雞蛋卵磷脂的提取制備

雞蛋卵磷脂的提取制備1、學(xué)習(xí)和掌握卵磷脂的提取和鑒定方法；2、掌握薄層層析的原理、方法和應(yīng)用。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖羌?xì)胞膜磷脂雙分子層的重要成分。卵磷脂又稱磷脂酰膽堿，是甘油磷脂的一種。在動(dòng)植物體內(nèi)均有分布，在動(dòng)物的腦、精液、心、肝、腎上腺和卵細(xì)胞中含量較多，蛋黃中含量可達(dá)8-10％。其結(jié)構(gòu)式為：膽堿HO磷脂易溶于乙醚、苯、氯仿，部分溶于乙醇，極難溶于丙酮；卵磷脂溶于乙醇、甲醇、氯仿等有機(jī)溶劑，但不溶于丙酮；丙酮能夠溶解油脂和游離脂肪酸、甘油三酯等。因此，本實(shí)驗(yàn)用乙醇、乙醚為溶劑，丙酮為沉淀劑，干燥后獲得卵磷脂。新提取得到的卵磷脂為白色蠟狀物，與空氣接觸后因所含不飽和脂酸被氧化而呈黃褐色。卵磷脂中的膽堿，在堿性溶液中可分解為三甲胺，而具有特異的魚腥味，可用于鑒定。（一）卵磷脂的提取和純化二、實(shí)驗(yàn)原理

（二）薄層層析薄層層析（TLC）是一種微量而快速的層析方法。其層析是在吸附劑（固相支持物）均勻涂布的的薄層上進(jìn)行的，故稱薄層層析。而待分析的樣品，是點(diǎn)加到薄層板的一端，然后將該端浸入適宜的展層劑中，在密閉的層析缸中展層。由于各種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的不同，其在吸附劑表面的吸附能力各異。吸附力大的易被吸附劑吸附，而較難被展層劑所解吸。吸附力小的則不易被吸附劑吸附，而易被展層劑攜帶至較遠(yuǎn)的距離。這樣，各種物質(zhì)在吸附劑和展層劑之間反復(fù)多次的被吸附與解吸附，就表現(xiàn)出不同的遷移率而得以分離，并可以通過與顯色劑的顯色反應(yīng)而得到鑒定與區(qū)分。（一）卵磷脂的提取和純化1、實(shí)驗(yàn)材料：雞蛋黃2、儀器：恒溫水浴鍋蒸發(fā)皿漏斗磁力攪拌器天平3、試劑：95％乙醇乙醚丙酮三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑1、實(shí)驗(yàn)材料：提取的卵磷脂2、儀器：電熱鼓風(fēng)干燥箱、層析玻璃板、層析缸、吹風(fēng)機(jī)、小型噴霧器。3、試劑：（1）硅膠-G；（2）0.2%羧甲基纖維素鈉溶液；（3）展層劑：氯仿∶甲醇∶水(65∶25∶4)；（4）顯色劑：1%碘液。（二）卵磷脂的薄層層析1、卵磷脂的粗提蛋黃10g放入潔凈的帶塞三角瓶中，加入95%乙醇40ml，攪拌15min后，靜置15min；然后加入10ml的乙醚，攪拌15min后，靜置15min；過濾；濾渣進(jìn)行二次提取，加入乙醇與乙醚(體積比為3：1)的混合液30ml，攪拌、靜置一定時(shí)間；第二次過濾，合并二次濾液，加熱濃縮至少量，加入一定量丙酮除雜，卵磷脂即沉淀出來，即得到卵磷脂粗品。四、實(shí)驗(yàn)步驟

（一）卵磷脂的提取2．卵磷脂的純化

取一定量的卵磷脂粗品，用無水乙醇溶解，得到約10%的乙醇粗提液，加入相當(dāng)于卵磷脂質(zhì)量的10%的ZnCl2水溶液，室溫?cái)嚢?.5h；分離沉淀物，加入適量冰丙酮（4℃）洗滌，攪拌1h，再用丙酮反復(fù)研洗，直到丙酮洗液為近無色止，得到白色臘狀的精卵磷脂；干燥；稱重。（二）卵磷脂的薄層層析1、調(diào)漿：稱取硅膠-G4.5g→燒杯→12ml0.2%羧甲基纖維素鈉溶液→用玻璃棒調(diào)勻攪拌為漿狀液。2、涂布：取潔凈、干燥玻璃板一塊→下襯一張白紙→在桌面上放平→用燒杯將漿狀物均勻倒在玻璃板上，從一端開始，保持均勻一致，涂布面積1～4/5。3、干燥：在室溫下涼干2分鐘→60℃干燥箱烘30分鐘。4、活化：將干燥箱升溫至120℃，活化30分鐘后，關(guān)閉電源，當(dāng)玻璃板面溫度降至不燙手時(shí)取出。5、點(diǎn)樣：樣點(diǎn)距玻璃板一端下緣1cm，相互間隔1～1.2cm；每位點(diǎn)重復(fù)點(diǎn)五次，每次用冷風(fēng)吹干后再點(diǎn)，每次點(diǎn)樣直徑不超過2mm。6、展層：在層析缸中加入展層劑0.5cm深，加蓋平衡30分鐘，將點(diǎn)樣端浸入，密閉展層10-30min。后取出薄層板，標(biāo)出展層劑前沿位置，用電吹風(fēng)熱風(fēng)將薄層板吹干。7、顯色：用噴霧器向薄層板上均勻噴灑1%碘液溶液，熱風(fēng)吹干至色斑顯現(xiàn)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、卵磷脂收率卵磷脂收率=卵磷脂粗品重量/蛋黃重量×100%2、計(jì)算各組分的Rf值3、判斷卵磷脂粗提物的組分四種磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的Ｒf值分別為:溶血卵磷脂0.18；神經(jīng)鞘磷脂0.33；卵磷脂0.65；磷脂酰乙醇胺0.96OABCDO1O2E六、思考題：1、簡(jiǎn)述卵磷脂的生物學(xué)功能。2、磷脂酰膽堿（卵磷脂），磷脂酰乙