實(shí)驗(yàn)五、消毒與滅菌

實(shí)驗(yàn)五、消毒與滅菌生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH消毒與滅菌消毒是指采用物理、化學(xué)和生物的方法消除物體的表面病原菌和有害微生物的過(guò)程。滅菌則是指采用物理、化學(xué)和生物的方法殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體，芽孢和孢子的過(guò)程。在微生物實(shí)驗(yàn)中，需要進(jìn)行純培養(yǎng)，不能有任何雜菌污染，因此對(duì)所用器材、培養(yǎng)基和工作場(chǎng)所都要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和滅菌。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH消毒與滅菌方法加熱滅菌干熱滅菌濕熱滅菌過(guò)濾除菌輻射滅菌放射線輻照滅菌紫外線滅菌化學(xué)藥品滅菌生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH干熱滅菌干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度要高（160～170℃），時(shí)間要長(zhǎng)（1～2h），但干熱滅菌溫度不能超過(guò)180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦，甚至引起燃燒。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH

在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。其原因有三：一、濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低，二、濕熱的穿透力比干熱大，三、濕熱的蒸氣有潛熱存在。1g水在100℃時(shí)，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時(shí)可放出2.26kJ(千焦)的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒魵獾呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH一般培養(yǎng)基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min可達(dá)到徹底滅菌的目的。滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。例如含糖培養(yǎng)基用0.06Mpa,112.6℃滅菌，然后以無(wú)菌操作手續(xù)加入滅菌的糖溶液。又如盛于試管內(nèi)的培養(yǎng)基以0.1Mpa,121.5℃滅菌20min即可，而盛于大瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基最好以0.1Mpa，122℃滅菌30min。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH紫外線滅菌紫外線滅菌是用紫外線燈進(jìn)行的。波長(zhǎng)為200~300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力最強(qiáng)。在波長(zhǎng)一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強(qiáng)度和時(shí)間的乘積成正比。紫外線殺菌機(jī)理主要是因?yàn)樗T導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復(fù)制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成[O]，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成過(guò)氧化氫（H2O2）。O3和H2O2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以，只適用于無(wú)菌室，接種箱，手術(shù)室內(nèi)的空氣及物體表面的滅菌。紫外線燈距照射物以不超過(guò)1.2m為宜。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH此外，為了加強(qiáng)紫外線滅菌效果，在打開(kāi)紫外燈以前；可在無(wú)菌室內(nèi)(或接種箱內(nèi))噴灑3%～5%石炭酸溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方面也可以殺死一部分細(xì)菌。無(wú)菌室內(nèi)的桌面、凳子可用2%～3%的來(lái)蘇爾擦洗，然后再開(kāi)紫外燈照射，即可增強(qiáng)殺菌效果，達(dá)到滅菌目的。生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室－YJH微孔濾膜過(guò)濾除菌過(guò)濾除菌是通過(guò)機(jī)械作用濾去液體或氣體中細(xì)菌的方法。根據(jù)不同的需要選用不同的濾器和濾板材料。微孔濾膜過(guò)濾器是由上下二個(gè)分別具有出口和入口連接裝置的塑料蓋盒組成，出口處可連接針頭，入口處可連接針筒，使用時(shí)將濾膜裝入兩塑料蓋盒之間，旋緊蓋盒，當(dāng)溶液從針筒注入濾器時(shí)，此濾器將各種微生物阻留在微孔濾膜上面，從而達(dá)到除菌的目的。根據(jù)待除菌溶液量的多少，可選用不同大小