GB/T 36820-2018甘蔗條紋花葉病毒實時熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測方法

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T36820—2018

甘蔗條紋花葉病毒實時熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶

鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR檢測方法

()

DetectionmethodofSugarcanestreakmosaicvirusbyreal-timereverse

transcritionolmerasechainreactionRT-PCR

ppy()

2018-09-17發(fā)布2019-04-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T36820—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位福建農(nóng)林大學(xué)國家甘蔗工程技術(shù)研究中心農(nóng)業(yè)部甘蔗及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試

:、

中心農(nóng)業(yè)部福建甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人高三基黃美婷傅華英孫生仁張慧麗王錦達(dá)陳如凱

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36820—2018

甘蔗條紋花葉病毒實時熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶

鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT-PCR檢測方法

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1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甘蔗條紋花葉病毒Suarcanestreakmosaicvirus實時熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒?/p>

(g)

應(yīng)檢測方法的儀器與設(shè)備試劑與材料樣品的采集與前處理檢測以及結(jié)果判斷與表述等

(RT-PCR)、、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于可能帶有甘蔗條紋花葉病毒的活體寄主植物的快速檢測診斷

、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

外殼蛋白

CP:(coatprotein)

值實時熒光反應(yīng)中每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

Ct:PCR,(cycle

threshold)

與鏈互補(bǔ)的單鏈

cDNA:RNADNA(complementaryDNA)

Taq酶熱啟動聚合酶

ExHS:DNA(hotstartDNApolymerase)

羧基熒光素

FAM:6-(6-carboxy-fluorescein)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

RT-PCR:(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

甘蔗條紋花葉病毒Sugarcanestreakmosaicvirus

SCSMV:()

羧基四甲基羅丹明

TAMRA:6-(6-carboxytetramethylrhodamine)

吸頭

Tip:

3方法原理

根據(jù)甘蔗條紋花葉病毒基因序列設(shè)計一對僅在該病毒基因間保守的特異性引物和一條特

CPCP

異性的熒光雙標(biāo)記水解型寡核苷酸探針探針首先利用反轉(zhuǎn)錄酶將病毒反轉(zhuǎn)成

(TaqMan)。RNA

再以為模板在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行實時熒光擴(kuò)增反應(yīng)水解型寡核苷酸探針

cDNA,cDNAPCR,

探針的熒光信號強(qiáng)度伴隨著目標(biāo)序列擴(kuò)增產(chǎn)物的增加呈正比關(guān)系通過收集擴(kuò)

(TaqMan)PCR,PCR

增過程的熒光信號值即可判斷試樣是否帶有目標(biāo)序列甘蔗條紋花葉病信息參見附錄

,。A。

4儀器與設(shè)備

41實時熒光檢測儀激發(fā)檢測波長范圍可用熒光染料和水

.PCR:/350nm~750nm;(SYBRGreenI)

解型寡核苷酸探針探針升降溫速度均一性準(zhǔn)確性溫

(TaqMan);≥2.0℃/s;+/-0.5℃;+/-0.3