兒鏡4.羊膜穿刺術5.絨毛吸取術6.臍帶穿刺術7.孕婦外周血分離胎兒細胞8.植入前診斷產(chǎn)前診斷方法1.X線檢查9產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法10一、實驗目的掌握遺傳病的產(chǎn)前診斷過程，通過對21三體綜合征的診斷設計，培養(yǎng)運用遺傳學現(xiàn)代技術解決醫(yī)學實際問題的能力。一、實驗目的11二、實驗原理1.羊水中有一定數(shù)量胎兒脫落細胞，通過羊膜穿刺獲取羊水中的胎兒細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)后通過G顯帶實驗進行核型分析，判斷染色體是否畸形，診斷是否患有21三體綜合征。二、實驗原理122.G顯帶是指以Giemsa染料染色后，使染色體顯帶的技術。Giemsa染料是由噻嗪和曙紅組成的，著色時DNA先于2個噻嗪分子結(jié)合，然后再與一個曙紅分子結(jié)合，形成沉淀物，而DNA的某些部位對染料不敏感，由此形成明暗相間的條帶。2.G顯帶是指以Giemsa染料染色后，使染色體13三、實驗材料、試劑及器材（1）器材：離心管，離心機，天平，37℃溫箱，載玻片，蓋玻片，恒溫水浴鍋，光學顯微鏡，標本板，玻璃鉛筆，定時鐘，染色缸，直柄虹膜鑷，滴管。（2）藥品：pH6.8PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化鈉100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。三、實驗材料、試劑及器材（1）器材：離心管，離心機，天平，314四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材15取材

1、腹部備皮，排光膀胱，平臥位常規(guī)消毒后鋪無菌洞巾。2、麻醉，一般不必需要，精神緊張者或可用普魯卡因或利多卡因麻醉。

取材16取材

3、選擇穿刺部位，經(jīng)B超胎盤定位后避開胎盤。

中期妊娠時，一般選擇在恥骨聯(lián)合上3橫指相當于子宮下段處，于腹中線或其左右側(cè)旁，捫及囊樣感的部位做穿刺；也可于宮底與恥骨聯(lián)合連線中點或左右任何一側(cè)穿刺。

晚期妊娠時，先捫清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎兒頸背部空隙處或胎兒肢體側(cè)空隙處穿刺。

取材3、選擇穿刺部位，經(jīng)B超胎盤定位后17取材

4、確定穿刺部位后，以20～21號腰椎穿刺針垂直刺入腹壁，通過腹壁及宮壁兩次阻力，當有落空感時即進入羊膜腔，抽出芯針，見羊水溢出，接上注射器，順利抽得清亮羊水，再次證實在羊膜腔內(nèi)后，可注射藥物。如欲做羊水檢查，則抽取羊水20ml立即送檢。

5、穿刺完畢后拔出穿刺針，局部壓迫5分鐘，穿刺部位敷以無菌紗布，膠布固定。

取材4、確定穿刺部位后，以2018四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材19細胞體外培養(yǎng)無菌超凈臺上將羊水注入50ml無菌離心管內(nèi)，1500r/min常溫離心10min，移去上清，留約0.5ml上清液，槍尖混勻，分裝吸取至3個60mm培養(yǎng)皿（falcon），每皿添加4ml羊水完全培養(yǎng)基，37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6-7d。細胞體外培養(yǎng)無菌超凈臺上將羊水注入50ml無菌離心管內(nèi)，1520四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材21制片培養(yǎng)6-7d后，倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，有若干梭形型細胞克隆生長，每個克隆細胞狀態(tài)較好且形成細胞島，更換新鮮培養(yǎng)液，每天觀察，2-3d后，每個細胞島已長成一個個較大克隆且細胞融合度達70%-80%，并出現(xiàn)數(shù)目不等的較多圓形，類圓形透亮細胞時，可進行細胞收獲，收獲前一天或當天更換培養(yǎng)液，加入秋水仙素，終濃度為0.1微克每毫升，作用4-4.5h,鏡下觀察有大量“魚眼樣”透明細胞出現(xiàn)時，即可收獲。吸取培養(yǎng)上清至一新離心管，加入0.25%胰酶，37℃消化2min，1000r/min離心10min，棄上清，加入0.075mol/LKCl低滲液，37℃12-13min，用3:1甲醇/冰醋酸預固定和固定后，滴片，常規(guī)G顯帶。制片培養(yǎng)6-7d后，倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，有若干梭形22四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材23顯帶

1、將制好的染色體標本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。

2、放入預溫至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用時間并不完全相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時間。顯帶1、將制好的染色體標本，置72℃～75℃烤24顯帶

3、在Giemsa染液中染色10min，自來水沖洗干凈，晾干后，即可閱片。4、鏡檢：在顯微鏡高倍目鏡下檢查顯帶標本，在染色體上若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標本，可供攝像分析顯帶3、在Giemsa染液中染色10min25四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材26結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型27結(jié)果判斷(1)標準型

占患者總數(shù)的92.5%，患兒體細胞染色體有47條，有一條額外的21號染色體，核型為47，XX（或XY）+21。其發(fā)生機制為親代（多為母親）的生殖細胞在減數(shù)分裂時染色體不分離所致。結(jié)果判斷(1)標準型28核型分析

純合型核型分析29結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型30結(jié)果判斷(2)嵌合型僅占21-三體綜合征的2.5%-5%，是指受精卵在有絲分裂期間染色體不分離而導致的，因此只是部分而不是所有的細胞存在缺陷。患兒體內(nèi)含有正常和21-三體細胞二種細胞株，形成嵌合體，核型為46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其臨床表現(xiàn)隨正常細胞所占百分比而定。嵌合型的患兒的智商較其它兩型高，臨床并發(fā)癥的發(fā)生率也相對較少。結(jié)果判斷(2)嵌合型31結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型32核型分析

易位型核型分析33結(jié)果判斷(3)易位型約占全部病例的2.5%～5%，多為羅伯遜易位，即著絲粒融合，其額外的21號染色體長臂易位到另一近端著絲粒染色體上。最常見為D/G易位，D組中以14號染色體為主，核型為46，XX（或XY）-14，+t（14q;21q），少數(shù)為15號染色體。另一種為G/G易位，是由于G組中兩個21號染色體發(fā)生著絲粒融合，形成等臂染色體，核型為46，XX（或XY）-21，+t（21q；21q）。

結(jié)果判斷(3)易位型34易位型先天愚型易位型先天愚型35五、注意事項（1）胰蛋白酶濃度和處理時間隨氣溫高低有所不同。一般規(guī)律是標本存放時間越長，在胰蛋白酶當中處理時間越長。太新鮮的標本，染色體會出現(xiàn)毛茸現(xiàn)象。片齡很長的標本往往會導致斑點狀的染色體。（2）胰蛋白酶溫度：溫度越高，反應的速度就越快，一般是室溫，但溫度必須穩(wěn)定至少20min。（3）胰蛋白酶處理的時間：如果細胞呈紫藍色，說明胰蛋白酶的作用時間不夠，如果細胞呈桃紅色，說明作用時間剛好。五、注意事項（1）胰蛋白酶濃度和處理時間隨氣溫高低有所不同。36

綜上總結(jié)給與遺傳建議：若出現(xiàn)上述情況則為21三體綜合癥。就目前的醫(yī)療水平而言，21-三體綜合征既沒有方法治愈也沒有方法預防，建議該孕婦不宜生育該患兒。如果核型為46，XX(XY)則沒有21三體綜合癥，可以生下小孩。綜上總結(jié)給與遺傳建議：37

thankyou

3821，三體綜合征產(chǎn)前診斷

瀘州醫(yī)學院第三組滿分PPT21，三體綜合征產(chǎn)前診斷瀘州醫(yī)學院第三組滿分PPT39案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不正常，前來進行遺傳咨詢。經(jīng)詢問得知，張某的一表姐曾生育一智力低下兒子，經(jīng)某醫(yī)院診斷為先天愚型，但具體核型不詳。張某孕前檢查各項優(yōu)生指標均正常，孕前無感冒服藥史，無有毒有害物質(zhì)接觸史。張某的丈夫，32歲，司機，有煙酒嗜好，在妻子懷孕前半年已戒酒，減少吸煙量。兩人核型檢查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根據(jù)張某的情況，作中孕期唐氏篩查，結(jié)果張某血清的AFP,hCG和uE3檢查結(jié)果陽性，再進行B超檢查胎兒情況，證實胎兒胎齡正確，發(fā)育正常。根據(jù)上述資料，張某所孕胎兒具有21三體綜合癥的高風險，建議進行產(chǎn)前診斷。案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不40

孕婦就診

常規(guī)篩查綜合分析風險值孕期檢查進一步確診羊膜穿刺孕婦就診綜合分析風險值孕期檢查進一步確診羊膜穿刺41產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法42產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷是在遺傳咨詢的基礎上，主要通過遺傳學檢測和影像學檢查，對高風險胎兒進行明確診斷，通過對患胎的選擇性流產(chǎn)達到胎兒選擇的目的，從而降低出生缺陷率，提高優(yōu)生質(zhì)量和人口素質(zhì)。產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷。它是為了了解胎兒在子宮內(nèi)的健康情況，有無先天性畸形或遺傳病，用某些特殊檢查方法在子宮內(nèi)對胎兒進行診斷，以便及早采取措施避免殘疾兒的出生，提高出生人口的素質(zhì)，是有生學的重要組成部分。產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷是在遺傳咨詢的基礎上，主要通過遺傳學檢測和影43產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法44案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不正常，前來進行遺傳咨詢。經(jīng)詢問得知，張某的一表姐曾生育一智力低下兒子，經(jīng)某醫(yī)院診斷為先天愚型，但具體核型不詳。張某孕前檢查各項優(yōu)生指標均正常，孕前無感冒服藥史，無有毒有害物質(zhì)接觸史。張某的丈夫，32歲，司機，有煙酒嗜好，在妻子懷孕前半年已戒酒，減少吸煙量。兩人核型檢查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根據(jù)張某的情況，作中孕期唐氏篩查，結(jié)果張某血清的AFP,hCG和uE3檢查結(jié)果陽性，再進行B超檢查胎兒情況，證實胎兒胎齡正確，發(fā)育正常。根據(jù)上述資料，張某所孕胎兒具有21三體綜合癥的高風險，建議進行產(chǎn)前診斷。案例張某，女，31歲，商場收銀員，懷孕15周，擔心所孕胎兒不45產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法46產(chǎn)前診斷方法1.X線檢查2.超聲波檢查3.胎兒鏡4.羊膜穿刺術5.絨毛吸取術6.臍帶穿刺術7.孕婦外周血分離胎兒細胞8.植入前診斷產(chǎn)前診斷方法1.X線檢查47產(chǎn)前診斷定義對象方法產(chǎn)前診斷定義對象方法48一、實驗目的掌握遺傳病的產(chǎn)前診斷過程，通過對21三體綜合征的診斷設計，培養(yǎng)運用遺傳學現(xiàn)代技術解決醫(yī)學實際問題的能力。一、實驗目的49二、實驗原理1.羊水中有一定數(shù)量胎兒脫落細胞，通過羊膜穿刺獲取羊水中的胎兒細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)后通過G顯帶實驗進行核型分析，判斷染色體是否畸形，診斷是否患有21三體綜合征。二、實驗原理502.G顯帶是指以Giemsa染料染色后，使染色體顯帶的技術。Giemsa染料是由噻嗪和曙紅組成的，著色時DNA先于2個噻嗪分子結(jié)合，然后再與一個曙紅分子結(jié)合，形成沉淀物，而DNA的某些部位對染料不敏感，由此形成明暗相間的條帶。2.G顯帶是指以Giemsa染料染色后，使染色體51三、實驗材料、試劑及器材（1）器材：離心管，離心機，天平，37℃溫箱，載玻片，蓋玻片，恒溫水浴鍋，光學顯微鏡，標本板，玻璃鉛筆，定時鐘，染色缸，直柄虹膜鑷，滴管。（2）藥品：pH6.8PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化鈉100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。三、實驗材料、試劑及器材（1）器材：離心管，離心機，天平，352四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材53取材

1、腹部備皮，排光膀胱，平臥位常規(guī)消毒后鋪無菌洞巾。2、麻醉，一般不必需要，精神緊張者或可用普魯卡因或利多卡因麻醉。

取材54取材

3、選擇穿刺部位，經(jīng)B超胎盤定位后避開胎盤。

中期妊娠時，一般選擇在恥骨聯(lián)合上3橫指相當于子宮下段處，于腹中線或其左右側(cè)旁，捫及囊樣感的部位做穿刺；也可于宮底與恥骨聯(lián)合連線中點或左右任何一側(cè)穿刺。

晚期妊娠時，先捫清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎兒頸背部空隙處或胎兒肢體側(cè)空隙處穿刺。

取材3、選擇穿刺部位，經(jīng)B超胎盤定位后55取材

4、確定穿刺部位后，以20～21號腰椎穿刺針垂直刺入腹壁，通過腹壁及宮壁兩次阻力，當有落空感時即進入羊膜腔，抽出芯針，見羊水溢出，接上注射器，順利抽得清亮羊水，再次證實在羊膜腔內(nèi)后，可注射藥物。如欲做羊水檢查，則抽取羊水20ml立即送檢。

5、穿刺完畢后拔出穿刺針，局部壓迫5分鐘，穿刺部位敷以無菌紗布，膠布固定。

取材4、確定穿刺部位后，以2056四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材57細胞體外培養(yǎng)無菌超凈臺上將羊水注入50ml無菌離心管內(nèi)，1500r/min常溫離心10min，移去上清，留約0.5ml上清液，槍尖混勻，分裝吸取至3個60mm培養(yǎng)皿（falcon），每皿添加4ml羊水完全培養(yǎng)基，37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6-7d。細胞體外培養(yǎng)無菌超凈臺上將羊水注入50ml無菌離心管內(nèi)，1558四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材59制片培養(yǎng)6-7d后，倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，有若干梭形型細胞克隆生長，每個克隆細胞狀態(tài)較好且形成細胞島，更換新鮮培養(yǎng)液，每天觀察，2-3d后，每個細胞島已長成一個個較大克隆且細胞融合度達70%-80%，并出現(xiàn)數(shù)目不等的較多圓形，類圓形透亮細胞時，可進行細胞收獲，收獲前一天或當天更換培養(yǎng)液，加入秋水仙素，終濃度為0.1微克每毫升，作用4-4.5h,鏡下觀察有大量“魚眼樣”透明細胞出現(xiàn)時，即可收獲。吸取培養(yǎng)上清至一新離心管，加入0.25%胰酶，37℃消化2min，1000r/min離心10min，棄上清，加入0.075mol/LKCl低滲液，37℃12-13min，用3:1甲醇/冰醋酸預固定和固定后，滴片，常規(guī)G顯帶。制片培養(yǎng)6-7d后，倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，有若干梭形60四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材61顯帶

1、將制好的染色體標本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。

2、放入預溫至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用時間并不完全相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時間。顯帶1、將制好的染色體標本，置72℃～75℃烤62顯帶

3、在Giemsa染液中染色10min，自來水沖洗干凈，晾干后，即可閱片。4、鏡檢：在顯微鏡高倍目鏡下檢查顯帶標本，在染色體上若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標本，可供攝像分析顯帶3、在Giemsa染液中染色10min63四、實驗步驟取材↓體外細胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析四、實驗步驟取材64結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型65結(jié)果判斷(1)標準型

占患者總數(shù)的92.5%，患兒體細胞染色體有47條，有一條額外的21號染色體，核型為47，XX（或XY）+21。其發(fā)生機制為親代（多為母親）的生殖細胞在減數(shù)分裂時染色體不分離所致。結(jié)果判斷(1)標準型66核型分析

純合型核型分析67結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型68結(jié)果判斷(2)嵌合型僅占21-三體綜合征的2.5%-5%，是指受精卵在有絲分裂期間染色體不分離而導致的，因此只是部分而不是所有的細胞存在缺陷。患兒體內(nèi)含有正常和21-三體細胞二種細胞株，形成嵌合體，核型為46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其臨床表現(xiàn)隨正常細胞所占百分比而定。嵌合型的患兒的智商較其它兩型高，臨床并發(fā)癥的發(fā)生率也相對較少。結(jié)果判斷(2)嵌合型69結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型結(jié)果判斷純合型嵌合型易位型70核型分析