冠狀病毒 CORONA VIRUSES課件

冠狀病毒CORONAVIRUSES內(nèi)容冠狀病毒簡介SARS-冠狀病毒的基因體定序序列比對分析基因體定序後的結(jié)論與應(yīng)用SARS冠狀病毒的動物宿主生物安全實(shí)驗(yàn)室手則臺灣治療SARS病患經(jīng)驗(yàn)與SARS診斷方法臺灣與世界的疫情和分子流行病學(xué)調(diào)查最適生長溫度33-35℃次易引發(fā)普通感冒的病毒10-15％呼吸道感染、胃腸炎嬰兒及兒童（冬天、春天） 僅有兩株分離的人類病毒株

HCoV-OC43,HCoV-229E核酸：正股RNA、套膜、80-160nm對酸、乙醚、乾燥較敏感基因體+RNA：27,000-30,000nt(大腸桿菌460萬bp)(人類30億bp)SARS:SevereAcuteRespiratorySyndrome（嚴(yán)重急性呼吸道癥候群） Atypicalpneumonia（非典型肺炎）SARS–coronavirus(WHO3/16,2003)Mortalityrate:3-6%（致死率） 43-55%,olderthan60yearsAfricangreenmonkeykidney(VeroE6)cells（養(yǎng)於非洲綠猴腎臟細(xì)胞）SARS-HCoV,purifired,RNAgenomewasextracted（病毒顆粒純化、基因體RNA萃?。﹚holegenomewassequenced（全基因體定序）典型肺炎（大葉片型肺炎）非典型肺炎（浸潤型肺炎）發(fā)燒 發(fā)燒畏寒 畏寒咳嗽有痰 乾咳胸痛 少胸痛白血球上升 白血球微升痰中找的到病原菌 痰中找不到病原菌X光片成大葉片型肺炎 X光片浸潤型肺炎肺炎雙球菌 肺炎黴漿菌嗜血流行性感冒桿菌 退伍軍人桿菌克雷白氏菌 病毒使用抗生素治療 轉(zhuǎn)錄作用轉(zhuǎn)譯作用核醣體RNA運(yùn)送RNA蛋白質(zhì)鳥老鼠牛豬人貓豬鳥

完成基因組定序後結(jié)論SARSisanovelcoronavirusDefineafourthclassofcoronavirus(group4)Virusarose?harmlesshumancoronavirus?animal?Development-PCR-basedassayantiviraltreatmentsneutralizingantibodiesvaccine

PCR-polymerasechainreaction聚合酶連鎖反應(yīng)

將DNA數(shù)量放大的一種技術(shù)RT-PCR-反轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)reversetranscription-polymerasechainreaction

將RNA反轉(zhuǎn)錄成DNA，再繼續(xù)將DNA數(shù)量放大原始宿主追蹤結(jié)論Marketsprovide（市場提供了）SCoV-likevirusesamplify（病毒複製繁衍）transmittonewhosts……（傳染到新寄主）Further-surveillanceonanimals……（未來需持續(xù)監(jiān)控這些動物） 生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室第一、二級：因應(yīng)有中、低危險致病原微生物第三級：因應(yīng)如漢他、SARS等高傳染、致病性病毒穿隔離衣、戴帽、防護(hù)鞋、獨(dú)立空調(diào)、負(fù)壓的密閉空間，外有兩道隔離門第四級:高傳染、致命傳染病，如伊波拉病毒或生物化學(xué)戰(zhàn)。負(fù)壓、獨(dú)立空間、穿著太空衣，攜帶氧氣瓶 第一級(level1,P1)指在一般操作情況下不具危險性或危險性極低之生物，如大腸桿菌-12、腺病毒有關(guān)的病毒1至4型(1)可以在公共區(qū)域內(nèi)，但門須維持關(guān)閉。(2)可在開放的桌上操作。(3)實(shí)驗(yàn)桌須是可清潔的表面。(4)窗戶須有紗窗隔離外界昆蟲。(5)須有可洗眼睛與洗手之設(shè)備。(6)便衣與實(shí)驗(yàn)衣不可放置一起。(7)定期使用消毒劑清潔。 第三級(level3,P3)

在人類可以引起嚴(yán)重或致死的疾病，可能有預(yù)防及治療之方法

除了level1與level2之規(guī)定外，須加入：(1)遠(yuǎn)離一般工作區(qū)，須控制人員進(jìn)出。(2)須在換衣及沖洗區(qū)域。(3)須有負(fù)壓區(qū)。(4)空氣進(jìn)入或出來須有空氣過濾。(5)窗戶須是不可打破的且封閉的。(6)在出口處須有不必用手即可打開的洗手槽。(7)操作人員須訓(xùn)練如何操作、處理廢物及緊急處理過程，各步驟須貼在可見之處。(8)實(shí)驗(yàn)衣前方須是封閉性的，且須在送洗前先滅菌。(9)須有醫(yī)學(xué)監(jiān)視系統(tǒng)。 第四級(level4,P4)

在人類可以引起嚴(yán)重或致死的疾病，但通常無預(yù)防及治療方法

除了level1、2、3之規(guī)定外，須加入：(1)須有物理性的隔離且有氣鎖之進(jìn)出門。(2)進(jìn)入須得準(zhǔn)許且須記錄，不可單獨(dú)工作。(3)使用第三級操作箱與正壓防護(hù)衣。(4)須有額外之通風(fēng)安全與廢物處理，氣體與水須經(jīng)處理。

研究進(jìn)度:

03/08/03臺灣第一例病人住進(jìn)臺大醫(yī)院03/14/03確診為SARS04/02/03臺大SARS研究團(tuán)隊(duì)正式成立，確立P3實(shí)驗(yàn)室管控、檢體處理流程及研究方向04/03/03發(fā)現(xiàn)SARS病人有血球吞噬(hemophagocytosis)現(xiàn)象04/09/03病毒培養(yǎng)成功，全部前例病人RT-PCR及核酸定序證實(shí)有冠狀病毒感染04/11/03完成細(xì)胞激素廓型(cytokineprofile)及肺組織免疫病理，證明SARS為一細(xì)胞激素風(fēng)暴（cytokinestorm）

04/14/03電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)病毒顆粒(virusparticle)04/21/03SARS國科會整合研究計畫完成;三篇相關(guān)論文投稿04/28/03利用SARS病人恢復(fù)期血清建立免疫螢光抗體檢測方法05/04/03臺大分離之SARS病毒全基因體29714個核苷酸定序完成，發(fā)現(xiàn)有3~12個鹼基變異;命名TW1

Treatmentprotocol(NTUH)臺大醫(yī)院處理步驟Antibiotics抗生素Ribavirin(oral)抗病毒藥物Corticosteroid類固醇Immunoglobulin免疫球蛋白SARSDiagnosis(診斷)RoutineandBiochemistry例行性生化檢查lymphopenia,elevatedLDH……..Lungpathology肺部的病理Virusisolation病毒的分離VeroE6cellsNucleicaciddetection核酸的偵測RT-PCR,Real-TimeRT-PCRSerology血清學(xué)（抗體的偵測）Immunofluorescence,ELISA 傳統(tǒng)PCR

需要時間較久

瓊膠解析度差（需差10倍）

低正確性

低敏感度

無自動化

只鑑別大小

結(jié)果無法量化

僅呈現(xiàn)PCR最後的結(jié)果Real-TimePCR可改善上述的缺點(diǎn)前臺北市衛(wèi)生局長葉金川〈右〉，四月二十七日晚再度穿上防護(hù)衣，偕同衛(wèi)生局長邱淑媞〈左〉，進(jìn)入和平醫(yī)院了解狀況，並為醫(yī)護(hù)人員加油打氣。聯(lián)合報∕陳易辰攝影(2003.04.28)MolecularepidemiologyofSCoVinTaiwan 全基因體定序11株臺大蔡臺大TW1臺中曾臺大勤加拿大多倫多新加坡香港2越南香港1仁濟(jì)醫(yī)院麵攤老闆和平醫(yī)院張中鼎員工高島屋員工和平醫(yī)院林TheBigQuestionNow:WillItBeBack?SARSvaccinedevelopment

EmergInfectDis.2005Jul;11(7):JiangS,HeY,LiuS.

Developingeffectiveandsafevaccinesisurgentlyneededtopreventinfectionbysevereacuterespiratorysyndrome(SARS)-associatedcoronavirus(SARS-CoV).TheinactivatedSARS-CoVvaccinemaybethefirstoneavailableforclinicalusebecauseitiseasytogenerate;however,safetyisthemainconcern.Thespike(S)proteinofSARS-CoVisthemajorinducerofneutralizingantibodies,andthereceptor-bindingdomain(RBD)intheS1subunitofSproteincontainsmultipleconformationalneutralizingepitopes.ThissuggeststhatrecombinantproteinscontainingRBDandvectorsencodingtheRBDsequencecanbeusedtodevelopsafeandeffectiveSARSvaccines.

Thecausativeagentofsevereacuterespiratorysyndrome(SARS)hasbeenidentifiedasanewtypeofcoronavirus.Here,wehaveinvestigatedtheabilityofadenoviraldeliveryofcodonoptimisedSARS-CoVstrainUrbanistructuralantigensspikeproteinS1fragment,membraneprotein,andnucleocapsidproteintoinducevirus-specificbroadimmunityinrhesusmacaques.WeimmunisedrhesusmacaquesintramuscularlywithacombinationofthethreeAd5-SARS-CoVvectorsoracontrolvectorandgaveaboostervaccinationonday28.ThevaccinatedanimalsallhadantibodyresponsesagainstspikeproteinS1fragmentandT-cellresponsesagainstthenucleocapsidprotein.AllvaccinatedanimalsshowedstrongneutralisingantibodyresponsestoSARS-CoVinfectioninvitro.Theseresultsshowthatanadenoviral-basedvaccinecaninducestr