第一章植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)

第一章植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)第一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日第一節(jié)

實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)一、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)二、設(shè)備和儀器三、玻璃器皿及用具四、培養(yǎng)條件主要內(nèi)容第二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

一、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)準(zhǔn)備間緩沖室無(wú)菌室培養(yǎng)室第三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)工作之前，首先應(yīng)對(duì)工作目的和規(guī)模以及需要哪些最基本的設(shè)備和條件有個(gè)全面的了解，以便因地制宜地利用現(xiàn)有房屋，或新建、改建實(shí)驗(yàn)室。第四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

實(shí)驗(yàn)室的大小取決于工作的目的和規(guī)模：

1.以工廠化生產(chǎn)為目的，實(shí)驗(yàn)室規(guī)模太小，則會(huì)限制生產(chǎn)影響效率。

2.在設(shè)計(jì)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)按組織培養(yǎng)程序來(lái)設(shè)計(jì)避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂。植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的。要做到無(wú)菌的條件，需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。第五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日。準(zhǔn)備室緩沖間培養(yǎng)室接種室第六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日準(zhǔn)備室第七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日第八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日主要工作：完成完成各種器具的洗滌、干燥、各種藥品貯備、稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝、培養(yǎng)基的滅菌等。主要設(shè)備：水池、工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、烘箱、藥品柜、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計(jì)及常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器.

第九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日緩沖室第十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日具體要求和工作：面積5m2為宜。進(jìn)入無(wú)菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進(jìn)出時(shí)帶入雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外線滅菌燈，以照射滅菌。第十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日無(wú)菌室(也叫接種室，操作室)第十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日第十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日主要工作：用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進(jìn)行無(wú)菌操作的技術(shù)程序。

主要設(shè)備：紫外光源、超凈工作臺(tái)、顯微鏡、解剖鏡、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）等。第十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日具體要求：

接種室宜小不宜大，一般7～8平方米，要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒。配置拉動(dòng)門(mén)，以減少開(kāi)關(guān)門(mén)時(shí)的空氣擾動(dòng)。接種室要求干爽安靜，清潔明亮。在適當(dāng)位置吊裝1～2盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。最好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門(mén)窗緊閉，減少與外界空氣對(duì)流。

第十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)室第十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日第十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日主要工作：將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定。其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。第十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日具體要求：周圍墻壁要求有絕熱防火的性能。培養(yǎng)室溫度一般保持在20—27℃左右，安裝空調(diào)機(jī)。由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度，最好不同種類有不同的培養(yǎng)室。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對(duì)濕度以保持在70%～80%為好，可安裝加濕器?？刂乒庹諘r(shí)間可安裝定時(shí)開(kāi)關(guān)鐘，一般需要每天光照10-16h。第十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日主要設(shè)備：培養(yǎng)架、空調(diào)機(jī)、除濕機(jī)、搖床、培養(yǎng)箱、紫外光源等。第二十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日二、設(shè)備、儀器(一)大型設(shè)備和儀器

大多由鋁合金制成，一般設(shè)5-7層，最低一層離地高約2Ocm，其他每層間隔30cm左右，培養(yǎng)架即高2左右。培養(yǎng)架長(zhǎng)度都是根據(jù)日光燈的長(zhǎng)度而設(shè)計(jì)，如采用40W日光燈，長(zhǎng)1.3m，寬度一般為60cm。培養(yǎng)架第二十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

用于植物材料的培養(yǎng)，其內(nèi)有溫度感受器，控制箱內(nèi)溫度到所調(diào)指標(biāo)。生化培養(yǎng)箱還配有光照裝置。恒溫培養(yǎng)箱第二十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

超凈工作臺(tái)

用于培養(yǎng)物的無(wú)菌操作（由鼓風(fēng)機(jī)、濾板、操作臺(tái)、紫外燈和照明燈組成）。超凈臺(tái)分水平式和垂直式二種型號(hào)第二十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

用于干燥洗凈的玻璃器皿，也可用于干熱滅菌和測(cè)定干物重.用于干燥需保持80-100℃；進(jìn)行干熱滅菌需保持150℃，達(dá)1-3h；若測(cè)定干物重，則溫度應(yīng)控制在80℃烘干至完全干燥為止。

烘箱第二十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

高壓滅菌鍋類型：手提式高壓滅菌鍋立式高壓滅菌鍋?zhàn)饔茫号囵B(yǎng)基、水和各種器皿的消毒第二十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日種類較多，用于分離微莖尖可采用雙筒實(shí)體解剖鏡。解剖鏡上帶有照相裝置，根據(jù)需要隨時(shí)對(duì)所需材料進(jìn)行攝影記錄。

第二十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日作用：用于稱取大量元素、微量元素、維生素、激素等藥品精確度0．0001g。電子天平第二十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日作用：測(cè)定培養(yǎng)基及酶制劑的ｐＨ值酸度計(jì)第二十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日作用：低溫保存材料，存放藥品、培養(yǎng)基母液、激素、酶制劑。冰箱第二十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日空調(diào)機(jī)一般要保持在23—27℃左右，具備產(chǎn)熱裝置，并安裝吊式或立式空調(diào)機(jī)。第三十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日(二）小型用品

1．鑷子類(forceps)

常應(yīng)用醫(yī)療上的鑷子。根據(jù)操作需要有各種類型

2．剪刀類(scissors)

可采用醫(yī)療五官科用的中型剪刀。主要用于切斷莖段、葉片等。也可以用彎形剪刀，由于其頭部彎曲，可以深入到瓶口中進(jìn)行剪切。第三十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

3.解剖刀:

切割較小材料和分離莖尖分生組織時(shí)，可用解剖刀。刀片要經(jīng)常調(diào)換，使之保持鋒利狀態(tài)，否則切割時(shí)會(huì)造成擠壓，引起周圍細(xì)胞組織大量死亡，影響培養(yǎng)效果。

4.解剖針:解剖針可深入到培養(yǎng)瓶中，轉(zhuǎn)移細(xì)胞或愈傷組織。也可用于分離微莖尖的幼葉，可以自制。

5.接種盤(pán):第三十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

組培瓶（玻璃）---要求透光度好，能耐高壓高溫,以試管、三角瓶、培養(yǎng)皿等使用較多。三角錐瓶---

適用于各種培養(yǎng)（如固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、大規(guī)模培養(yǎng)或一般培養(yǎng)）。

培養(yǎng)皿---適于作單細(xì)胞的固體平板培養(yǎng)、胚和花藥培養(yǎng)和無(wú)菌發(fā)芽。

試管---適合于用少量培養(yǎng)基及試驗(yàn)各種不同配方時(shí)選用。

三、玻璃器皿及用具第三十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

在組織培養(yǎng)中配制培養(yǎng)基，貯藏母液，材料的消毒等需要各種化學(xué)實(shí)驗(yàn)用的玻璃器。包括各種型號(hào)的燒杯、量筒、移液管、試劑瓶、容量瓶、試管以及移液管架、玻璃棒、滴瓶等。吸耳球、刷子、記號(hào)筆、定時(shí)鐘、手套、封口膜、脫脂棉、拖鞋、口罩、白大褂、濾紙。第三十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

濕度的影響包括培養(yǎng)容器內(nèi)濕度的保持和環(huán)境的濕度條件。

(三)、濕度返第三十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日第二節(jié)器具洗滌一、洗滌液洗滌液的種類很多，配制方法也不一樣，可根據(jù)要求選擇經(jīng)濟(jì)有效的洗滌液。常用的洗滌劑主要有肥皂、洗衣粉、洗潔精和鉻酸洗滌液等。洗衣粉、洗潔精和肥皂均是很好的去污劑，對(duì)于帶油脂太多的玻璃器皿，可先用其他洗滌液除污垢再用洗衣粉水等洗滌。第三十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日二、各種器具的洗滌新器皿；新購(gòu)置的玻璃器皿一般都有游離的堿性物質(zhì)，使用前要在1%的鹽酸溶液中浸泡24h再清洗，再用自來(lái)水沖洗，最后用蒸餾水洗2～3次徹底清潔后，烘干備用。用過(guò)器皿；用過(guò)后玻璃器皿如燒杯、試管和培養(yǎng)瓶等要先除去其殘?jiān)?，清水沖洗后將器皿放入洗衣粉溶液中浸泡一段時(shí)間，然后涮去器皿內(nèi)污物，如洗滌效果不好，可增加洗衣粉水濃度或適當(dāng)加熱，器皿內(nèi)外都要刷到，再用水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗一遍，干燥后備用。第三十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日第三節(jié)培養(yǎng)基及其配制主要內(nèi)容

一、培養(yǎng)基成分

二、培養(yǎng)基的pH

三、培養(yǎng)基的種類、配方及其特點(diǎn)第三十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

在建立培養(yǎng)系統(tǒng)時(shí)，首先找到一合適的培養(yǎng)基。在植物組織培養(yǎng)歷史進(jìn)程中，事實(shí)上也緊密地伴隨著培養(yǎng)基的研制史。對(duì)植物的營(yíng)養(yǎng)要求的不斷認(rèn)識(shí)，對(duì)已有培養(yǎng)基的改進(jìn)，或者將新發(fā)現(xiàn)的植物激素、新的有益成分應(yīng)用于培養(yǎng)基之中，都大大促進(jìn)了組織培養(yǎng)研究的迅速發(fā)展，取得越來(lái)越多的成功。

一、培養(yǎng)基成分第三十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基成分1、水和瓊脂2、大量元素3、微量元素4、鐵鹽5、有機(jī)質(zhì)6、其它輔助性物質(zhì)7、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)一、培養(yǎng)基成分第四十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日1、水

水是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切代謝過(guò)程的介質(zhì)和溶媒。它是生命活動(dòng)過(guò)程中不可缺少的物質(zhì)。配制培養(yǎng)基母液時(shí)要用蒸餾水，以保持母液及培養(yǎng)基成分的精確性，防止儲(chǔ)藏過(guò)程發(fā)霉變質(zhì)。大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)可用自來(lái)水。但在少量研究上盡量用蒸餾水，以防成分的變化引起不良效果。第四十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日瓊脂(agar)

作用：最好的固化劑。瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何營(yíng)養(yǎng)。特性：溶解在熱水中，成為溶膠，冷卻至40℃即凝固為固體狀凝膠。通常所說(shuō)的“煮化”培養(yǎng)基，就是使瓊脂溶解于90℃以上的熱水。濃度：瓊脂的用量在6-10g／L之間，若濃度太高，培養(yǎng)基就會(huì)變得很硬，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)難以擴(kuò)散到培養(yǎng)的組織中去。若濃度過(guò)低，凝固性不好。返第四十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日2、大量元素大量元素就是人們平常所說(shuō)在培養(yǎng)基中的濃度大于100mg/L的元素。在植物生命中具有非常重要的作用。如氮（N）、硫（S）、磷（P）是蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸和許多生物催化劑即酶的主要或重要組分。它們與蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸和酶的結(jié)構(gòu)、功能、活性等有直接的不可缺少的關(guān)系。

第四十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

氮占蛋白質(zhì)含量的16%-18%，在植物生命活動(dòng)中占有首要的地位，故又稱為生命元素。

磷在糖代謝、氮代謝、脂肪轉(zhuǎn)變等過(guò)程中不可缺少。第四十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

鉀對(duì)于參與活體內(nèi)各種重要反應(yīng)的酶起著活化劑的作用，鉀供應(yīng)充分時(shí)糖類合成加強(qiáng)，纖維素和木質(zhì)素含量提高，莖稈堅(jiān)韌，植株健壯。

硫氨基酸中都含有硫，這些氨基酸幾乎是所有蛋白質(zhì)的構(gòu)成分子。

第四十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日鈣:是細(xì)胞壁的組分之一，果膠酸鈣是植物細(xì)胞胞間層的主要成分，缺鈣時(shí)細(xì)胞分裂受到影響，細(xì)胞壁形成受阻，嚴(yán)重時(shí)幼芽、幼根會(huì)潰爛壞死。鎂是葉綠素分子結(jié)構(gòu)的一部分，缺少鎂，葉綠素就不能形成，葉子就會(huì)失綠，就不能進(jìn)行光合作用。鎂也是染色體的組成成分，在細(xì)胞分裂過(guò)程中起作用。返第四十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日3、微量元素

B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物組織培養(yǎng)中不可缺少的元素，缺少這些物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)、發(fā)育異常現(xiàn)象。

微量元素指小于100mg/L的元素。第四十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日Mn

對(duì)糖酵解中的某些酶有活化作用。B

影響植物的有性生殖如花器官的發(fā)育和受精作用。還具有抑制有毒的酚類化合物的形成的作用，改善某些植物組織的培養(yǎng)狀況，缺硼時(shí)細(xì)胞分裂停滯，愈傷表現(xiàn)出老化現(xiàn)象。第四十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日Z(yǔ)n

是吲哚乙酸生物合成必需的，也是谷氨酸脫氫酶、乙醇脫氫酶等的活化劑。Cu

是細(xì)胞色素氧化酶、多酚氧化酶等氧化酶的成分，可影響氧化還原過(guò)程。Mo

是硝酸還原酶和鉬鐵蛋白的金屬成分。返第四十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日4、鐵鹽

鐵是一些酶（氧化酶、細(xì)胞色素氧化酶、過(guò)氧化氫酶等）的重要組成成分，又是葉綠素形成的必要條件。培養(yǎng)基中的鐵對(duì)胚的形成、芽的分化和幼苗轉(zhuǎn)綠有促進(jìn)作用。但由于Fe的特殊性質(zhì)，即很不穩(wěn)定、易沉淀，需要在酸性條件下才能比較穩(wěn)定，故在培養(yǎng)基配制時(shí)常常把Fe鹽單獨(dú)配制，且以螯合物的形式存在。返第五十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日5、有機(jī)質(zhì)----糖

不同糖類對(duì)生長(zhǎng)的影響不同。從各種糖對(duì)水稻根培養(yǎng)的影響來(lái)看，以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相當(dāng)，麥芽糖差一些。不同植物不同組織的糖類需要量也不同，實(shí)驗(yàn)時(shí)要根據(jù)配方規(guī)定按量稱取，不能任意取量。第五十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日種類：

VB1(鹽酸硫胺素)

、VB6(鹽酸吡哆醇)

、VB3(煙酸)

、

Vc(抗壞血酸)，有時(shí)還使用生物素、葉酸、核黃素等。濃度：

0.1－1.0mg/L

作用：

VB1促愈傷組織產(chǎn)生，提高活力

VB6促根生長(zhǎng)

VB3與代謝和胚發(fā)育有關(guān)

Vc防組織褐變維生素(vitamin)第五十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日肌醇（環(huán)己六醇）促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)以及胚狀體和芽的形成對(duì)組織細(xì)胞繁殖、分化的促進(jìn)作用濃度100mg/L第五十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日氨基酸(aminoacide)

是很好的有機(jī)氮源，可直接被細(xì)胞吸收利用。培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。返第五十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

為了特殊的培養(yǎng)目的，在一部分培養(yǎng)基中還添加了一些特殊成分，如水解酪蛋白，水解乳蛋白，酵母提取物，胰蛋白胨，椰乳，西紅柿汁，香蕉粉，橘子汁，可可汁等天然復(fù)合物以及活性炭，滲透調(diào)節(jié)劑等。6、其它輔助性物質(zhì)第五十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日1)椰乳

是椰子的液體胚乳。它是使用最多、效果最大的一種天然復(fù)合物。一般使用濃度在10％-20％在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用。第五十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日2)香蕉

濃度：150-200ml/l。用黃熟的小香蕉，加入培養(yǎng)基后變?yōu)樽仙?duì)pH值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應(yīng)用，對(duì)發(fā)育有促進(jìn)作用。第五十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日3)馬鈴薯(potato)

去掉皮和芽后，加水煮30min，再經(jīng)過(guò)過(guò)濾，取其濾液使用。用量為150-200g／L。對(duì)pH值緩沖作用也大。添加后可得到健壯的植株。第五十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日4)水解酪蛋白或水解乳蛋白

為蛋白質(zhì)的水解物，主要成分為氨基酸（含有約20種氨基酸的混合物）使用濃度為100-200mg／L。受酸和酶的作用易分解。第五十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日5)其他

酵母提取液(YE)(0.01％-0.05％)，主要成分為氨基酸和維生素類；麥芽提取液(0．01％-0．5％)

蘋(píng)果和番茄的果汁、黃瓜的果實(shí)、未熟玉米的胚乳等。第六十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日6)其它輔助性物質(zhì)抗生物質(zhì)抗氧化物活性炭第六十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日A、抗生物質(zhì)(antibiotic)

種類：青霉素、鏈霉素、慶大霉素等用量：5-20mg／L。作用：防止菌類污染，減少培養(yǎng)中材料的損失。對(duì)于剛感染的組織材料，可向培養(yǎng)基中注入5％-10％的抗菌素。注意：抗生素各有其抑菌譜，要加以選擇試用，也可兩種抗生素混用。但是應(yīng)當(dāng)注意抗生素對(duì)植物組織的生長(zhǎng)也有抑制作用，使用要慎重。第六十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日B、抗氧化物(antioxide)

酚污染——植物組織在切割時(shí)會(huì)溢泌一些酚類物質(zhì)，接觸空氣中的氧氣后，自動(dòng)氧化或由酶類催化氧化為相應(yīng)的醌類，產(chǎn)生可見(jiàn)的茶色、褐色以致黑色。這些物質(zhì)滲出細(xì)胞外就造成自身中毒，使培養(yǎng)的材料生長(zhǎng)停頓，失去分化能力，最終變褐死亡。在木本，尤其是熱帶木本及少數(shù)草本植物中較為嚴(yán)重。第六十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日抗酚類氧化常用的藥劑有半胱氨酸及Vc用量：50-200mg／L的濃度方法：洗滌剛切割的外植體表面或過(guò)濾滅菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。其他抗氧化劑：二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯第六十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日C、活性炭

主要是利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的影響，例如防止酚類物質(zhì)污染而引起組織褐化死亡。但活性炭對(duì)物質(zhì)吸附無(wú)選擇性、既吸有害物質(zhì)，也吸附有利物質(zhì)，因此使用時(shí)應(yīng)慎重考慮，不能過(guò)量，一般用量為1%--5%。返第六十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日7、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)植物激素是指自然狀態(tài)下植物體內(nèi)合成，并從產(chǎn)生處運(yùn)送到別處，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生顯著作用的微量（1毫克/升以下）有機(jī)物；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是指一些具有植物激素活性的人工合成的物質(zhì)。第六十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日植物激素植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中使用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)主要有生長(zhǎng)素類和細(xì)胞分裂素類兩大類，少數(shù)培養(yǎng)基中還添加赤霉素GA3等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)第六十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

種類IAA

NAA

IBA

2,4－D

作用誘導(dǎo)愈傷組織形成和根分化，促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。根對(duì)生長(zhǎng)素最敏感，在極低濃度下／L)就可促進(jìn)生長(zhǎng)，其次是莖和芽。濃度0.05－5mg/L，

(1)、生長(zhǎng)素類(auxin)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)——生長(zhǎng)素第六十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日天然的生長(zhǎng)素?zé)岱€(wěn)定性差，高溫高壓或受光條件易被破壞。在植物體內(nèi)也易受到體內(nèi)酶的分解。組織培養(yǎng)中常用人工合成的生長(zhǎng)素類物質(zhì)。生長(zhǎng)素配制可先用少量95％酒精助溶。2，4-D可用0．1mol／L的NaOH或KOH助溶。生長(zhǎng)素常配成1mg/ml的溶液貯于冰箱中備用。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)——生長(zhǎng)素第六十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)——生長(zhǎng)素IAA(吲哚乙酸)

是天然存在的生長(zhǎng)素，亦可人工合成，其活力較低，是生長(zhǎng)素中活力最弱的激素，對(duì)器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細(xì)胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。NAA(萘乙酸)

在組織培養(yǎng)中的起動(dòng)能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應(yīng)用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根，并與細(xì)胞分裂素互作促進(jìn)芽的增殖和生長(zhǎng)。第七十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)——生長(zhǎng)素IBA(吲哚丁酸)

是促進(jìn)發(fā)根能力較強(qiáng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)

起動(dòng)能力比IAA高10倍，特別在促進(jìn)愈傷組織的形成上活力最高，但它強(qiáng)烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。適宜的用量范圍較狹窄，過(guò)量常有毒效應(yīng)。第七十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日(2)、GA(赤霉素)

種類：有20多種，生理活性及作用的種類、部位、效應(yīng)等各有不同。培養(yǎng)基中添加的是GA3。作用：促莖伸長(zhǎng)，促胚發(fā)育成植株；打破休眠；特性：赤霉素溶于酒精，配制時(shí)可用少量95％酒精助溶。赤霉素不耐熱，高壓滅菌后將有70％-100％失效，應(yīng)當(dāng)采用過(guò)濾滅菌法加入。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)——赤霉素第七十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)——細(xì)胞分裂素(3)、細(xì)胞分裂素類(cytokinin)

這類激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA、Kt、玉米素ZT等。其中ZT活性最強(qiáng)，但非常昂貴，常用的是6-BA。細(xì)胞分裂素使用濃度：0.05-10mg／L。第七十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的成分——細(xì)胞分裂素在培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素有三個(gè)作用：①誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)。細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素相互作用，當(dāng)組織內(nèi)細(xì)胞分裂素／生長(zhǎng)素的比值高時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織或器官分化出不定芽。②促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。細(xì)胞分裂素多用于誘導(dǎo)不定芽的分化、莖、苗的增殖，③抑制根的分化。避免在生根培養(yǎng)時(shí)使用。返第七十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日二、培養(yǎng)基的PH值

不同的植物對(duì)培養(yǎng)基最適PH值的要求也是不同，5.8能適應(yīng)大多數(shù)植物培養(yǎng)的需要。PH值因材料而異，也因培養(yǎng)基的組成而不同。它的大小可用0.1M的NaOH和0.1M的HCl來(lái)調(diào)整。但要注意兩點(diǎn)：第1、經(jīng)高溫高壓滅菌后，培養(yǎng)基的PH值會(huì)下降。第2、PH值的大小會(huì)影響瓊脂的凝固能力，當(dāng)PH值大于6時(shí)，培養(yǎng)基將會(huì)變硬，低于5時(shí)，瓊脂不能很好的凝固。第七十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日不同的植物不同培養(yǎng)部位不同的培養(yǎng)目的

三、培養(yǎng)基的種類、配方及其特點(diǎn)

培養(yǎng)基多數(shù)以發(fā)明人的名字來(lái)命名，如White培養(yǎng)基，Murashige和Skoog培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱MS培養(yǎng)基)，也有對(duì)某些成分進(jìn)行改良稱作改良培養(yǎng)基。需選用不同的培養(yǎng)基第七十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日（一）培養(yǎng)基種類據(jù)其態(tài)相分：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基據(jù)其作用分：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基據(jù)營(yíng)養(yǎng)水平分：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基據(jù)培養(yǎng)物的培養(yǎng)過(guò)程分：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基

第七十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基種類固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基通氣性較好，便于操作，但營(yíng)養(yǎng)分布不均，生長(zhǎng)發(fā)育不整齊。營(yíng)養(yǎng)分布均勻，生長(zhǎng)整齊一致，但通氣性差。第七十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

基本培養(yǎng)基種類MS培養(yǎng)基1962B5培養(yǎng)基1968White培養(yǎng)基1937N6培養(yǎng)基1975KM-8P培養(yǎng)基1974Miller培養(yǎng)基1965Nitsch培養(yǎng)基1963WPM培養(yǎng)基1933第七十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。無(wú)機(jī)鹽離子濃度高，硝酸鹽含量較高用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)MS培養(yǎng)基及特點(diǎn):第八十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。含有較低的銨，這可能對(duì)不少培養(yǎng)物的生長(zhǎng)有抑制作用。雙子葉植物尤其木本植物組培可選擇B5培養(yǎng)基及特點(diǎn)：第八十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

White培養(yǎng)基特點(diǎn)：

1937年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)的，1943年隨其專著的出版而問(wèn)世。1963年又作了改良，稱作White改良培養(yǎng)基，提高了MgSO4的濃度和增加了硼素。

無(wú)機(jī)鹽數(shù)量較低適于生根培養(yǎng)。第八十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日N6培養(yǎng)基特點(diǎn)：

1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。

成分較簡(jiǎn)單，KNO3和(NH4)2SO4含量高適合花藥培養(yǎng)第八十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

KM-8P培養(yǎng)基特點(diǎn)：

1974年為原生質(zhì)體培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。有機(jī)成分較復(fù)雜，它包括了所有的單糖和維生素，廣泛用于原生質(zhì)體培養(yǎng)，包括融合的培養(yǎng)。第八十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日合適培養(yǎng)基的選擇：基本培養(yǎng)基；各種激素的濃度與配比

MS培養(yǎng)基適合于大多數(shù)雙子葉植物；B5和N6培養(yǎng)基適合于許多單子葉植物；White培養(yǎng)基適合于根的培養(yǎng)；首先試用這些培養(yǎng)基進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)，在基本培養(yǎng)基確定之后，進(jìn)行不同種類激素濃度和激素間相互比例的配合試驗(yàn)。合適培養(yǎng)基的選擇第八十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的制備—母液的配制和保存

經(jīng)常使用的培養(yǎng)基，可先將各種藥品配成濃縮一定倍數(shù)的母液，放入冰箱內(nèi)保存，用時(shí)再按比例稀釋。母液要根據(jù)藥劑的化學(xué)性質(zhì)分別配制。一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、氨基酸等母液，其中維生素、氨基酸類可以分別配制，也可以混在一起。大量元素的母液可以配制成10倍、20倍。微量元素可配成50或100倍濃度的混合母液。KI可以單獨(dú)配成母液。第八十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制備—母液的配制和保存

鐵鹽也容易發(fā)生沉淀，需要單獨(dú)配制。一般硫酸亞鐵（FeSO47H2O）和乙二胺四乙酸鈉（Na2－EDTA）配成100倍濃度的鐵鹽螯合劑比較穩(wěn)定，不易沉淀。氨基酸可以和維生素一起配成100或200倍液，也可將它們中的幾種有機(jī)成分分別配制。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)也可以分別配制成母液，儲(chǔ)存于冰箱。一般濃度為0.1～1mg／ml。

IAA、NAA、IBA、2,4-D之類生長(zhǎng)素，可先用少量0.lmol/L的HCl或95％的酒精溶解，KT、BA等細(xì)胞分裂素則可用少量0.lmol/l的NaOH加熱溶解，然后加水定容。第八十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

以MS培養(yǎng)基為例--大量元素母液配制

母液化合物名稱培養(yǎng)基用量（mg/L）擴(kuò)大倍數(shù)稱取量(mg)母液體積(mL)1L培養(yǎng)基吸取母液量（mL）大量元素KNO3NH4NO3MgSO4·7H2OKH2PO4CaCl2·2H2O1,9001,6503701704401019,00016,5003,7001,7004,4001000100第八十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

以MS培養(yǎng)基為例—微量元素母液配制

母液化合物名稱培養(yǎng)基用量mg/L）擴(kuò)大倍數(shù)稱取量mg)母液體積(mL)1L培養(yǎng)基吸取母液量（mL）微量元素MnSO4·4H2OZnSO4·7H2OH3BO3KINa2MoO4·2H2OCuSO4·5H2OCoCl2·6H2O22.38.66.20.830.250.0250.0251002,23086062083252.52.5100010第八十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

以MS培養(yǎng)基為例—鐵鹽與有機(jī)物母液配制

母液化合物名稱培養(yǎng)基用量（mg/L）擴(kuò)大倍數(shù)稱取量(mg)母液體積(mL)1L培養(yǎng)基吸取母液量（mL）鐵鹽

Na2-EDTAFeSO4·7H2O

37.327.810037302780100010有機(jī)物甘氨酸VB1VB6煙酸肌醇2.00.10.50.5100

10

201551,000100

10第九十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制做方法

將配制好的母液按順序排列，先取適量的蒸餾水放入容器，然后依次用專用的移液管按需要量吸取各種母液，并混合在一起。再將瓊脂（事先加熱溶解）和糖加入其中，最后加蒸餾水定容至所需體積。隨即用0.lmol/l的NaOH和HCl將pH調(diào)至所需的數(shù)值，然后分裝到培養(yǎng)瓶中。培養(yǎng)基的pH大多數(shù)植物都要求在pH5.6～5.8第九十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

計(jì)算：制做3L

MS+6-BA2mg/l+NAA0.1mg/l+蔗糖3%+瓊脂0.6%

需要母液各多少？

大量元素母液（10倍）——？微量元素母液（100倍）——？鐵鹽母液（100倍）——？有機(jī)物質(zhì)母液（100倍）——？

6-BA母液(1mg/ml)——？

NAA母液(0.1mg/ml)——？蔗糖——？瓊脂——？第九十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

培養(yǎng)基一般采用濕熱滅菌法，溫度為121℃-123℃，維持20min，即可達(dá)到滅菌的目的。若滅菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)使培養(yǎng)基中的某些成分變性失效。但時(shí)間過(guò)短，不能保證滅菌的效果，易引起培養(yǎng)基污染。培養(yǎng)基儲(chǔ)藏在4～10℃的條件下。第九十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基蒸氣滅菌所需的最少時(shí)間

容積/容器（ml）在121℃下所需要滅菌時(shí)間20~5015min7520min250~50025min100030min150035min200040min第九十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日123456第九十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日第九十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

第四節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)

一、外植體的選擇

二、外植體的滅菌三、外植體的接種和培養(yǎng)四、外植體的成苗途徑

主要內(nèi)容第九十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

植物體的各個(gè)部位，如根、莖（鱗莖、莖段）、葉（子葉、葉片）、花瓣、花藥、胚珠、幼胚、塊莖、莖尖、維管組織、髓部等都可以做為外植體。

植物種類不同，同一植物不同器官，同一器官不同生理狀態(tài)，對(duì)外界誘導(dǎo)反應(yīng)的能力及分化再生能力是不同的。

選擇適宜的外植體需要從植物基因型、外植體來(lái)源、外植體大小、取材季節(jié)及外植體發(fā)育年齡等方面加以考慮。一、外植體的選擇第九十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

植物基因型不同，組織培養(yǎng)的難易程度不同。草本植物比木本植物易于通過(guò)組織培養(yǎng)獲得成功，雙子葉植物比單子葉植物易于組織培養(yǎng)。木本植物中，獼猴桃較易再生植株；松樹(shù)、柏樹(shù)等就比較困難。植物基因型不同，組培再生途徑也不同。如十字花科及傘形科中的胡蘿卜、芥菜、等易于誘導(dǎo)胚狀體。茄科中的煙草、番茄、曼陀羅，易于誘導(dǎo)愈傷組織。

植物基因型一、外植體的選擇第九十九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)害的植株上選取發(fā)育正常的器官或組織作為外植體，離體培養(yǎng)易于成功。因?yàn)?，這部分器官或組織代謝旺盛，再生能力強(qiáng)。同一植物不同部位之間的再生能力差別較大，如同一種百合鱗莖的外層鱗片比內(nèi)層鱗片再生能力強(qiáng)，下段比中段、上段再生能力強(qiáng)。因此，最好對(duì)所要培養(yǎng)的植物各部位的誘導(dǎo)及分化能力進(jìn)行比較，從中篩選合適的、最易再生的部位作為最佳外植體。

外值體來(lái)源一、外植體的選擇第一百頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

對(duì)大多數(shù)植物來(lái)說(shuō)，莖尖是較好的外植體，由于莖形態(tài)已基本建成，生長(zhǎng)速度快，遺傳性穩(wěn)定，也是獲得無(wú)病毒苗的重要途徑，如月季、蘭花、大麗花、非洲菊無(wú)病毒苗的生產(chǎn)等。但莖尖往往受到材料來(lái)源的限制，為此可以采用莖段、葉片等作為培養(yǎng)材料，如菊花、各種觀賞秋海棠、黃花夾竹桃等。另外，還可根據(jù)需要選擇鱗莖。（如麝香百合），花莖或花梗（如蝴蝶蘭），花瓣、花蕾（如君子蘭），根尖（如雀巢蘭屬），胚（垂笑君子蘭），無(wú)菌實(shí)生苗（吊蘭）等部位作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)。一、外植體的選擇第一百零一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

外植體的大小，應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)目的而定。如果是胚胎培養(yǎng)或脫毒，則外植體宜?。蝗绻沁M(jìn)行快速繁殖，外植體宜大。但外植體過(guò)大，殺菌不徹底，易于污染；過(guò)小離體培養(yǎng)難于成活。一般外植體大小在0.5～1.cm為宜。具體說(shuō)葉片、花瓣等約為0.5cm2，莖段則長(zhǎng)約0.5cm，莖尖分生組織帶一兩個(gè)葉原基0.2～0.3mm大小等。

一、外植體的選擇外值體大小第一百零二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

離體培養(yǎng)的外植體最好在植物生長(zhǎng)的最適時(shí)期取材，即在其生長(zhǎng)開(kāi)始的季節(jié)里取樣，若在生長(zhǎng)末期或已經(jīng)進(jìn)入休眠期取樣，則外植體會(huì)對(duì)誘導(dǎo)反應(yīng)遲鈍或無(wú)反應(yīng)。如蘋(píng)果芽在春季取材成活率為60％，夏季取材下降到10％，冬季取材在10％以下。百合鱗片外植體，春、秋季取材易形成小鱗莖，夏、冬季取材培養(yǎng)，則難形成小鱗莖。

一、外植體的選擇取材季節(jié)第一百零三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

外植體的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡直接影響離體培養(yǎng)過(guò)程中的形態(tài)發(fā)生。一般認(rèn)為，沿植物的主軸，越向上的部分所形成的器官其生長(zhǎng)的時(shí)間越短，生理年齡也越老，越接近發(fā)育上的成熟，越易形成花器官；反之越向基部，其生理年齡越小。如在煙草的培養(yǎng)中，植株下部組織產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)芽的比例高，而上部組織產(chǎn)生花器官的比例高。一般情況下，越嫩，年限越短的組織具有越高的形態(tài)發(fā)生能力，組織培養(yǎng)越易成功。

外值體的發(fā)育年齡一、外植體的選擇第一百零四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

外植體滅菌的一般步驟

1．預(yù)處理，先對(duì)植物組織進(jìn)行修整，去掉不需要的部分，將準(zhǔn)備使用的植物材料在流水中沖洗干凈。經(jīng)過(guò)預(yù)處理的植物材料，其表面仍有很多細(xì)菌和真菌。

2．將植物組織塊置于一個(gè)玻璃瓶中，注入75%的酒精溶液埋沒(méi)材料，浸泡10S左右。倒出酒精，用無(wú)菌水沖洗三次。

二、外植體的滅菌第一百零五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日外植體消毒第一百零六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日3.將適當(dāng)濃度的消毒液(0.1%升汞或2%次氯酸鈉)(含有幾滴活化劑Tween20或Tween80)，使材料完全浸沒(méi)在消毒液中，蓋上蓋，把玻璃瓶置入超凈工作臺(tái)滅菌一定時(shí)間。在滅菌期間須把玻璃瓶搖動(dòng)2～3次。

4．消毒處理后，將瓶蓋打開(kāi)，將消毒液倒出，注入適量的無(wú)菌蒸餾水，再蓋上蓋，搖動(dòng)數(shù)次，將水倒掉，重復(fù)3～4次。

二、外植體的滅菌植體滅菌的一般步驟第一百零七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

二、外植體的滅菌

消毒劑使用濃度%去除難易消毒時(shí)間（min）效果次酸鈣9～10易5～30很好次氯酸鈉2.0易5～30很好過(guò)氧化氫10～12最易5～15好氯化汞0.1～1.0較難2～10最好溴水1～2易2～10很好硝酸銀1.0較難5～30好抗生素4～50mg/L中30～60較好常用滅菌劑的使用及其效果第一百零八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

各種外植體的滅菌方法

（1）莖尖、莖段及葉片等的消毒植物的莖、葉部分多暴露于空氣中，有的具有茸毛、油脂、蠟質(zhì)和刺等，在栽培上又受到泥、肥中的雜菌污染，所以消毒前要經(jīng)自來(lái)水較長(zhǎng)時(shí)間的沖洗。消毒時(shí)要用70%的酒精浸泡數(shù)秒，無(wú)菌水沖洗2～3次，然后按材料的老、嫩和枝條的堅(jiān)實(shí)程度，分別采用2%～10%的次氯酸鈉溶液浸泡10～25min，若材料有茸毛最好在消毒液中加入幾滴吐溫-80，消毒后用無(wú)菌水沖洗3次后方可接種。二、外植體的滅菌第一百零九頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

（2）果實(shí)及種子的消毒根據(jù)清潔度，用自來(lái)水沖洗10～20分鐘，甚至更長(zhǎng)時(shí)間。再用純酒精迅速漂洗一下。果實(shí)用2%次氯酸鈉溶液浸10min后，用無(wú)菌水沖洗2～3次，就可取出果實(shí)內(nèi)的種子或組織進(jìn)行培養(yǎng)。種子則要先用10%次氯酸鈉浸泡20～30min甚至幾小時(shí)。對(duì)難以消毒的還可用0.l%升汞或1%～2%溴水消毒5min。進(jìn)行胚或胚乳培養(yǎng)，對(duì)種皮太硬的種子，可先去掉種皮，再用4%～10%的次氯酸鈉溶液浸泡8～10min，經(jīng)無(wú)菌水沖洗后，即可取出接種。二、外植體的滅菌第一百一十頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

（3）花藥的消毒用于培養(yǎng)的花藥，實(shí)際上多未成熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒就可以了。一般用70%酒精浸泡數(shù)秒，然后用無(wú)菌水沖洗2～3次，再在漂白粉清液中浸泡10分鐘，經(jīng)無(wú)菌水沖洗2～3次即可接種。二、外植體的滅菌第一百一十一頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

（4）根及地下部器官的消毒根和地下部器官生長(zhǎng)于土中消毒較為困難。除預(yù)先用自來(lái)水洗滌外，還應(yīng)用軟毛刷刷洗，用刀切去損傷及污染嚴(yán)重部位，吸水紙吸干后，再用酒精漂洗。可采用0.1%～0.2%升汞浸5～10min或2%次氯酸鈉溶液浸10～15min，然后以無(wú)菌水沖洗3次，用無(wú)菌濾紙吸干后可接種。

二、外植體的滅菌第一百一十二頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日二、外植體的滅菌總的來(lái)說(shuō)有以下幾點(diǎn)：（1）對(duì)植體進(jìn)行修剪去掉不需要的部分。（2）在流水下進(jìn)行對(duì)外植體表面灰塵沖洗。（3）用70%酒精浸10—30秒不等殺死外植體表面的細(xì)菌。（4）用無(wú)菌水沖洗表面殘余的酒精3----5遍.（5）用0.1%的氯化汞浸泡10分鐘。（6）倒出氯化汞，用無(wú)菌水沖洗外植體3-5遍。（7）用濾紙進(jìn)行吸干外植體之后進(jìn)行切割。第一百一十三頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

三、外植體的接種和培養(yǎng)

（一）無(wú)菌操作(接種工作)

（二）外植體的培養(yǎng)

第一百一十四頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

植物組織培養(yǎng)的接種是把經(jīng)過(guò)表面消毒后的植物材料切碎或分離出器官、組織細(xì)胞，并把它們轉(zhuǎn)放到無(wú)菌培養(yǎng)基上的全部操作過(guò)程，是一種無(wú)菌技術(shù)。整個(gè)操作的過(guò)程，一切用具、材料、培養(yǎng)基、培養(yǎng)室、工作人員的衣物都要無(wú)菌。在操作過(guò)程中引起的污染，主要是由材料本身帶菌和工作人員本身引起的。

（一）無(wú)菌操作

三、外植體的接種和培養(yǎng)第一百一十五頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)際上是一種無(wú)菌操作和無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)，做好接種室的消毒是至關(guān)重要的。污染的主要來(lái)源是空氣中的細(xì)菌和真菌孢子，因此，每次接種前半小時(shí)應(yīng)進(jìn)行地面的清潔衛(wèi)生工作，并用70％酒精噴霧使空氣的灰塵沉降。用紫外線燈照射20分鐘。接種前工作臺(tái)面要用新潔爾滅或酒精擦洗。

（1）接種室的消毒三、外植體的接種和培養(yǎng)第一百一十六頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

（2）工作人員要求

①入無(wú)菌室前，要洗手。②入室時(shí)要穿上經(jīng)過(guò)消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。③操作前要用70%酒精擦洗手，操作中要經(jīng)常用酒精擦洗手。不準(zhǔn)講話，以免微生物污染材料、培養(yǎng)基和用具。每次重新操作都要把工具在火焰上消毒。

三、外植體的接種和培養(yǎng)第一百一十七頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日換上工作服擦工作臺(tái)酒精擦拭手第一百一十八頁(yè)，共一百三十一頁(yè)，2022年，8月28日

（3）材料的切取切取和接種較大的材料肉眼觀察即可操作分離，較小的材料需在雙筒解剖