免疫組織化學(xué)

免疫組化概念

組織包埋液

步驟

抗原修復(fù)原因和方法

結(jié)果判斷假陰性假陽性

質(zhì)量控制

表上的抗體

CD34，CD68

B細(xì)胞標(biāo)記物

T細(xì)胞標(biāo)記物：3、7

細(xì)胞角蛋白免疫組織化學(xué)

(Immunohistochemistry，IHC)南京鼓樓醫(yī)院病理科王景美

免疫組織化學(xué)概念免疫組織化學(xué)或免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用免疫學(xué)(抗原抗體反應(yīng)）和組織化學(xué)（化學(xué)顯色反應(yīng)）的原理，對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些成份進(jìn)行原位定性、定位甚至定量研究的技術(shù)。免疫組織化學(xué)的發(fā)展歷史1941：Coons－實(shí)用免疫熒光技術(shù)1970：Sternberger－抗體酶標(biāo)技術(shù)（PAP法）1975：Kohler,Milstein－單克隆抗體技術(shù)1981：Hsu－ABC法90年代以來：SP法、原位雜交及原位PCR免疫組化技術(shù)等全自動(dòng)免疫組化檢測(cè)系統(tǒng)及原理基本步驟結(jié)果判斷特點(diǎn)及存在的問題常用免疫組化抗體免疫組化的應(yīng)用內(nèi)容

檢測(cè)系統(tǒng)及原理抗原與抗體抗原：指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，并能和該抗體發(fā)生特異性結(jié)合的外來物質(zhì)?？贵w:多克隆抗體:由多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的不同種類的免疫球蛋白,可與同一抗原的不同表位結(jié)合，可由多種動(dòng)物產(chǎn)生，兔最常用單克隆抗體:由單一類別的免疫球蛋白組成，來源于單一B細(xì)胞，與抗原的特異表位結(jié)合，主要由鼠產(chǎn)生檢測(cè)系統(tǒng)：直接法、間接法直接法73substrate-chromogen顯色底物加底物產(chǎn)生有色終產(chǎn)物Enzyme酶primaryAb一抗Antigen抗原酶標(biāo)一抗與組織抗原相結(jié)合酶分子直接標(biāo)記第一抗體（酶標(biāo)一抗）快速/簡(jiǎn)便/專一性強(qiáng)。信號(hào)弱、敏感性差免疫熒光技術(shù)多數(shù)采用此法，熒光素直接標(biāo)記在一抗上現(xiàn)極少用71酶標(biāo)二抗與非標(biāo)記的一抗相結(jié)合如果一抗是鼠來源的，二抗必須抗鼠免疫球蛋白。比直接法敏感，因?yàn)槎鄠€(gè)二抗很可能與一抗上的多種不同表位結(jié)合，增加標(biāo)記酶的數(shù)量。76間接法二步間接法77primaryAb(mouse)非標(biāo)記一抗與組織抗原結(jié)合secondaryAb(rabbitanti-mouse)Enzyme酶標(biāo)二抗與一抗相結(jié)合substrate-chromogen顯色底物加底物產(chǎn)生有色終產(chǎn)物PAP法ABC法鏈霉菌抗生物素蛋白—過氧化物酶連接法（LSAB/SP法）

二步法(Envision系統(tǒng))二抗和辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合在多聚葡萄糖骨架上，形成多聚體。直接放大信號(hào)40-50倍間接法大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在使用:卵白素-生物素過氧化物酶系統(tǒng)（如

ABC,SABC,LSAB）多聚物檢測(cè)系統(tǒng)（如EnVision）這些系統(tǒng)對(duì)大多數(shù)抗體來說穩(wěn)定且靈敏以前普及的

PAP方法（過氧化物酶抗過氧化物酶）現(xiàn)在已較少使用

免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備

固定—取材—脫水—透明—浸蠟—包埋切片組織

固定液

10％中性福爾馬林緩沖液：最好、最經(jīng)濟(jì)和廣泛適用的固定劑，形態(tài)及抗原保存俱佳（需用有效的抗原修復(fù)）其它固定液：如含酸或含汞的固定液，就抗原保存來說均不理想某些商品化的固定液：保存抗原較佳，且價(jià)格昂貴組織固定時(shí)間

為確定組織在中性福爾馬林液中固定的最佳時(shí)間，需要權(quán)衡下列因素：盡量縮短固定時(shí)間，但至少要固定24小時(shí)長(zhǎng)時(shí)間的福爾馬林固定會(huì)引起抗原性丟失（雖然可通過適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)在某種程度上逆轉(zhuǎn)）取材

脫水透明浸蠟

包埋切片封片HE染色及選擇蠟塊和抗體HE染色挑選免疫染色的組織塊

選含有明確的病變組織塊做免疫組化，并盡可能避免下列組織塊：后來另取的組織（固定時(shí)間過久）凍融后的組織脫鈣的組織（有些抗原可能丟失或減弱）壞死或/和出血過多的組織

免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備固定—取材—脫水—透明—浸蠟—

包埋切片—HE染色—選擇蠟塊和抗體2、組織切片的脫蠟和抗原修復(fù)抗原修復(fù)

應(yīng)用物理或化學(xué)的方法將組織固定過程中封閉的抗原決定簇修復(fù)暴露的過程稱為抗原修復(fù)。

抗原修復(fù)

原因：甲醛固定過程中形成醛鍵而封閉部分抗原決定簇；甲醛在保存過程中形成羧甲基，封閉抗原決定簇；固定時(shí)，蛋白與蛋白之間發(fā)生交聯(lián),可能會(huì)封閉抗原決定簇?？乖迯?fù)的方法蛋白水解酶：胰蛋白酶、胃蛋白酶和組織蛋白酶熱抗原修復(fù)（HIER）--最常采用超聲波以上綜合運(yùn)用熱誘導(dǎo)的抗原修復(fù)水?。何⒉t、高壓鍋、高壓消毒鍋、蒸汽室及煮沸等。需不同濃度和pH值的緩沖液：常用

citrateatpH6.0,EDTAatpH8.0,

Tris-HCLatpH10.057熱修復(fù)的優(yōu)點(diǎn)：更有效：染色結(jié)果更一致，操作更單一；事先確定的熱修復(fù)時(shí)間可適用于幾乎所有的組織

一抗可以進(jìn)一步稀釋（節(jié)省費(fèi)用）有些抗體只有采用熱抗原修復(fù)才有效NoAntigenRetrieval不修復(fù)處理Citratebuffer,pH6.0

檸檬酸緩沖液58

經(jīng)抗原修復(fù)處理和不處理時(shí),CD3在扁桃體組織上的染色效果

免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備固定—取材—脫水—透明—浸蠟—

包埋切片—HE染色—選擇蠟塊和抗體2、蠟塊組織脫蠟和抗原修復(fù)3、組織抗原和一抗結(jié)合反應(yīng)注意最佳的一抗滴度時(shí)間不宜過長(zhǎng)、過短溫度不宜過高溶液不宜過少洗滌充分

免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備固定—取材—脫水—透明—浸蠟—

包埋切片—HE染色—選擇蠟塊和抗體2、蠟塊組織脫蠟和抗原修復(fù)3、組織抗原一抗結(jié)合反應(yīng)4、一抗和橋抗的結(jié)合反應(yīng)

免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備固定—取材—脫水—透明—浸蠟—

包埋切片—HE染色—選擇蠟塊和抗體2、蠟塊組織脫蠟和抗原修復(fù)3、組織抗原一抗結(jié)合反應(yīng)4、一抗和橋抗的結(jié)合反應(yīng)5、顯色、襯染結(jié)果觀察AEC

DABMart-1Melanoma66AEC和DAB染色圖例SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAparaffinwax石蠟Paraffinwax

tissuesection石蠟包埋組織片二步法染色步驟舉例(CEA)SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAtissuesection組織片DeparaffinizationandRehydration脫蠟\水化SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEA3%HydrogenPeroxideDeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶3%過氧化氫10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化氫酶SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAPBSBufferDeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶RinsePBS洗三次20:00SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEARinseAntigenRetrieval抗原修復(fù)DeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶檸檬酸緩沖液微波修復(fù)20分SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAPBSBufferRinseDeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)Rinse蒸餾水沖洗后,PBS洗3次SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEACEAAntibodyPrimaryAntibody一抗DeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)RinseRinse最適稀釋的CEA抗體孵育60分鐘SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAPBSBufferBlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)PrimaryAntibody一抗RinseRinseRinsePBS洗3次DeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAAntibody-HRP

SecondaryAntibody葡聚糖二抗RinseDeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)PrimaryAntibody一抗RinseRinse二抗孵育20分鐘SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAPBSBuffer

SecondaryAntibody葡聚糖二抗RinseDeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)PrimaryAntibody一抗RinseRinsePBS洗3次PBSBufferSPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEADABChromogenDABChromogenDAB底物DeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)PrimaryAntibody一抗SecondaryAntibody二抗

RinseRinseRinseRinseRinse加DAB10分鐘SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEADistilledWaterDeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)PrimaryAntibody一抗

SecondaryAntibody

二抗DABChromogenDAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinsePBS洗3次,蒸餾水清洗SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAMayer’sHematoxylinDeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)PrimaryAntibody一抗SecondaryAntibody

二抗DABChromogenDAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinseHematoxylinCounterstain蘇木精復(fù)染蘇木素復(fù)染1分鐘SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEATapWaterHematoxylinCounterstain蘇木精復(fù)染DeparaffinizationandRehydration脫蠟和水化BlockEndogenousPeroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)PrimaryAntibody一抗

SecondaryAntibody

二抗DABChromogenDAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinseRinse流水沖洗,細(xì)胞核返藍(lán)SPECIMENxM-0194ColoncarcinomaM-0194CEAAqueousMountDeparaffinizationand

Rehydration脫蠟和水化Block

Endogenous

Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶AntigenRetrieval抗原修復(fù)Primary

Antibody一抗

Secondary

Antibody二抗DAB

Chromogen

DAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinseHematoxylin

Counterstain蘇木精復(fù)染RinseAqueousMount水性封片封片注意顯色時(shí)間適當(dāng)（要求鏡下觀察）襯染不宜太濃判斷染色質(zhì)量觀察受染細(xì)胞

結(jié)果判斷嚴(yán)格抗原表達(dá)的部位和形式嚴(yán)格染色強(qiáng)度設(shè)對(duì)照：陽性、陰性對(duì)照或內(nèi)部對(duì)照當(dāng)免疫組化結(jié)果與HE切片判斷有矛盾時(shí),以HE切片診斷為準(zhǔn)結(jié)果判斷？？？陽性反應(yīng)的分布：不均勻性或異質(zhì)性。陽性可出現(xiàn)在單個(gè)細(xì)胞內(nèi)、一群細(xì)胞中或整個(gè)組織中。彌漫一致的淺染可能為非特異性反應(yīng)。陽性反應(yīng)定位：胞膜，胞漿，胞核，胞核/胞漿明確定位(膜,漿,核)，是觀察免疫組化結(jié)果的最終依據(jù)！C-erbB2胞膜陽性Ki67胞核陽性CK7彌漫或片狀的細(xì)胞漿陽性CD68細(xì)胞漿內(nèi)顆粒狀陽性

Actin細(xì)胞漿纖維狀陽性S-100陽性的半定量－乘積法

強(qiáng)度：0分無色

1分淡黃色

2分棕黃色

3分棕褐色。細(xì)胞數(shù):0分無

1分≤10％

2分11－50％

3分51－75％

4分>75％。兩者乘積>3分為陽性。陽性的半定量－百分比

(+)陽性細(xì)胞數(shù)<25%(++)陽性細(xì)胞數(shù)>25%,<50%(+++)陽性細(xì)胞數(shù)>50%,<75%(++++)陽性細(xì)胞數(shù)>75%陽性細(xì)胞數(shù)<25%(++)25%<陽性細(xì)胞數(shù)<50%(+++)50%<陽性細(xì)胞數(shù)<75%(++++)陽性細(xì)胞數(shù)>75%免疫組織化學(xué)的特點(diǎn)和問題特異牲強(qiáng)敏感性高定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合假陽性假陰性非特異性技術(shù)本身的問題免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng)敏感性高定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合“一對(duì)一”的抗原抗體反應(yīng)，如LCA顯示淋巴細(xì)胞。只有在組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng)敏感性高定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合

直接法，間接法：抗體的稀釋只能是幾倍、幾十倍。ABC法、SP法，兩步法等：抗體稀釋上百上千倍。越來越方便應(yīng)用于臨床常規(guī)診斷工作

免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng)敏感性高

定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合

原位確定組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分.

方法統(tǒng)一,定性可靠、定位準(zhǔn)確、定量可能。形態(tài)學(xué)被賦予了功能及代謝的含意。

假陰性與假陽性問題

假陰性原因抗原丟失抗原修復(fù)不適當(dāng)方法不足夠敏感失效的抗體加錯(cuò)試劑或試劑擺放位置錯(cuò)誤假陽性原因

非特異性反應(yīng)：邊緣現(xiàn)象；皺折和刀痕；出血和壞死；組織擠壓；被動(dòng)吸收和主動(dòng)吞噬而使抗原出現(xiàn)在不該出現(xiàn)的部位抗體與多種抗原有交叉反應(yīng)內(nèi)源性酶的顯色試劑濃度過高異位抗原的表達(dá)非特異性著色（全片）1、抗體濃度過高2、抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng)或溫度較高3、DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長(zhǎng)4、組織變干5、切片在緩沖液或修復(fù)液中浸泡時(shí)間太長(zhǎng)6、一抗變質(zhì)、質(zhì)量差的多克隆抗體

邊緣效應(yīng)“陰陽臉”著色試劑僅覆蓋了部分組織而不是全部

固定不足、組織變干非特異性染色氣泡灶片狀著色1、裱片時(shí)水未排盡，在局部形成氣泡使組織突起2、壞死組織灶3、制作APES涂膠片時(shí)，膠的濃度太高，干燥后在玻片上留下白色小點(diǎn)，顯色時(shí)白色小點(diǎn)著色灶狀著色：機(jī)械原因著色壞死組織著色：AE1/AE3非特異性反應(yīng),出血和壞死

胞漿著色過氧化物酶（紅細(xì)胞著色）

胞漿著色一抗過濃或交叉反應(yīng)：P63（乳腺）

免疫組織化學(xué)的新進(jìn)展高效的抗原修復(fù)技術(shù)（即使不同方式固定或處理的組織仍能得到一致的結(jié)果）高度敏感的檢測(cè)系統(tǒng)大量能應(yīng)用于常規(guī)石蠟切片的抗體雙染甚至三染免疫組化技術(shù)免疫組化自動(dòng)化抗體必須經(jīng)過驗(yàn)證研究

由于組織固定、脫水過程、包埋等內(nèi)在影響因素的變化，不可能建立一個(gè)通用的免疫組化染色程序？對(duì)照的設(shè)立陽性對(duì)照與陰性對(duì)照內(nèi)對(duì)照空白對(duì)照組織微陣列免疫組化的質(zhì)量控制常用免疫組化抗體上皮組織標(biāo)記物間葉組織標(biāo)記物淋巴造血系統(tǒng)標(biāo)記物神經(jīng)及內(nèi)分泌標(biāo)記物腫瘤相關(guān)抗原標(biāo)記物器官或組織特異性抗原標(biāo)記物病原體標(biāo)記物1、上皮組織標(biāo)記物

角蛋白系列（cytokeratin,CK）上皮膜抗原（epithelialmembraneantigen,EMA）癌胚抗原（carcinoembryonicantigen,CEA）CK的概述CK--抗體在外科病理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最為廣泛多年以來由于各種特殊亞型的CK抗體出現(xiàn)使得CK的應(yīng)用更加廣泛什么是CK?中間絲（重要的細(xì)胞骨架蛋白）見于所有的上皮細(xì)胞及間皮細(xì)胞整個(gè)家族中有40-68kD的不同分子量及等電點(diǎn)pH

至少有20個(gè)亞型（酸性或堿性）低分子量CK中間分子量

CK高分子量

CKCK-pan（如MNF-116）或雞尾酒調(diào)制CK（如MAK6）CAM5.234?E12AE1/AE3CK5/6什么是

CK?CK1，CK2和

CK10：最高分子量細(xì)胞角蛋白，僅表達(dá)在鱗狀上皮的角化層CK5,CK6和

CK14:高分子量細(xì)胞角蛋白，表達(dá)于鱗狀上皮及基底細(xì)胞CK7,CK8,CK18和

CK19:低分子量細(xì)胞角蛋白，表達(dá)在單層上皮和內(nèi)分泌細(xì)胞其它

CK亞型為中間分子量最常用，胞漿陽性著色，細(xì)絲狀，用于確定腫瘤為上皮源性波形蛋白（vimentin，VIM）肌組織標(biāo)記物血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物組織細(xì)胞的標(biāo)記物2、間葉組織標(biāo)記物波形蛋白（vimentin，VIM）

中間微絲蛋白分布于間葉細(xì)胞及其起源的腫瘤也見于上皮性腫瘤已建議廢棄肌原性標(biāo)記

?Desmin

胞漿陽性著色

平滑肌/骨骼肌及其腫瘤的良好標(biāo)記，肌纖維母細(xì)胞有時(shí)也陽性，但肌上皮陰性

一些間皮瘤陽性

促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞腫瘤

肌源性標(biāo)記

?MSA（Muscle-specificactin）

胞漿陽性著色

極好的肌源性標(biāo)記

平滑肌、骨骼肌及其腫瘤

肌纖維母細(xì)胞及相關(guān)腫瘤（惡纖組、結(jié)節(jié)性筋膜炎等）

肌上皮及其腫瘤

血管周細(xì)胞腫瘤

一些間皮瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物

第八因子相關(guān)抗原（factorⅧrelatedantigen,F-8）荊豆凝集素（ulexeuropaeusUEA-1）

CD34CD31D2-40血管源性標(biāo)記

?CD31

細(xì)胞膜陽性著色

內(nèi)皮細(xì)胞、巨核系細(xì)胞/血小板陽性

有時(shí)漿細(xì)胞/漿細(xì)胞瘤陽性

主要用于診斷血管性腫瘤：特異且敏感

用于識(shí)別骨髓中不正常的巨核細(xì)胞

用于巨核細(xì)胞系白血病血管源性標(biāo)記

?CD34

細(xì)胞膜/細(xì)胞漿陽性著色

血管內(nèi)皮/巨核細(xì)胞/血小板

很好的血管標(biāo)記，但特異性差

多種腫瘤CD34陽性，包括：血管瘤、血管周細(xì)胞胃腸間質(zhì)瘤等組織細(xì)胞的標(biāo)記物

α1–抗胰蛋白酶(α1-antitypsin,AAT)和

α1－抗糜蛋白酶（α1-antichymotrypsin,AACT）溶菌酶（lysozyme,Lys）CD68組織細(xì)胞標(biāo)記

?CD68（PGM1）

胞漿內(nèi)顆粒狀陽性著色

較好的組織細(xì)胞和單核細(xì)胞及其腫瘤的標(biāo)記

有些非組織細(xì)胞也可陽性，包括：腎小管、粒細(xì)胞肉瘤、惡黑、血管瘤樣惡纖組等

3、淋巴造血系統(tǒng)標(biāo)記物

白細(xì)胞共同抗原（leucocytecommonantigen,LCA,CD45）免疫球蛋白(immunoglobulinIg)B細(xì)胞標(biāo)記物

T細(xì)胞標(biāo)記物

T淋巴細(xì)胞亞群標(biāo)記物粒細(xì)胞和單核—巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物其他白細(xì)胞標(biāo)記

?LCA（CD45RB）

幾乎所有的白細(xì)胞、漿細(xì)胞瘤（+）

HE下明確的淋巴瘤不必要染LCA

有些淋巴母細(xì)胞淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、外周T細(xì)胞淋巴瘤（-）

經(jīng)典Hodgkin的R-S細(xì)胞（-）

B細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD20（L26）胞膜陽性著色CD79a胞漿陽性著色:各階段B細(xì)胞陽性B祖細(xì)胞前B細(xì)胞未成熟的B細(xì)胞成熟的B細(xì)胞激活的

B細(xì)胞漿細(xì)胞前體細(xì)胞;非抗原依賴型初始

B細(xì)胞;非抗原依賴型生發(fā)中心和標(biāo)志;抗原依賴型TdTCD20,CD22CD19,PAX5CD79aCD10Bcl-6CD138細(xì)胞漿

CD22

全T細(xì)胞標(biāo)記物

CD3CD5CD7CD45ROCD43

用于T淋巴細(xì)胞和其起源腫瘤的識(shí)別T細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記

?CD3（polyclonal）

胞漿/膜陽性著色，核周凝聚，有時(shí)高爾基體也陽性

極好的T細(xì)胞標(biāo)記，與CD43不同，髓系細(xì)胞和組織細(xì)胞不著色

極好的T細(xì)胞和NK淋巴瘤標(biāo)記粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物CDl5(LeuM1)髓過氧化物酶（MPO）CD68MAC387溶菌酶(lysome)組織細(xì)胞標(biāo)記

?CD68（PGM1）

胞漿內(nèi)顆粒狀陽性著色

較好的組織細(xì)胞和單核細(xì)胞（包括漿樣單核細(xì)胞）及其腫瘤的標(biāo)記

有些非組織細(xì)胞也可陽性，包括：腎小管、粒細(xì)胞肉瘤、惡黑、血管瘤樣惡纖組等

4、神經(jīng)及內(nèi)分泌標(biāo)記物神經(jīng)組織標(biāo)記物

膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)S-l00蛋白神經(jīng)元特異性烯醇酶(NeuronSpecificEnolase，NSE)髓磷脂堿性蛋白(Myelinbasicprotein，MBP)神經(jīng)元特異核蛋白(NeuN)少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子-2(Oligo-2)內(nèi)分泌和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)標(biāo)記物垂體激素:GH、LH、ACTH、Prl、FSH、TSH胰島細(xì)胞、胃腸道和呼吸道激素神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NeuronSpecificEnolase，NSE)

嗜鉻顆粒蛋白(ChromograninA，CgA)

突觸囊泡蛋白(Synaptophysin，Syn)?GFAP（Glialfibrillaryacidicprotein）

胞漿陽性著色

星形細(xì)胞瘤、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、室管膜瘤和脈絡(luò)叢乳頭狀瘤陽性

一些外周神經(jīng)鞘瘤可陽性

涎腺多形性腺瘤?？申栃?/p>

乳腺的肌上皮有時(shí)也可陽性

S-100

細(xì)胞核、細(xì)胞漿陽性著色

神經(jīng)源性腫瘤、惡性黑色素瘤、肌上皮腫瘤、脂肪腫瘤?Syn

細(xì)胞漿陽性著色

神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及腫瘤、神經(jīng)元和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（+）

特異性和敏感性均好

?CgA

胞漿內(nèi)顆粒狀著色

染神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的分泌小泡

類癌、Merkel細(xì)胞癌、甲狀旁腺腺瘤等強(qiáng)陽性

神經(jīng)性腫瘤可陽可陰

5、腫瘤相關(guān)抗原標(biāo)記物腫瘤基因蛋白(oncoprotein)Bcl-2