細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施常用器材和培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施常用器材和培養(yǎng)基第一頁，共三十頁，2022年，8月28日第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施一、無菌實(shí)驗(yàn)室防止微生物污染和有害因素的影響工作環(huán)境清潔、空氣清新、干燥和無煙塵。第二頁，共三十頁，2022年，8月28日第三頁，共三十頁，2022年，8月28日二、超凈臺(tái)第四頁，共三十頁，2022年，8月28日三、恒溫培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱CO2培養(yǎng)箱第五頁，共三十頁，2022年，8月28日第六頁，共三十頁，2022年，8月28日四、其他設(shè)備倒置顯微鏡電熱鼓風(fēng)干燥箱電子天平恒溫水浴箱離心機(jī)壓力蒸汽消毒器冰箱第七頁，共三十頁，2022年，8月28日第八頁，共三十頁，2022年，8月28日第九頁，共三十頁，2022年，8月28日第十頁，共三十頁，2022年，8月28日第十一頁，共三十頁，2022年，8月28日第十二頁，共三十頁，2022年，8月28日第十三頁，共三十頁，2022年，8月28日第二節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)常用器材及處理方法一、玻璃器材培養(yǎng)皿滴流瓶刻讀吸管、離心管等培養(yǎng)瓶燒杯、量筒等三角燒瓶第十四頁，共三十頁，2022年，8月28日玻璃器材的消毒處理方法清潔液浸泡，自來水沖10次，單蒸水洗2次，培養(yǎng)瓶再用三蒸水浸泡過夜，烘干，包裝，滅菌第十五頁，共三十頁，2022年，8月28日二、塑料器材多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)皿培養(yǎng)瓶第十六頁，共三十頁，2022年，8月28日塑料器材的消毒處理方法用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡過夜（單用或交叉處理）-水洗10次-單蒸水2次-三蒸水浸泡過夜-烘干-紫外線或輻射滅菌第十七頁，共三十頁，2022年，8月28日三、橡皮器材橡皮制品(最好是硅制品)主要是各種瓶或試管的塞子、蓋子。橡皮器材的消毒處理方法5%NaOH煮-水洗-4%鹽酸煮-水洗8~10次-單蒸水洗三次、二蒸水洗一次。第十八頁，共三十頁，2022年，8月28日四、金屬器材剪刀、鑷子、手術(shù)刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號(hào)針頭等金屬器材的消毒處理方法紙擦去表面的油脂-洗衣粉煮沸，或用1%碳酸氫鈉煮沸15分鐘-水洗-95%酒精紗布擦干-包裝滅菌第十九頁，共三十頁，2022年，8月28日五、其他物品紗布注射器和針頭第二十頁，共三十頁，2022年，8月28日第三節(jié)常用溶液、培養(yǎng)液及其配制一、平衡鹽溶液細(xì)胞培養(yǎng)中常用的基本液體。（一）配液時(shí)的注意事項(xiàng)1）稱量要準(zhǔn)確2）物質(zhì)的純度3）物質(zhì)的可溶性4）物質(zhì)的不穩(wěn)定性5）貯存液第二十一頁，共三十頁，2022年，8月28日（二)幾種常用溶液的配制方法1、無鈣、鎂離子溶液2、磷酸鹽緩沖液3、Hanks液第二十二頁，共三十頁，2022年，8月28日1、無鈣、鎂離子溶液(1000ml)氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫鈉0.05g氯化鉀(KCl)0.2g碳酸氫鈉1g檸檬酸三鈉葡萄糖1g加去離子水或雙蒸水至1000mL第二十三頁，共三十頁，2022年，8月28日2、磷酸鹽緩沖液甲液：0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液磷酸氫二鈉(無水)28.4g氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL乙液：0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液磷酸二氫鈉(無水)2.4g氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL甲、乙液于4℃保存，使用時(shí)按比例，配制成所需pH濃度，高壓滅菌后室溫保存。第二十四頁，共三十頁，2022年，8月28日3、Hanks液

(1)母液甲(20x)配法①NaCl(A.R)160g，KCl(A.R)8g，MgSO4.7H2O（A.R)2g，MgCl.6H2O(A.R)2g，依次溶于800mL雙蒸水中，前一物質(zhì)溶后再加后一種。②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL雙蒸水中，溶時(shí)不斷攪拌（此液應(yīng)單配，單溶）。待上述兩溶液中的“溶質(zhì)”全溶后，將它們混合，再用雙蒸水補(bǔ)至1000mL，向其中加2mL氯仿作為防腐劑，置4℃保存。第二十五頁，共三十頁，2022年，8月28日(2)母液乙(20×)配法①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g，KH2PO4(A.R)1.20g，葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml雙蒸水中。②0.4%酚紅液0.4g酚紅放在玻璃研缽后加0.01NNaOH11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，過濾，pH為7.4，4℃保存。待上述各“溶質(zhì)”完全溶解后，用雙蒸水補(bǔ)至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐劑，置40℃保存第二十六頁，共三十頁，2022年，8月28日(3)使用液（1×）配法取母液甲和母液乙各一份，加雙蒸水18份，分裝后，塞好瓶塞，掛上標(biāo)志。以115℃高壓滅菌25分鐘(以免葡萄糖破壞)，置室溫后4℃保存，可使用幾個(gè)月。臨用前，用7.5%NaHCO3調(diào)至所需pH。第二十七頁，共三十頁，2022年，8月28日二、其他溶液（一）pH調(diào)節(jié)液（二）消化液（三）抗生素溶液（四）0.5%臺(tái)盼蘭(Trypanblue)液（五）0.1%結(jié)晶紫第二十八頁，共三十頁，2022年，8月28日三、培養(yǎng)基（維持液、營養(yǎng)液）

(一)天然培養(yǎng)基(組成=平衡鹽溶液+天然動(dòng)物成分)1、血清（馬、兔、雞、小牛、新生小牛和胎牛）（1）收集與保存（2）小牛血清對(duì)細(xì)胞的作用提供細(xì)胞增殖所必須的生長因子（A因子促進(jìn)；B、C因子對(duì)細(xì)胞有抑制生長作用；D因子促進(jìn)細(xì)胞粘連）對(duì)細(xì)胞附壁有利保護(hù)作用，解除毒性物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的毒性作用