ICH指南指導(dǎo)原則Q2(R1)分析方法的驗證課件

QQ2(R1)

分析方法的驗證QQQ2(R1) 分析方法的驗證Q目錄目錄1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控是藥品研發(fā)和評價應(yīng)遵循的基本原則，其中，對藥品進(jìn)行質(zhì)量控制是保證藥品安全有效的基礎(chǔ)和前提。為達(dá)到控制質(zhì)量的目的，需要多角度、多層面來控制藥品質(zhì)量，也就是說要對藥品進(jìn)行多個項目測試，來全面考察藥品質(zhì)量。一般地，每一測試項目可選用不同的分析方法，為使測試結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，必須對所采用的分析方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的目的和要求，這就是通常所說的對方法進(jìn)行驗證。1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？方法驗證的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。從本質(zhì)上講，方法驗證就是根據(jù)檢測項目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗證內(nèi)容，并通過設(shè)計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目的要求。方法驗證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組成部分。只有經(jīng)過驗證的分析方法才能用于控制藥品質(zhì)量，因此方法驗證是制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)。1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？2.

分析方法驗證：正文2.1

引言本指導(dǎo)原則討論了在歐盟、日本和美國提交的新藥注冊申請資料中分析方法驗證這一部分需要考慮的特性。本指導(dǎo)原則不一定涵蓋在世界其他地區(qū)的藥品的注冊或出口所要求的驗證。分析方法驗證的目的是為了證明該分析方法與其預(yù)期目的相適應(yīng)。2.分析方法驗證：正文2.1引言2.2

需要驗證的分析方法類型鑒別試驗雜質(zhì)定量試驗雜質(zhì)限度試驗原料藥或制劑中活性成分以及制劑中選定組分的含量測定2.

分析方法驗證：正文2.2需要驗證的分析方法類型2.分析方法驗證：正文2.3

典型的驗證參數(shù)準(zhǔn)確性（Accuracy）精密度（Precision）重復(fù)性（Repeatability）中間精密度（Intermediate

Precision）專屬性（Specificity）2.

分析方法驗證：正文檢測限（Detection

Limit）定量限（Quantitaion

Limit）線性（Linearity）范圍（Range）2.3典型的驗證參數(shù)準(zhǔn)確性（Accuracy）精密度（注意：-

表示該項目通常不需要評價；+表示該項目需要評價；(1)

假如已評價重現(xiàn)性，可不需要再評價中間精密度；(2)

缺乏專屬性的分析方法，應(yīng)由其他分析方法來作補充;(3)

某些情況下可能需要；注意：2.4下列情況需要重新驗證：原料藥合成方法的改變制劑組分的改變分析方法的改變需要重新驗證的程度應(yīng)根據(jù)改變的情況而定，某些其他的改變可能也要求驗證。2.

分析方法驗證：正文2.4下列情況需要重新驗證：2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表分析方法（Analytical

procedure）分析方法指的是進(jìn)行分析的方式，應(yīng)詳細(xì)描述進(jìn)行每個分析試驗所必需的步驟。它包括（但不限于）：樣品、參比物、試劑的制備、儀器的使用、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、計算公式的運用等。準(zhǔn)確性（Accuracy）準(zhǔn)確性指的是真實值或認(rèn)可的參考值與測量值之間的相近程度。準(zhǔn)確性有時也稱為真實度。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表專屬性（Specificity）專屬性是指在一些可能存在的組分如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、基質(zhì)等的存在下，對被分析物質(zhì)的準(zhǔn)確可靠的測定。一種分析方法缺乏專屬性時，應(yīng)由其他分析方法作補充。專屬性有以下含義：（1）定性鑒別（2）純度檢查（3）含量測定（含量或效價）2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表精密度（Precision）精密度指的是規(guī)定條件下對同一均質(zhì)樣品多次取樣進(jìn)行一系列檢測結(jié)果的一致程度（離散程度）。精密度可以從三方面考慮：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。精密度考察應(yīng)使用均質(zhì)的、可信的樣品。如果得不到，可用人為配制的樣品或樣品溶液進(jìn)行研究。分析方法的精密度通常以多次測量結(jié)果的

方差、

標(biāo)

準(zhǔn)

偏

差

或

變

異

系

數(shù)

表示。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表精密度（Precision）重復(fù)性（Repeatability）

是

指在相同的操作條件下，在較短時間間隔內(nèi)的精密度。重復(fù)性也叫批內(nèi)分析精密度。中間精密度（Intermediate Precision）是指實驗室內(nèi)部條件改變，如不同日、不同操作人、不同儀器等情況下的精密度。重現(xiàn)性（Reproducibility）是指不同實驗室之間的精密度（合作研究，通常用于方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化）。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表檢測限（Detection

Limit）某一分析方法的檢測限是指樣品中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。定量限（Quantitation

Limit）某一分析方法的定量限是指在合適的準(zhǔn)確度和精密度下，能夠定量測定樣品中被分析物的最低量。它是樣品中含量低的化合物定量測定的參數(shù)，特別適用于雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物的測定。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表線性（Linearity）分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（量）成比例關(guān)系的能力。范圍（Range）分析方法的范圍是指在樣品中被分析物的較高濃度和較低濃度之間的一個區(qū)間，并已證實在此區(qū)間內(nèi)，該方法具有合適的準(zhǔn)確性、精密度和線性。耐用性（Robustness）分析方法的耐用性是指在故意對分析方法的參數(shù)進(jìn)行微小變化后，方法仍能保持不受影響的能力，用于說明方法在正常使用時的可靠性。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.1

引言目的：對每一種分析方法中參數(shù)的驗證提供指導(dǎo)和建議。申報中建立數(shù)據(jù)的表示方式。注意：在整個方法學(xué)驗證中，必須采用經(jīng)過完全確認(rèn)的、純度已知的參比物質(zhì)來驗證。參比物質(zhì)的純度要求與使用目的應(yīng)一致。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.1引言3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.2

專屬性鑒別通過與參比物（結(jié)構(gòu)相同）比較得到陽性/陰性結(jié)果。通過與被測物結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)物質(zhì)比較得不到陽性結(jié)果。含量測定和雜質(zhì)檢查色譜方法使用具有代表性的色譜圖來證明專屬性（標(biāo)出每一成分）分離度——專屬性的標(biāo)準(zhǔn)非專屬性方法 使用其他支持性分析方法來輔助證明專屬性3.分析方法驗證：方法學(xué)3.2專屬性色譜方法使用具有代表3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.2

專屬性非專屬性方法含量測定和雜質(zhì)試驗的方法是類似的：1）可得到雜質(zhì) 用加入法；2）得不到雜質(zhì)

可以通過比較包含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的樣品的測試結(jié)果和另一個性能良好的分析方法，如藥典方法或其他有效的分析方法（單獨的方法）——對于含量測定，應(yīng)該比較這兩種結(jié)果；——對于雜質(zhì)試驗，應(yīng)該比較雜質(zhì)的圖形；3.分析方法驗證：方法學(xué)3.2專屬性含量測定和雜質(zhì)試驗的3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.3

線性應(yīng)該在分析方法的范圍內(nèi)評價線性關(guān)系?？梢杂弥付ǖ姆椒?，直接證明原料藥（通過標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液）的線性和/或混勻的制劑組分各自所占的比例來證明其線性。線性應(yīng)該可通過被測物濃度或含量的信號圖作出直觀評價。如果存在線性關(guān)系，測試結(jié)果應(yīng)該通過合適的統(tǒng)計方法來評價。原料藥（標(biāo)準(zhǔn)儲備液）/混勻的制劑組方 至少5個濃度系列 測定采集信號統(tǒng)計（線性關(guān)系或函數(shù)關(guān)系）3.分析方法驗證：方法學(xué)3.3線性采集信號統(tǒng)計（線性關(guān)系3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.4

范圍范圍通常是從線性研究得出的，并取決于分析方法預(yù)定的應(yīng)用。通過驗證分析方法提供的線性、準(zhǔn)確度和精密度的可接受度建立范圍。最小的規(guī)定范圍對原料藥或制劑的含量測定通常是測試濃度的80%~120%對于含量均勻度 70%~130%對于溶出度 規(guī)定值的±20%3.分析方法驗證：方法學(xué)3.4范圍最小的規(guī)定范圍通常是測3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.4

范圍最小的規(guī)定范圍對于雜質(zhì)檢查為報告的雜質(zhì)水平至所訂限度的120%對于產(chǎn)生毒性或無預(yù)期藥理作用的雜質(zhì)制的水平相當(dāng)檢測/定量限應(yīng)該與雜質(zhì)控如果含量和純度測試作為一個試驗進(jìn)行，且只有用到一個100%的標(biāo)準(zhǔn)品，線性應(yīng)該覆蓋從雜質(zhì)報告水平到含量分析規(guī)格的120%3.分析方法驗證：方法學(xué)3.4范圍為報告的雜質(zhì)水平至所訂3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.5

準(zhǔn)確度在含量測定中原料藥用分析方法測定已知純度的被測物將該法與另一成熟方法比較，得到的準(zhǔn)確度進(jìn)行統(tǒng)計和/或定義從已經(jīng)建立的精密度、線性和專屬性項中推導(dǎo)準(zhǔn)確度制劑用分析方法測定已加入已知量的待分析物的藥物制劑組分的混合物在制劑中加入已知量主藥或與另一成熟方法比較，得到的準(zhǔn)確度進(jìn)行統(tǒng)計和/或定義從已經(jīng)建立的精密度、線性和專屬性項中推導(dǎo)準(zhǔn)確度3.分析方法驗證：方法學(xué)3.5準(zhǔn)確度制劑3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.5

準(zhǔn)確度在雜質(zhì)的定量測定中用已知量的雜質(zhì)加入樣品中（原料藥/制劑）來評價準(zhǔn)確度。在不能獲得某種雜質(zhì)/降解產(chǎn)物的情況下，與采用其他方法測得的結(jié)果比較，可以使用原料的響應(yīng)值申報數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度的評價需在指定范圍內(nèi)至少3個濃度水平上進(jìn)行至少9次測定，例如用總分析方法測定3個濃度，每個濃度3個重復(fù)樣品3.分析方法驗證：方法學(xué)3.5準(zhǔn)確度3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.6

精密度重復(fù)性在指定范圍內(nèi)測9次（3種濃度/每種重復(fù)3次）在100%的測定濃度時測6次中間精密度確定隨機事件（日期、分析者、儀器等）對分析方法的精密度的影響重現(xiàn)性通過實驗室之間試驗的方式來評價申報數(shù)據(jù)應(yīng)該給出所考察的精密度的標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間3.分析方法驗證：方法學(xué)3.6精密度3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.7

檢測限根據(jù)目測評價（用于儀器/非儀器）通過分析加入已知濃度的分析物的樣品并通過檢測分析物的最小水平來確定檢測限。根據(jù)信噪比（只適用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法）信噪比的測定，是通過比較測得的已知低濃度的樣品信號與空白樣品的信號，建立能夠監(jiān)測到被測物的最低濃度所得到的。

已知低濃度被測物的信

號

3

或

2空白樣品的信號

1

13.分析方法驗證：方法學(xué)3.7檢測限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.7

檢測限根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差或斜率檢測限（LoD）可以表達(dá)成：LoD

=

3.3σ/Sσ為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（通過空白樣品測背景響應(yīng)值或Y軸截距）S為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）申報數(shù)據(jù) 應(yīng)提供檢測限和用于確定檢測限的方法。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.7檢測限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.8

定量限根據(jù)目測評價（用于儀器/非儀器）通過分析加入已知濃度的分析物的樣品并通過檢測分析物的最小水平來確定定量限。根據(jù)信噪比（只適用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法）信噪比的測定，是通過比較測得的已知低濃度的樣品信號與空白樣品的信號，建立能夠監(jiān)測到被測物的最低濃度所得到的。

已

知

低

濃

度

被

測

物

的

信號

10空白樣品的信號

13.分析方法驗證：方法學(xué)3.8定量限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.8

定量限根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差或斜率定量限（LoQ）可以表達(dá)成：LoQ

=

10σ/Sσ為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（通過一組空白樣品的分析或根據(jù)校正曲線）S為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）申報數(shù)據(jù) 應(yīng)提供定量限和用于確定定量限的方法3.分析方法驗證：方法學(xué)3.8定量限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.9

耐用性對于方法參數(shù)的有意變動，分析方法應(yīng)該表現(xiàn)為可靠穩(wěn)定。典型例子供試液的穩(wěn)定性提取時間在HPLC中的典型例子流動相pH的變化流動相組分的變化柱溫流速不同色譜柱（不同批號/或不同生產(chǎn)廠家）3.分析方法驗證：方法學(xué)3.9耐用性流動相pH的變化流3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.9

耐用性在GC中的典型例子不同色譜柱（不同批號/或不同生產(chǎn)廠家）柱溫流速如分析方法對分析參數(shù)的變化是敏感的，則該分析參數(shù)就應(yīng)適當(dāng)控制或在方法中注明。耐用性的結(jié)果應(yīng)該是建立一系列系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)（例如，分辨率測試），以確保分析方法的有效性在任何時候得到維持。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.9耐用性3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.10

系統(tǒng)適用性試驗是許多分析方法必不可少的一部分。其概念是對分析方法和參數(shù)進(jìn)行驗證以保證系統(tǒng)（儀器、數(shù)據(jù)工作站和分析操作要點和分析的控制點）能在使用時作為一個整體正確運

行。建立的用于特定分析方法的系統(tǒng)適用性參數(shù)取決于要驗證的方法類型，請查閱藥典以獲取更多信息。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.10系統(tǒng)適用性試驗4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則》2007年CDE頒布由于生物制品和中藥的特殊性，本原則主要適用于化學(xué)藥品。本指導(dǎo)原則重點探討方法驗證的本質(zhì)，將分析方法驗證的要求與所要達(dá)到的目的結(jié)合起來進(jìn)行系統(tǒng)和規(guī)律性的闡述，重點闡述如何科學(xué)合理地進(jìn)行論證方案的設(shè)計。本指導(dǎo)原則主要包括方法驗證的一般原則、方法驗證涉及的三個主要方面、方法驗證的具體內(nèi)容、方法再驗證、對方法驗證的評價等內(nèi)容。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.1方法驗證的一般原則原則上每個檢測項目采用的分析方法，均需要進(jìn)行方法驗證。方法驗證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢測項目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點確定。同一分析方法用于不同的檢測項目會有不同的驗證要求。例如，采用高效液相色譜法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗應(yīng)進(jìn)行不同要求的方法驗證，前者重點要求驗證專屬性，而后者重點要求驗證專屬性、準(zhǔn)確度、定量限。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.1方法驗證的一般原則原則上每個4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.2方法驗證涉及的三個主要方面需要驗證的檢測項目鑒別雜質(zhì)檢查（限度試驗、定量試驗）定量測定（含量測定、溶出度、釋放度等）：由于此類項目對準(zhǔn)確性要求較高，故所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準(zhǔn)確度和線性。其他特定檢測項目：包括粒徑分布、旋光度、分子量分布等4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.2方法驗證涉及的三個主要方面4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.2方法驗證涉及的三個主要方面分析方法本指導(dǎo)原則所指分析方法是為完成上述各檢測項目而設(shè)定和建立的測試方法，一般包括分析方法原理、儀器及儀器參數(shù)、試劑、系統(tǒng)適用性試驗、供試品溶液制備、對照品溶液制備、測定、計算及測試結(jié)果的報告等。測試方法可采用化學(xué)分析方法和儀器分析方法。這些方法各有特點，同一測試方法可用于不同的檢測項目，但驗證內(nèi)容可不相同。驗證內(nèi)容：包括方法的專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度、精密度、檢測限、定量限、耐用性和系統(tǒng)適用性等。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.2方法驗證涉及的三個主要方面4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.3方法再驗證在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進(jìn)行全面或部分驗證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法再驗證。再驗證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗證。方法再驗證是對分析方法的完善過程，應(yīng)根據(jù)實際改變情況進(jìn)行再驗證，從而保證所采用的分析方法能夠控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.3方法再驗證4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.3方法再驗證當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進(jìn)行驗證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應(yīng)無干擾。當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時，可能會影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測定的準(zhǔn)確度，因此需要對鑒別、含量測定方法再驗證。當(dāng)原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時，可能會影響雜質(zhì)檢查和含量測定的專屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法進(jìn)行再驗證。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.3方法再驗證4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.3方法再驗證當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一項目分析方法發(fā)生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢測波長發(fā)生改變，則需要重新進(jìn)行檢測限、專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗證，證明修訂后分析方法的合理性、可行性。同樣，已有國家標(biāo)準(zhǔn)的藥品質(zhì)量研究中，基于申報的原料藥合成工藝、制劑處方中的輔料等一般無法保證與已上市藥品的一致性，需對質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中部分項目進(jìn)行方法的再驗證。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.3方法再驗證4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.4對方法驗證的評價有關(guān)方法驗證評價的一般考慮并非每個檢測項目的分析方法都需進(jìn)行所有內(nèi)容的驗證，但同時也要注意驗證內(nèi)容應(yīng)充分，足以證明采用的分析方法的合理性。如雜質(zhì)限度試驗一般需要驗證專屬性和檢測限，而對于精密度、線性、定量限等涉及定量測定的項目，則一般不需要進(jìn)行驗證。方法驗證的整體性和系統(tǒng)性方法驗證內(nèi)容之間相互關(guān)聯(lián)，是一個整體。因此不論從研發(fā)角度還是評價角度，方法驗證均注重整體性和系統(tǒng)性。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.4對方法驗證的評價總結(jié)分析方法驗證：正文要驗證的分析方法的類型、典型的驗證參數(shù)、術(shù)語分析方法驗證：方法學(xué)對每一種分析方法中參數(shù)的驗證提供指導(dǎo)和建議（專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確性、精密度、檢測限、定量限、耐用性、系統(tǒng)適用性試驗）對驗證中的所有相關(guān)數(shù)據(jù)和參數(shù)驗證的計算公式的申報提供指導(dǎo)《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則》方法驗證的一般原則、方法驗證涉及的三個主要方面、方法驗證的具體內(nèi)容、方法再驗證、對方法驗證的評價等內(nèi)容?？偨Y(jié)分析方法驗證：正文謝謝你的觀看謝謝你的觀看QQ2(R1)

分析方法的驗證QQQ2(R1) 分析方法的驗證Q目錄目錄1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控是藥品研發(fā)和評價應(yīng)遵循的基本原則，其中，對藥品進(jìn)行質(zhì)量控制是保證藥品安全有效的基礎(chǔ)和前提。為達(dá)到控制質(zhì)量的目的，需要多角度、多層面來控制藥品質(zhì)量，也就是說要對藥品進(jìn)行多個項目測試，來全面考察藥品質(zhì)量。一般地，每一測試項目可選用不同的分析方法，為使測試結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，必須對所采用的分析方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的目的和要求，這就是通常所說的對方法進(jìn)行驗證。1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？方法驗證的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。從本質(zhì)上講，方法驗證就是根據(jù)檢測項目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗證內(nèi)容，并通過設(shè)計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目的要求。方法驗證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組成部分。只有經(jīng)過驗證的分析方法才能用于控制藥品質(zhì)量，因此方法驗證是制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)。1.概述為什么要進(jìn)行分析方法的驗證？2.

分析方法驗證：正文2.1

引言本指導(dǎo)原則討論了在歐盟、日本和美國提交的新藥注冊申請資料中分析方法驗證這一部分需要考慮的特性。本指導(dǎo)原則不一定涵蓋在世界其他地區(qū)的藥品的注冊或出口所要求的驗證。分析方法驗證的目的是為了證明該分析方法與其預(yù)期目的相適應(yīng)。2.分析方法驗證：正文2.1引言2.2

需要驗證的分析方法類型鑒別試驗雜質(zhì)定量試驗雜質(zhì)限度試驗原料藥或制劑中活性成分以及制劑中選定組分的含量測定2.

分析方法驗證：正文2.2需要驗證的分析方法類型2.分析方法驗證：正文2.3

典型的驗證參數(shù)準(zhǔn)確性（Accuracy）精密度（Precision）重復(fù)性（Repeatability）中間精密度（Intermediate

Precision）專屬性（Specificity）2.

分析方法驗證：正文檢測限（Detection

Limit）定量限（Quantitaion

Limit）線性（Linearity）范圍（Range）2.3典型的驗證參數(shù)準(zhǔn)確性（Accuracy）精密度（注意：-

表示該項目通常不需要評價；+表示該項目需要評價；(1)

假如已評價重現(xiàn)性，可不需要再評價中間精密度；(2)

缺乏專屬性的分析方法，應(yīng)由其他分析方法來作補充;(3)

某些情況下可能需要；注意：2.4下列情況需要重新驗證：原料藥合成方法的改變制劑組分的改變分析方法的改變需要重新驗證的程度應(yīng)根據(jù)改變的情況而定，某些其他的改變可能也要求驗證。2.

分析方法驗證：正文2.4下列情況需要重新驗證：2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表分析方法（Analytical

procedure）分析方法指的是進(jìn)行分析的方式，應(yīng)詳細(xì)描述進(jìn)行每個分析試驗所必需的步驟。它包括（但不限于）：樣品、參比物、試劑的制備、儀器的使用、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、計算公式的運用等。準(zhǔn)確性（Accuracy）準(zhǔn)確性指的是真實值或認(rèn)可的參考值與測量值之間的相近程度。準(zhǔn)確性有時也稱為真實度。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表專屬性（Specificity）專屬性是指在一些可能存在的組分如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、基質(zhì)等的存在下，對被分析物質(zhì)的準(zhǔn)確可靠的測定。一種分析方法缺乏專屬性時，應(yīng)由其他分析方法作補充。專屬性有以下含義：（1）定性鑒別（2）純度檢查（3）含量測定（含量或效價）2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表精密度（Precision）精密度指的是規(guī)定條件下對同一均質(zhì)樣品多次取樣進(jìn)行一系列檢測結(jié)果的一致程度（離散程度）。精密度可以從三方面考慮：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。精密度考察應(yīng)使用均質(zhì)的、可信的樣品。如果得不到，可用人為配制的樣品或樣品溶液進(jìn)行研究。分析方法的精密度通常以多次測量結(jié)果的

方差、

標(biāo)

準(zhǔn)

偏

差

或

變

異

系

數(shù)

表示。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表精密度（Precision）重復(fù)性（Repeatability）

是

指在相同的操作條件下，在較短時間間隔內(nèi)的精密度。重復(fù)性也叫批內(nèi)分析精密度。中間精密度（Intermediate Precision）是指實驗室內(nèi)部條件改變，如不同日、不同操作人、不同儀器等情況下的精密度。重現(xiàn)性（Reproducibility）是指不同實驗室之間的精密度（合作研究，通常用于方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化）。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表檢測限（Detection

Limit）某一分析方法的檢測限是指樣品中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。定量限（Quantitation

Limit）某一分析方法的定量限是指在合適的準(zhǔn)確度和精密度下，能夠定量測定樣品中被分析物的最低量。它是樣品中含量低的化合物定量測定的參數(shù)，特別適用于雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物的測定。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文2.5

術(shù)語表線性（Linearity）分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（量）成比例關(guān)系的能力。范圍（Range）分析方法的范圍是指在樣品中被分析物的較高濃度和較低濃度之間的一個區(qū)間，并已證實在此區(qū)間內(nèi)，該方法具有合適的準(zhǔn)確性、精密度和線性。耐用性（Robustness）分析方法的耐用性是指在故意對分析方法的參數(shù)進(jìn)行微小變化后，方法仍能保持不受影響的能力，用于說明方法在正常使用時的可靠性。2.

分析方法驗證：正文2.5術(shù)語表2.分析方法驗證：正文3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.1

引言目的：對每一種分析方法中參數(shù)的驗證提供指導(dǎo)和建議。申報中建立數(shù)據(jù)的表示方式。注意：在整個方法學(xué)驗證中，必須采用經(jīng)過完全確認(rèn)的、純度已知的參比物質(zhì)來驗證。參比物質(zhì)的純度要求與使用目的應(yīng)一致。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.1引言3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.2

專屬性鑒別通過與參比物（結(jié)構(gòu)相同）比較得到陽性/陰性結(jié)果。通過與被測物結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)物質(zhì)比較得不到陽性結(jié)果。含量測定和雜質(zhì)檢查色譜方法使用具有代表性的色譜圖來證明專屬性（標(biāo)出每一成分）分離度——專屬性的標(biāo)準(zhǔn)非專屬性方法 使用其他支持性分析方法來輔助證明專屬性3.分析方法驗證：方法學(xué)3.2專屬性色譜方法使用具有代表3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.2

專屬性非專屬性方法含量測定和雜質(zhì)試驗的方法是類似的：1）可得到雜質(zhì) 用加入法；2）得不到雜質(zhì)

可以通過比較包含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的樣品的測試結(jié)果和另一個性能良好的分析方法，如藥典方法或其他有效的分析方法（單獨的方法）——對于含量測定，應(yīng)該比較這兩種結(jié)果；——對于雜質(zhì)試驗，應(yīng)該比較雜質(zhì)的圖形；3.分析方法驗證：方法學(xué)3.2專屬性含量測定和雜質(zhì)試驗的3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.3

線性應(yīng)該在分析方法的范圍內(nèi)評價線性關(guān)系?？梢杂弥付ǖ姆椒?，直接證明原料藥（通過標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液）的線性和/或混勻的制劑組分各自所占的比例來證明其線性。線性應(yīng)該可通過被測物濃度或含量的信號圖作出直觀評價。如果存在線性關(guān)系，測試結(jié)果應(yīng)該通過合適的統(tǒng)計方法來評價。原料藥（標(biāo)準(zhǔn)儲備液）/混勻的制劑組方 至少5個濃度系列 測定采集信號統(tǒng)計（線性關(guān)系或函數(shù)關(guān)系）3.分析方法驗證：方法學(xué)3.3線性采集信號統(tǒng)計（線性關(guān)系3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.4

范圍范圍通常是從線性研究得出的，并取決于分析方法預(yù)定的應(yīng)用。通過驗證分析方法提供的線性、準(zhǔn)確度和精密度的可接受度建立范圍。最小的規(guī)定范圍對原料藥或制劑的含量測定通常是測試濃度的80%~120%對于含量均勻度 70%~130%對于溶出度 規(guī)定值的±20%3.分析方法驗證：方法學(xué)3.4范圍最小的規(guī)定范圍通常是測3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.4

范圍最小的規(guī)定范圍對于雜質(zhì)檢查為報告的雜質(zhì)水平至所訂限度的120%對于產(chǎn)生毒性或無預(yù)期藥理作用的雜質(zhì)制的水平相當(dāng)檢測/定量限應(yīng)該與雜質(zhì)控如果含量和純度測試作為一個試驗進(jìn)行，且只有用到一個100%的標(biāo)準(zhǔn)品，線性應(yīng)該覆蓋從雜質(zhì)報告水平到含量分析規(guī)格的120%3.分析方法驗證：方法學(xué)3.4范圍為報告的雜質(zhì)水平至所訂3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.5

準(zhǔn)確度在含量測定中原料藥用分析方法測定已知純度的被測物將該法與另一成熟方法比較，得到的準(zhǔn)確度進(jìn)行統(tǒng)計和/或定義從已經(jīng)建立的精密度、線性和專屬性項中推導(dǎo)準(zhǔn)確度制劑用分析方法測定已加入已知量的待分析物的藥物制劑組分的混合物在制劑中加入已知量主藥或與另一成熟方法比較，得到的準(zhǔn)確度進(jìn)行統(tǒng)計和/或定義從已經(jīng)建立的精密度、線性和專屬性項中推導(dǎo)準(zhǔn)確度3.分析方法驗證：方法學(xué)3.5準(zhǔn)確度制劑3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.5

準(zhǔn)確度在雜質(zhì)的定量測定中用已知量的雜質(zhì)加入樣品中（原料藥/制劑）來評價準(zhǔn)確度。在不能獲得某種雜質(zhì)/降解產(chǎn)物的情況下，與采用其他方法測得的結(jié)果比較，可以使用原料的響應(yīng)值申報數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度的評價需在指定范圍內(nèi)至少3個濃度水平上進(jìn)行至少9次測定，例如用總分析方法測定3個濃度，每個濃度3個重復(fù)樣品3.分析方法驗證：方法學(xué)3.5準(zhǔn)確度3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.6

精密度重復(fù)性在指定范圍內(nèi)測9次（3種濃度/每種重復(fù)3次）在100%的測定濃度時測6次中間精密度確定隨機事件（日期、分析者、儀器等）對分析方法的精密度的影響重現(xiàn)性通過實驗室之間試驗的方式來評價申報數(shù)據(jù)應(yīng)該給出所考察的精密度的標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間3.分析方法驗證：方法學(xué)3.6精密度3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.7

檢測限根據(jù)目測評價（用于儀器/非儀器）通過分析加入已知濃度的分析物的樣品并通過檢測分析物的最小水平來確定檢測限。根據(jù)信噪比（只適用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法）信噪比的測定，是通過比較測得的已知低濃度的樣品信號與空白樣品的信號，建立能夠監(jiān)測到被測物的最低濃度所得到的。

已知低濃度被測物的信

號

3

或

2空白樣品的信號

1

13.分析方法驗證：方法學(xué)3.7檢測限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.7

檢測限根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差或斜率檢測限（LoD）可以表達(dá)成：LoD

=

3.3σ/Sσ為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（通過空白樣品測背景響應(yīng)值或Y軸截距）S為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）申報數(shù)據(jù) 應(yīng)提供檢測限和用于確定檢測限的方法。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.7檢測限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.8

定量限根據(jù)目測評價（用于儀器/非儀器）通過分析加入已知濃度的分析物的樣品并通過檢測分析物的最小水平來確定定量限。根據(jù)信噪比（只適用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法）信噪比的測定，是通過比較測得的已知低濃度的樣品信號與空白樣品的信號，建立能夠監(jiān)測到被測物的最低濃度所得到的。

已

知

低

濃

度

被

測

物

的

信號

10空白樣品的信號

13.分析方法驗證：方法學(xué)3.8定量限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.8

定量限根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差或斜率定量限（LoQ）可以表達(dá)成：LoQ

=

10σ/Sσ為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（通過一組空白樣品的分析或根據(jù)校正曲線）S為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）申報數(shù)據(jù) 應(yīng)提供定量限和用于確定定量限的方法3.分析方法驗證：方法學(xué)3.8定量限3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.9

耐用性對于方法參數(shù)的有意變動，分析方法應(yīng)該表現(xiàn)為可靠穩(wěn)定。典型例子供試液的穩(wěn)定性提取時間在HPLC中的典型例子流動相pH的變化流動相組分的變化柱溫流速不同色譜柱（不同批號/或不同生產(chǎn)廠家）3.分析方法驗證：方法學(xué)3.9耐用性流動相pH的變化流3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.9

耐用性在GC中的典型例子不同色譜柱（不同批號/或不同生產(chǎn)廠家）柱溫流速如分析方法對分析參數(shù)的變化是敏感的，則該分析參數(shù)就應(yīng)適當(dāng)控制或在方法中注明。耐用性的結(jié)果應(yīng)該是建立一系列系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)（例如，分辨率測試），以確保分析方法的有效性在任何時候得到維持。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.9耐用性3.

分析方法驗證：方法學(xué)3.10

系統(tǒng)適用性試驗是許多分析方法必不可少的一部分。其概念是對分析方法和參數(shù)進(jìn)行驗證以保證系統(tǒng)（儀器、數(shù)據(jù)工作站和分析操作要點和分析的控制點）能在使用時作為一個整體正確運

行。建立的用于特定分析方法的系統(tǒng)適用性參數(shù)取決于要驗證的方法類型，請查閱藥典以獲取更多信息。3.分析方法驗證：方法學(xué)3.10系統(tǒng)適用性試驗4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則》2007年CDE頒布由于生物制品和中藥的特殊性，本原則主要適用于化學(xué)藥品。本指導(dǎo)原則重點探討方法驗證的本質(zhì)，將分析方法驗證的要求與所要達(dá)到的目的結(jié)合起來進(jìn)行系統(tǒng)和規(guī)律性的闡述，重點闡述如何科學(xué)合理地進(jìn)行論證方案的設(shè)計。本指導(dǎo)原則主要包括方法驗證的一般原則、方法驗證涉及的三個主要方面、方法驗證的具體內(nèi)容、方法再驗證、對方法驗證的評價等內(nèi)容。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.1方法驗證的一般原則原則上每個檢測項目采用的分析方法，均需要進(jìn)行方法驗證。方法驗證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢測項目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點確定。同一分析方法用于不同的檢測項目會有不同的驗證要求。例如，采用高效液相色譜法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗應(yīng)進(jìn)行不同要求的方法驗證，前者重點要求驗證專屬性，而后者重點要求驗證專屬性、準(zhǔn)確度、定量限。4.國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.1方法驗證的一般原則原則上每個4.

國內(nèi)有關(guān)指導(dǎo)原則4.2方法驗證涉及的三個主要方面需要驗證的檢測項目鑒別雜質(zhì)檢查（限度試驗、定量試驗）定量測定（含量測定、溶出度、釋放度等）：由于