中醫(yī)治療VD癡呆的動物實驗研究進展綜述,神經(jīng)病學(xué)論文

中醫(yī)治療VD癡呆的動物實驗研究進展綜述,神經(jīng)病學(xué)論文血管性癡呆(vasculardementia，VD)是一種由各種腦血管病(缺血、出血、急慢性、缺氧性腦血管病等)引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的一組獲得性嚴重認知功能缺陷或衰退的臨床綜合征，主要表現(xiàn)除了神經(jīng)系統(tǒng)定位損害的異常感覺和狀態(tài)和體征外，還有執(zhí)行能力、定向力、記憶力、計算力、語言、視覺空間認知能力、人格的認知功能受損。在我們國家，隨著老齡化社會的到來，VD發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已成為嚴重影響老年人生活質(zhì)量的重要疾病之一。近年來，中醫(yī)在VD的治療上逐步顯示出其獨特的優(yōu)勢，有單味中藥、復(fù)方、針劑、針灸等多種治療方式方法。尤其在動物實驗方面，中醫(yī)對于VD的治療研究有了顯著進展。茲將中醫(yī)治療VD癡呆的動物實驗研究進展綜述如下。1研究大概情況1．1對VD動物模型行為學(xué)的影響在VD動物實驗中，學(xué)習(xí)記憶能力測試是一項重要的行為學(xué)指標(biāo)。當(dāng)前，大都采用建立條件反射的方式方法，如用跳臺實驗、穿梭箱實驗等來測定VD動物的被動回避反響能力;用Y型迷宮實驗、Morris水迷宮實驗等來測定VD動物的空間識別性學(xué)習(xí)記憶能力。當(dāng)前應(yīng)用比擬廣泛的是Morris水迷宮實驗，被以為是研究空間學(xué)習(xí)記憶的標(biāo)準(zhǔn)實驗，其為利用老鼠急于逃離水淹的本能反響，讓老鼠在屢次訓(xùn)練中，學(xué)習(xí)尋找隱蔽于水中的平臺，來測試動物對空間位置覺和方向覺(空間定位)的學(xué)習(xí)記憶能力。曲紹春等應(yīng)用Morris水迷宮實驗觀察刺五加葉皂苷(ASS)對VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。結(jié)果:ASS中、高劑量組與模型組比擬，大鼠的逃避潛伏期及游泳途徑明顯縮短(P＜0．05)，大鼠的原平臺象限游泳的時間/總游泳時間、原平臺象限游泳的途徑/總途徑明顯升高(P＜0．05)，表示清楚ASS中、高劑量組大鼠在原平臺象限尋找的時間及途徑顯著增加，提示ASS能夠改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。1．2對VD動物模型腦組織形態(tài)學(xué)的影響海馬區(qū)是腦缺血最敏感的區(qū)域，是腦內(nèi)介入記憶儲存功能的重要部分，華而不實海馬CA1區(qū)更易受損。海馬CA1區(qū)細胞損傷的動物，記憶力明顯下降。當(dāng)前，對海馬組織的形態(tài)學(xué)觀察，從普通光鏡的觀察上升到了透射電鏡的觀察，以觀察海馬神經(jīng)的超微構(gòu)造為重點。劉斌等觀察參芎化瘀膠囊(藥物組成:川芎、乳香、沒藥、血竭、全蝎、人參、郁金、五味子等)對VD模型大鼠海馬CA1區(qū)超微構(gòu)造的影響。結(jié)果:假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元構(gòu)造完好清楚明晰，核大而圓，染色質(zhì)分布均勻，核仁明顯，細胞器豐富，構(gòu)造完好，線粒體無腫脹;模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元大量固縮，細胞核變形扭曲，核內(nèi)染色質(zhì)凝集，核仁溶解消失，細胞器減少，線粒體腫脹，嵴斷裂或消失，講明VD大鼠海馬CA1區(qū)發(fā)生明顯的神經(jīng)元超微構(gòu)造改變;而參芎化瘀膠囊組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡程度減輕;參芎化瘀膠囊組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元構(gòu)造基本接近正常，細胞器構(gòu)造大部分完好。提示參芎化瘀膠囊對改善VD大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞超微構(gòu)造具有顯著作用，起到了對神經(jīng)元的保衛(wèi)作用，進而改善VD大鼠的認知能力。1．3對VD動物模型神經(jīng)遞質(zhì)的影響1．3．1對膽堿能遞質(zhì)的影響乙酰膽堿(ACh)是中樞膽堿能系統(tǒng)與學(xué)習(xí)記憶有關(guān)的重要遞質(zhì)，其由膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)合成，乙酰膽堿酯酶(AchE)分解，通過ACh受體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。大量臨床觀察發(fā)現(xiàn)，VD患者腦組織ACh含量降低，講明VD時中樞膽堿能系統(tǒng)受損，神經(jīng)遞質(zhì)及受體功能均發(fā)生改變，ACh含量的降低可能是VD發(fā)生的重要原因之一。王保奇等實驗結(jié)果表示清楚:海馬AchE含量在腦缺血再灌注3d時顯著升高，第7、28d一直保持在低水平狀態(tài)，其原因可能與膽堿能神經(jīng)在短期缺血再灌注的情況下被毀壞而使AchE大量釋放有關(guān)。胡玉英等研究交泰丸(由黃連、肉桂組成)對VD大鼠腦組織膽堿能機制的影響顯示:交泰丸組AchE活性有不同程度下降，ACh含量有不同程度升高，與模型對照組比擬差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)，提示交泰丸能抑制VD大鼠腦組織AchE活性，減少ACh降解，增加ACh含量，通過中樞膽堿能通路促進VD大鼠空間識別學(xué)習(xí)記憶功能的恢復(fù)。1．3．2對單胺類遞質(zhì)的影響在VD的發(fā)病經(jīng)過中，大腦皮層、下丘腦、紋狀體、海馬等部位的神經(jīng)活動、神經(jīng)遞質(zhì)明顯減少。華而不實單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的減少與VD后記憶下降密切相關(guān)，這些遞質(zhì)主要有多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、5－羥色胺(5－HT)及5－羥吲哚乙酸(5－HIAA)等。劉廣玉等實驗結(jié)果表示清楚:與正常對照組比擬，模型組大鼠腦內(nèi)5－HT、DA、NE、5－HIAA含量明顯減少(P＜0．05);與模型組比擬，補腎活血湯(藥物組成:熟地黃、山茱萸、山藥、龜版)組大鼠腦內(nèi)5－HT、NE、5－HIAA含量明顯增高(P＜0．05)，提示補腎活血湯可能通過提高單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平來改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。1．3．3對興奮性氨基酸的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)中作為神經(jīng)遞質(zhì)的游離氨基酸分為興奮性氨基酸和抑制性氨基酸，它們通過各自的受體互相作用，分別以谷氨酸和－氨基丁酸(GABA)為代表，調(diào)控著學(xué)習(xí)記憶功能。腦缺血損傷時，谷氨酸過量釋放，其再攝取受阻，突觸間隙內(nèi)谷氨酸大量堆積，刺激N－甲基－D－天冬氨酸受體(NM-DA受體)、－氨基－3－羥基－5－甲基－4－異惡唑丙酸受體(AMPA受體)、紅藻氨酸(KA)受體，使鈉離子(Na+)和鈣離子(Ca2+)大量內(nèi)流，引發(fā)一系列的毒性反響，導(dǎo)致細胞、神經(jīng)元死亡，促使和加劇繼發(fā)性腦缺血損害。GABA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)作為抑制性神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)揮效應(yīng)，對海馬神經(jīng)元突觸傳遞的興奮性有一定的抑制作用，GABA含量減少，導(dǎo)致海馬CA1區(qū)興奮性異常加強，可能是腦缺血再灌注后海馬遲發(fā)性神經(jīng)元損傷的表現(xiàn)。韋登明等實驗結(jié)果表示清楚，正常對照組、假手術(shù)組大鼠海馬組織見少量谷氨酸、NMDA受體陽性細胞;模型組大鼠腦組織見很少谷氨酸、NMDA受體免疫染色陽性細胞，主要分布在海馬神經(jīng)細胞胞漿;應(yīng)用電針治療后，電針組大鼠與模型組比擬，谷氨酸、NMDA受體免疫陽性細胞積分光密度值顯著增大，提示電針大鼠百會、大椎穴可提高海馬神經(jīng)谷氨酸、NMDA受體的表示出，也證實了VD時學(xué)習(xí)記憶能力下降可能與谷氨酸、NMDA受體表示出減少致神經(jīng)傳遞功能障礙有關(guān)。1．4對VD動物模型炎性機制的影響大量臨床與實驗研究顯示，炎性細胞因子具有強大的致炎作用，介入了腦缺血后的炎癥損傷經(jīng)過，炎性細胞因子能夠通過刺激其他細胞因子和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，誘導(dǎo)白細胞浸潤，影響神經(jīng)膠質(zhì)細胞的表示出，講明炎癥反響在神經(jīng)元退行性疾病中具有一定的作用。當(dāng)前，介入炎癥反響的細胞因子主要有干擾素(IFN)、白細胞介素(IL)、集落刺激因子(CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)5類。胡久略等實驗結(jié)果表示清楚:VD大鼠腦組織和血清中的TNF－、IL－1含量升高(P＜0．05);與模型組比擬，治療組TNF－、IL－1含量均有不同程度下降(P＜0．05)，表示清楚補腎醒腦方(藥物組成:人參、熟地黃、赤芍藥、川芎、遠志、石菖蒲、天麻)有效降低VD大鼠腦組織和血清TNF－、IL－1含量，提示該藥可抑制VD大鼠炎性反響，對VD模型具有腦保衛(wèi)作用。1．5對VD動物模型細胞凋亡基因表示出的影響腦缺血時，神經(jīng)元細胞的損傷不僅僅是壞死，而且與細胞凋亡密切相關(guān)，十分是腦缺血后的遲發(fā)性神經(jīng)元死亡。腦缺血后神經(jīng)細胞通過線粒體途徑和死亡受體途徑啟動細胞凋亡，然后再通過Caspase級聯(lián)反響執(zhí)行凋亡。在線粒體途徑中，B淋巴細胞瘤－2基因(Bcl－2)家族是其重要的神經(jīng)細胞凋亡調(diào)節(jié)因子，在當(dāng)前已發(fā)現(xiàn)的Bcl－2家族成員中，按功能主要分為2類相反的基因:一類是抑凋亡基因如Bcl－2、Bcl－xL，可抑制細胞凋亡，促進神經(jīng)元的存活;另一類是促細胞凋亡基因如Bax、Bad，是促進細胞凋亡因子。柳剛實驗結(jié)果表示清楚，Bax免疫組織化學(xué)染色陽性細胞在假手術(shù)組僅有少量散在表示出;VD模型組與假手術(shù)比擬，海馬CA1區(qū)Bax陽性細胞著色加強，數(shù)量增加，分布密集;藥物組與電針組仍可見大量的陽性細胞，但分布疏散，且電針組Bax陽性細胞數(shù)明顯少于藥物組。腦缺血導(dǎo)致Bcl－2蛋白家族促凋亡因子Bax激活，引起線粒體膜通透性加強，導(dǎo)致細胞色素C和凋亡酶激活因子(APAF－1)釋放，激活Caspase級聯(lián)反響，最后由Caspase－3裂解細胞蛋白，促進鈣內(nèi)流，導(dǎo)致海馬細胞發(fā)生凋亡。朱燕珍等實驗結(jié)果表示清楚，復(fù)方丹參滴丸減少了VD大鼠海馬CA3區(qū)細胞凋亡，并改善VD大鼠海馬CA3區(qū)Bax、Caspase－3蛋白表示出，提示復(fù)方丹參滴丸有抑制海馬Bax表示出的作用，減輕線粒體膜的通透性改變，減少細胞色素C的釋放，抑制Caspase－3的激活，進而改善了海馬細胞凋亡。1．6對VD動物模型氧自由基代謝的影響因腦組織含有大量不飽和脂肪酸，故最容易遭到自由基的攻擊。當(dāng)腦組織處于缺血、缺氧時，細胞內(nèi)鈣超載產(chǎn)生大量的自由基，過量消耗自由基去除酶，使得自由基急速堆積，損傷細胞生物膜，促使細胞老化甚至死亡，腦組織損傷進一步加重。反響氧自由基代謝的常見指標(biāo)有丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶、復(fù)原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)、肌酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)等。華而不實MDA是脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物，其含量反映了組織細胞損傷的程度，SOD、GSH－Px等是腦組織內(nèi)阻止自由基產(chǎn)生的酶類物質(zhì)，腦組織缺血缺氧時，自由基大量產(chǎn)生，導(dǎo)致這些酶類的活性下降。黃俊山等實驗結(jié)果表示清楚，模型組大鼠海馬組織中SOD活性及GSH含量下降，MDA含量增加，表示清楚VD大鼠海馬組織中自由基生成增加，去除自由基能力下降，引起腦損傷而致學(xué)習(xí)記憶功能障礙;而軟脈靈口服液(藥物組成:人參、枸杞子、熟地黃、牛膝、何首烏、川芎、丹參、當(dāng)歸、大黃、芍藥藥、淫羊藿)能明顯增加VD大鼠海馬組織中SOD的活性及GSH含量，減少MDA含量，對腦缺血后自由基的生成和去除具有調(diào)節(jié)作用，減少自由基在海馬組織中的堆積，減輕氧自由基造成的損傷，進而改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。1．7對VD動物模型血液流變學(xué)的影響當(dāng)前，大量研究表示清楚VD與血液流變學(xué)指標(biāo)異常有密切關(guān)系，血液黏度升高，腦血流速度減慢，使腦血流量降低，加重腦組織的缺血缺氧，影響腦功能。黃新武等研究發(fā)現(xiàn)，VD模型組大鼠血流變學(xué)指標(biāo)與假手術(shù)組比擬差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)，存在血液流變學(xué)障礙;姜黃素治療組與模型組比擬，全血黏度(中切)、全血黏度(低切)、血漿黏度及紅細胞沉降率有顯著性降低(P＜0．05)。王增義等研究發(fā)現(xiàn)，與VD模型組比擬，腦力蘇膠囊(藥物組成:人參、枸杞子、熟地黃、靈芝、川芎、冰片)組全血黏度(高切)、全血黏度(中切)、全血黏度(低切)及血漿黏度有顯著降低(P＜0．05)，表示清楚腦力蘇膠囊通過改善異常的血液流變學(xué)，降低血液黏稠度，緩解血管痙攣，增加腦血流量，促進缺血缺氧神經(jīng)細胞功能的恢復(fù)，提高VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。1．8對VD動物模型細胞信號通路的影響當(dāng)前，與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)信號通路的研究發(fā)展，遭到眾多學(xué)者的關(guān)注，為治療VD的研究提供了新的思路。研究的通路有絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)信號通路、Notch/Delta信號通路、海馬一氧化氮－環(huán)磷酸鳥苷(NO－cGMP)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、蛋白激酶A－cAMP反響元件結(jié)合蛋白(PKA－CＲEB)通路、N－甲基－D－天冬氨酸(NMDA)受體通路等。張泓波等觀察補陽還五湯對VD大鼠海馬組織cAMP反響元件結(jié)合蛋白(CＲEB)信號通路影響的研究發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組比擬，VD大鼠海馬中cAMP含量、蛋白激酶A(PKAc)蛋白表示出和CEＲB結(jié)合活性降低，表示清楚cAMP－PKA－CEＲB信號通路弱化介入了VD的發(fā)生、發(fā)展;應(yīng)用補陽還五湯后，增加了海馬cAMP含量、PKAc蛋白表示出和CEＲB結(jié)合活性;可見補陽還五湯有加強cAMP－PKA－CEＲB信號通路的作用，進而改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，減輕神經(jīng)元損傷。2缺乏與瞻望近年來，中醫(yī)在治療VD動物實驗研究中獲得了一定的發(fā)展，無論是在改善VD后的行為學(xué)、神經(jīng)細胞超微構(gòu)造及神經(jīng)遞質(zhì)的含量，還是抑制腦缺血后的炎癥反響、去除氧自由基、改變血液流變學(xué)等方面。但中醫(yī)對VD的生理病理及生化研究起步較晚，因而在動物實驗研究方面仍存在一些問題:①在VD模型的制作上，由于中醫(yī)的病因病機復(fù)雜，當(dāng)前大多模型的制作仍一味采用西醫(yī)的造模方式方法，缺乏根據(jù)中醫(yī)理論復(fù)制的動物模型;對于某一證型的模型制作缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn);這些都導(dǎo)致動物模型不能完全反映V