西昌學(xué)院基礎(chǔ)生物實(shí)驗(yàn)中心

西昌學(xué)院基礎(chǔ)生物實(shí)驗(yàn)中心

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)編輯課件一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

生物化學(xué)是一門實(shí)驗(yàn)性學(xué)科，是生物系專業(yè)基礎(chǔ)課程。它的作用是為生物其他學(xué)科提供必要的生物化學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)，通過(guò)與各課程相配合的實(shí)驗(yàn)使學(xué)生受到有關(guān)生物化學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)訓(xùn)練，并驗(yàn)證與加深理解課堂講授內(nèi)容，同時(shí)與應(yīng)用測(cè)定技術(shù)相結(jié)合，使學(xué)生擴(kuò)大生化實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用范圍，提高分析問(wèn)題解決問(wèn)題的能力。編輯課件二、實(shí)驗(yàn)要求

生化實(shí)驗(yàn)通過(guò)學(xué)習(xí)滴定，比色，層析，電泳等生化制備基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，以及實(shí)驗(yàn)方法，操作技術(shù)，儀器的使用，來(lái)分析生物體中糖，蛋白質(zhì)，核酸，酶，維生素等生化物質(zhì)及代謝過(guò)程，培養(yǎng)學(xué)生具有初步的科學(xué)使用能力及嚴(yán)格的科學(xué)作風(fēng)，掌握基本的生化研究技能為深入各學(xué)科研究打下良好基礎(chǔ)。編輯課件三、課時(shí)安排

本實(shí)驗(yàn)總學(xué)時(shí)數(shù)為30學(xué)時(shí)每次實(shí)驗(yàn)3學(xué)時(shí)編輯課件

實(shí)驗(yàn)室要求

一、實(shí)驗(yàn)課的目的1、加深理解：加深對(duì)生物化學(xué)基本理論的理解。2、掌握技術(shù)：掌握生物化學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)（四大基本技術(shù)：離心、電泳、層析、比色）及分子生物學(xué)的一些基本技術(shù)和方法。3、培養(yǎng)能力：培養(yǎng)學(xué)生的思維能力、動(dòng)手能力和表達(dá)能力。4、掌握精髓：科學(xué)的精髓是實(shí)事求是、敢于探索、善于創(chuàng)新的精神，要對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的一切反?，F(xiàn)象進(jìn)行討論，并大膽提出自己的看法。編輯課件二、生化實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和要求

1、預(yù)習(xí)：課前要預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)教材，了解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理，熟悉操作?guī)程。2、秩序：自覺(jué)遵守紀(jì)律，維護(hù)教學(xué)秩序，不準(zhǔn)遲到、早退，保持安靜，嚴(yán)禁談笑打鬧，聽(tīng)從教師指導(dǎo)，未經(jīng)教師同意，不得隨意離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。編輯課件3、整潔：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面必須保持整潔，儀器藥品要井然有序，公用試劑用畢，應(yīng)立即蓋嚴(yán)放回原處，勿使藥品試劑撒在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和地面。實(shí)驗(yàn)完畢，需將藥品試劑排列整齊，儀器要洗凈倒置放好。全體同學(xué)由班長(zhǎng)安排輪流值日，負(fù)責(zé)當(dāng)天實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生、安全和一些服務(wù)性工作，經(jīng)教師驗(yàn)收合格后，方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。編輯課件4、節(jié)約：使用儀器、藥品、試劑及各種物品必須厲行節(jié)約，并節(jié)約水電。應(yīng)特別注意保持藥品和試劑的純凈，嚴(yán)防混雜、亂用和污染。使用和洗滌儀器應(yīng)小心仔細(xì)，防止損壞，貴重儀器使用前應(yīng)熟悉使用方法，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，嚴(yán)禁隨意開(kāi)動(dòng)，發(fā)現(xiàn)故障后應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，不要自己動(dòng)手檢修，如有損壞按學(xué)校規(guī)定賠償。編輯課件

5、安全：時(shí)刻注意防火、防水、防電、防危險(xiǎn)品、防事故，以免發(fā)生意外。

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙。

使用乙醚、苯、乙醇、丙酮等易燃品時(shí)，不允許在電爐、酒精燈上直接加熱。如有危險(xiǎn)發(fā)生，應(yīng)首先關(guān)掉電源；有機(jī)溶劑著火時(shí)，勿用水潑，以免擴(kuò)大燃燒面積，可用沙土、滅火器具滅之。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一切物品未經(jīng)本室負(fù)責(zé)教師批準(zhǔn)，嚴(yán)禁攜帶出室外，有毒物品尤其如此。借物必須辦理登記手續(xù)。編輯課件實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定

-----紙層析法

一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)紙層析的基本原理，掌握氨基酸分離鑒定的操作技術(shù)，學(xué)會(huì)分析未知樣品。二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】層析缸；噴霧器；層析濾紙；擴(kuò)展劑；氨基酸溶液；顯色劑編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】層析是利用混合物各組分物理化學(xué)性質(zhì)（如：溶解度、吸附能力、電荷和分子量等）的差別，使各組分在支持物上集中分布在不同區(qū)域，借此將各組分分離。層析系統(tǒng)分為兩個(gè)相：固定相和流動(dòng)相。由于各組分受固定相的阻力和受流動(dòng)相的推力影響不同，各組分移動(dòng)速度也各異，從而使各組分得以分離。此法首先用于有色物質(zhì)的分離，故又稱色層析法。編輯課件層析法是近代生物化學(xué)最常用的分析法之一，此法可以分離性質(zhì)極為相似、而用一般化學(xué)方法難以分離的各種化合物，如各種氨基酸、核苷酸、糖、蛋白質(zhì)等。層析法有多種類型，根據(jù)所用兩組分不同分為以下幾類：吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠層析和親和層析等；根據(jù)操作方式不同分為：柱層析、薄層層析和紙層析等。編輯課件紙層析法：以濾紙為載體，濾紙上吸附著水（約含20%—22%）是經(jīng)常用的固定相，此類有機(jī)溶劑如醇、酚等為常用的流動(dòng)相。把欲分離的物質(zhì)加在紙的一端，使流動(dòng)溶劑經(jīng)此移動(dòng)，這樣就在兩相間發(fā)生分配現(xiàn)象。由于物質(zhì)分配系數(shù)的不同，就逐漸在紙上集中于不同的部位。在固定相中分配趨勢(shì)較大的成份，隨流動(dòng)相移動(dòng)的速度就慢；反之，在流動(dòng)相分配趨勢(shì)較小的成分，移動(dòng)速度就快。編輯課件物質(zhì)在紙上移動(dòng)的速度可以用Rf表示：

色斑中心至原點(diǎn)中心的距離

Rf=──────────────

溶劑前緣至原點(diǎn)中心的距離物質(zhì)在一定溶劑中的分配系數(shù)是一定的，故移動(dòng)速率（Rf值）也恒定，因此，可以根據(jù)Rf值來(lái)鑒定被分離的物質(zhì)。編輯課件紙層析法按操作方法分成兩類，即：垂直型和水平型。垂直型是將濾紙條懸起，使流動(dòng)相向上或向下擴(kuò)散；水平型是將圓形濾紙置于水平位，溶劑由中心向四周擴(kuò)散。編輯課件如果樣品成分較多，而且彼此的Rf值相近，單向?qū)游龇蛛x效果不佳，可用雙向?qū)游龇?，即在長(zhǎng)方形或方形濾紙的一角點(diǎn)樣，卷成圓筒形，先用第一種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，展開(kāi)完畢吹干后轉(zhuǎn)90o，再放于另一種溶劑系統(tǒng)中，向另一方向進(jìn)行第二次展開(kāi)，如此各成分分離較為清晰。編輯課件編輯課件四、【主要內(nèi)容】1．將盛有平衡溶劑的小燒杯置于密閉的層析缸中。

2．取層析濾紙(長(zhǎng)22cm、寬14cm)一張。在紙的一端距邊緣2~3cm處用鉛筆劃一條直線，在此直線上每間隔2cm作一記號(hào)編輯課件3．點(diǎn)樣用毛細(xì)管將各氨基酸樣品分別點(diǎn)在這6個(gè)位置上，干后再點(diǎn)一次。每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑最大不超過(guò)3mm。4．?dāng)U展用線將濾紙縫成筒狀，紙的兩邊不能接觸。將盛有約20mL擴(kuò)展劑的培養(yǎng)皿迅速置于密閉的層析缸中，并將濾紙直立于培養(yǎng)皿中(點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)樣線1cm)。待溶劑上升15~20cm時(shí)即取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿界線，自然干燥或用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹干。編輯課件5．顯色用噴霧器均勻噴上0.1％茚三酮正丁醇溶液然后置烘箱中烘烤5分鐘(100℃)或用熱風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點(diǎn)。6．計(jì)算各種氨基酸的Rf值。編輯課件五、【作業(yè)】1．何謂紙層析法？2．何謂Rf值?影響Rf值的主要因素是什么?3．怎樣制備擴(kuò)展劑?4．層析缸中平衡溶劑的作用是什么？編輯課件

實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)（一）

----蛋白質(zhì)及氨基酸的呈色反應(yīng)一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.了解構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位及主要連接方式2.了解蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)原理3.學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法。編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】

蛋白質(zhì)溶液（新鮮雞蛋清加水配制的溶液）；大豆提取液；頭發(fā)；指甲；考馬斯亮藍(lán)；尿素；氫氧化鈉；硫酸銅；氨基酸；茚三酮；

編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】（一）雙縮脲反應(yīng)尿素加熱至l80℃左右，生成雙縮脲并放出一分子氨。雙縮脲在堿性環(huán)境中能與Cu2+結(jié)合生成紫紅色化合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中有肽鍵，其結(jié)構(gòu)與雙縮脲相似，也能發(fā)生此反應(yīng)?？捎糜诘鞍踪|(zhì)的定性或定量測(cè)定。編輯課件編輯課件編輯課件雙縮脲反應(yīng)不僅為含有兩個(gè)以上肽鍵的物質(zhì)所有。含有一個(gè)肽鍵和一個(gè)——CS——NH2，——CH2—NH2，——CRH—NH2，——CH2——NH2——CHNH2——CH2OH或——CHOHCH2NH2等基團(tuán)的物質(zhì)以及乙二酰二胺等物質(zhì)也有此反應(yīng)。NH3也干擾此反應(yīng)，因?yàn)镹H3與Cu2+可生成暗藍(lán)色的絡(luò)離子Cu(NH3)42+。因此，一切蛋白質(zhì)或二肽以上的多肽都有雙縮脲反應(yīng)，但有雙縮脲反應(yīng)的物質(zhì)不—定都是蛋白質(zhì)或多肽。編輯課件(二)茚三酮反應(yīng)

除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生黃色物質(zhì)外，所有a-氨基酸及一切蛋白質(zhì)都能和茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)。

β-丙氨酸、氨和許多一級(jí)胺都呈正反應(yīng)。尿素、馬尿酸、二酮吡嗪和肽鍵上的亞氨基不呈現(xiàn)此反應(yīng)。因此，雖然蛋白質(zhì)和氨基酸均有茚三酮反應(yīng)，但能與茚三酮呈陽(yáng)性反應(yīng)的不一定就是蛋白質(zhì)或氨基酸。在定性、定量測(cè)定中，應(yīng)嚴(yán)防干擾物存在。該反應(yīng)十分靈敏，1：1500000濃度的氨基酸水溶液即能給出反應(yīng)，是一種常用的氨基酸定量測(cè)定方法。編輯課件茚三酮反應(yīng)分為兩步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、、NH3和醛，水合茚三酮被還原成還原型茚三酮；第二步是所形成的還原型茚三酮同另一個(gè)水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質(zhì)。編輯課件(三)黃色反應(yīng)

含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黃色物質(zhì)，該化合物在堿性溶液中進(jìn)一步形成深多數(shù)蛋白質(zhì)分子含有帶苯環(huán)的氨基酸，所以有黃色反應(yīng)，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量濃硫酸才有黃色反應(yīng)。編輯課件(四)考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)考馬斯亮藍(lán)G250具有紅色和藍(lán)色兩種色調(diào)。在酸性溶液中，其以游離態(tài)存在呈棕紅色；當(dāng)它與蛋白質(zhì)通過(guò)疏水作用結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色。它染色靈敏度高，比氨基黑高3倍。反應(yīng)速度快，約在2分鐘左右時(shí)間達(dá)到平衡，在室溫一小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。在0.01~1.0mg蛋白質(zhì)范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與A595nm值成正比。所以常用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。編輯課件四、【主要內(nèi)容】?jī)?nèi)容：蛋白質(zhì)和氨基酸與顯色劑反應(yīng)呈現(xiàn)一定的顏色反應(yīng)步驟：雙縮尿反應(yīng)；茚三酮反應(yīng)；黃色反應(yīng)；考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)編輯課件五、【作業(yè)】通過(guò)本實(shí)驗(yàn)?zāi)阏莆樟藥追N鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法?它們的原理?

實(shí)驗(yàn)總結(jié)編輯課件

實(shí)驗(yàn)三

蛋白質(zhì)性質(zhì)實(shí)驗(yàn)（二）

蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定和沉淀反應(yīng)一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)2.學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的一種方法3.加深對(duì)蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識(shí)4.了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及實(shí)用意義5.了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系6.掌握臨床常規(guī)定性檢驗(yàn)蛋白的方法編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】材料：水浴鍋；溫度計(jì)；雞蛋；乳缽藥品：醋酸；酪蛋白；醋酸納；硝酸銀；硫酸銨；氯化鋇；甲基紅；碳酸鈉；氫氧化鈉；鹽酸；黃基水楊酸編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】

（一）、蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液的酸堿度影響。當(dāng)溶液的pH達(dá)到一定數(shù)值時(shí)，蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目相等，在電場(chǎng)中，蛋白質(zhì)既不向陰極移動(dòng)，也不向陽(yáng)極移動(dòng)，此時(shí)溶液的pH值稱為此種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。不同蛋白質(zhì)各有其特異的等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化，可利用此種性質(zhì)的變化測(cè)定各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。最常用的方法是測(cè)其溶解度最低時(shí)的溶液pH值。編輯課件蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：編輯課件（二）、在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蚴ル姾珊兔撍恋?。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。

(1)可逆的沉淀反應(yīng)此時(shí)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來(lái)的溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇(或丙酮)短時(shí)間作用于蛋白質(zhì)。提純蛋白質(zhì)時(shí)，常利用此類反應(yīng)。編輯課件(2)不可逆沉淀反應(yīng)此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來(lái)溶劑中。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固，蛋白質(zhì)與重金屬離子或某些有機(jī)酸的反應(yīng)都屬于此類。蛋白質(zhì)變性后，有時(shí)由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。編輯課件（三）、正常人尿中只含微量蛋白質(zhì)，不能用臨床常規(guī)方法測(cè)定出來(lái)。用臨床常規(guī)方法能檢查出蛋白質(zhì)的尿稱為蛋白尿?；寄I臟病的人(如患腎小球腎炎、腎盂腎炎)往往有蛋白尿，因而尿中蛋白質(zhì)的檢查在臨床上具有重要的診斷意義。編輯課件四、【主要內(nèi)容】1.蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定2.蛋白質(zhì)的沉淀與變性3.尿蛋白定性檢驗(yàn)編輯課件五、【作業(yè)】何謂蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和沉淀反應(yīng)？有何實(shí)用意義？實(shí)驗(yàn)總結(jié)編輯課件

實(shí)驗(yàn)四血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

學(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳的操作，了解電泳技術(shù)的一般原理編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】材料：醋酸纖維薄膜；電泳儀；培養(yǎng)皿；玻璃板；白磁反應(yīng)板；鑷子；點(diǎn)樣器藥品：巴比妥緩沖液；氨基黑；醋酸；甲醇；乙醇

編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】

醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。醋酸纖維薄膜由二乙酸纖維素制成，它具有均一的泡沫樣的結(jié)構(gòu)，厚度僅120um，有強(qiáng)滲透性，對(duì)分子移動(dòng)無(wú)阻力,作為區(qū)帶電泳的支持物進(jìn)行蛋白電泳有簡(jiǎn)便、快速、樣品用量少，應(yīng)用范圍廣，分離清晰，沒(méi)有吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白，糖蛋白和同工酶的分離及用在免疫電泳中。編輯課件四、【主要內(nèi)容】1．浸泡用鑷子取醋酸纖維薄膜1張(識(shí)別出光澤面與無(wú)光澤面，并在角上用筆做上記號(hào))放在緩沖液中浸泡20分鐘。

2．點(diǎn)樣把膜條從緩沖液中取出，夾在兩層粗濾紙內(nèi)吸干多余的液體，然后平鋪在玻璃板上(無(wú)光澤面朝上)，將點(diǎn)樣器先在放置在白磁反應(yīng)板上的血清中沾一下，再在膜條一端2~3cm處輕輕地水平地落下并隨即提起，這樣即在膜條上點(diǎn)上了細(xì)條狀的血清樣品。編輯課件編輯課件3．電泳在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個(gè)電極槽內(nèi)的液面等高，將膜條平懸于電泳槽支架的濾紙橋上(先剪裁尺寸合適的濾紙條，取雙層濾紙條附著在電泳槽的支架上，使它的一端與支架的前沿對(duì)齊，而另—端浸入電極槽的緩沖液內(nèi)。用緩沖液將濾紙全部潤(rùn)濕并驅(qū)除氣泡，使濾紙緊貼在支架上，即為濾紙橋(它是聯(lián)系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的“橋梁”)。膜條上點(diǎn)樣的一端靠近負(fù)極。蓋嚴(yán)電泳室。通電。調(diào)節(jié)電壓至160v，電流強(qiáng)度0．4~0.7mA／cm(毫安／厘米)膜寬，電泳時(shí)間約為25分鐘。編輯課件4．染色電泳完畢后將膜條取下并放在染色液中浸泡10分鐘。5．漂洗將膜條從染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗數(shù)次至無(wú)蛋白區(qū)底色脫凈為止，可得色帶清晰的電泳圖譜。編輯課件編輯課件五、【作業(yè)】1．用醋酸纖維薄膜做電泳支持物有什么優(yōu)點(diǎn)?2．電泳圖譜清晰的關(guān)鍵是什么？如何正確操作?編輯課件

實(shí)驗(yàn)五酪蛋白的制備

一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的原理和方法

編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】離心機(jī)；酸度計(jì)；牛奶；乙醇；乙醚；醋酸-醋酸鈉；編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】

蛋白質(zhì)通過(guò)分離純化得到純的或比較純的蛋白質(zhì)是研究蛋白質(zhì)最基本的起點(diǎn)。必須熟悉并掌握蛋白質(zhì)特有的理化性質(zhì)，確定合適的分離制備方案。這包括生物材料的選擇和處理，目的蛋白質(zhì)的提取、分離、純化和鑒定。編輯課件

蛋白質(zhì)純化分離的基本目標(biāo)是得到足夠量的具有天然生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)，為此，在整個(gè)分離純化過(guò)程中必須避免蛋白質(zhì)的變性和降解。抽提蛋白質(zhì)的第一步是將組織粉碎、破壞細(xì)胞，一般用低濃度緩沖溶液提取。

編輯課件四、【主要內(nèi)容】

取新鮮牛乳，用酸堿調(diào)PH到酪蛋白的等電點(diǎn)沉淀析出酪蛋白，然后洗滌，醇醚吸水至干燥得粉末稱重，計(jì)算提取率。步驟：保溫→調(diào)PH→沉淀→離心→洗滌→干燥→稱量編輯課件五、【作業(yè)】結(jié)果與分析編輯課件

實(shí)驗(yàn)六甲醛法測(cè)定氨基氮

一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹砍醪秸莆占兹┑味ǚy(cè)定氨基酸含量的原理和操作要點(diǎn)編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】器材1．25mL錐形瓶2．3mL微量滴定管3．吸管試劑1．0.1mo1/L標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸溶液300mL

準(zhǔn)確稱取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。2．0.1mo1/L標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液500mL3．酚酞指示劑20mL0.5％酚酞的50％乙醇溶液4．中性甲醛溶液

編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】

氨基酸是兩性電解質(zhì)，在水溶液中有如下平衡：編輯課件是弱酸，完全解離時(shí)PH為11~12或更高，若用堿滴定一NH3、所釋放的H+來(lái)測(cè)量氨基酸，一般指示劑變色域小于10，很難準(zhǔn)確指示終點(diǎn)。常溫下，甲醛能迅速與氨基酸的氨基結(jié)合,生成羥甲基化合物，使上述平衡右移，促使一NH3釋放H+，使溶液的酸度增加，滴定終點(diǎn)移至酚酞的變色域內(nèi)(pH9．0左右)。因此，可用酚酞作指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定。編輯課件編輯課件

如樣品為一種已知的氨基酸，從甲醛滴定的結(jié)果可算出氨基氮的含量。如樣品是多種氨基酸的混合物，如蛋白水解液，則滴定結(jié)果不能作為氨基酸的定量依據(jù)。但此法簡(jiǎn)便快速，常用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度。隨水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加時(shí)，表示水解作用已完全。編輯課件四、【主要內(nèi)容】1．取3個(gè)25mL的錐形瓶，編號(hào)。向第1、2號(hào)瓶?jī)?nèi)各加入2mL0．1mo1／L的標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸溶液和5mL水，混勻。向3號(hào)瓶?jī)?nèi)加入7mL水。然后向3個(gè)瓶中各加入5滴酚酞指示劑，混勻后各加2mL甲醛溶液，再混勻，分別用0.1mo1/L標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定至溶液顯微紅色。

重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)2次，記錄每次每瓶消耗標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的mL數(shù)。取平均值，計(jì)算甘氨酸氨基氮的回收率。

編輯課件2．取未知濃度的甘氨酸溶液2mL，依上述方法進(jìn)行測(cè)定，平行做幾份，取平均值。計(jì)算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg數(shù)。式中：V未為滴定待測(cè)液耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均mL數(shù)。V對(duì)為滴定對(duì)照液（3號(hào)瓶）耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均mL數(shù)。mo1／LNaOH為標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的真實(shí)摩爾濃度。編輯課件五、【作業(yè)】選用酚酞指示劑，為什么滴定的是氨基？結(jié)果與分析編輯課件

實(shí)驗(yàn)七酵母核糖核酸的分離及組分鑒定

一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

了解核酸的組分，并掌握鑒定核酸的方法編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】材料：恒溫水浴鍋；抽濾瓶；離心機(jī)；乳缽；酵母藥品：氫氧化鈉；乙醇；鹽酸；硫酸；硝酸鹽；苔黑酚；鉬酸銨；抗壞血酸；編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】酵母核酸中RNA含量較多。RNA可溶于堿性溶液，在堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸各組分。加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測(cè)出上述組分的存在。利用物質(zhì)的沉降系統(tǒng)、質(zhì)量、浮力等不同因素，應(yīng)用強(qiáng)大的離心力使物質(zhì)分離的方法稱離心法。編輯課件四、【主要內(nèi)容】

將15g酵母懸浮于90mL0.04mol/L氫氧化鈉溶液中，并在乳缽中研磨均勻。將懸浮液轉(zhuǎn)移至150毫升錐形瓶中。在沸水浴上加熱30分鐘后，冷卻。離心(3000r／min)15分鐘，將上清液緩緩傾入30mL酸性乙醇溶液中。注意要一邊攪拌一邊緩緩傾入。待核糖核酸沉淀完全后，離心(3000r／min)3分鐘。棄去清液。用95％乙醇洗滌沉淀兩次，乙醚洗滌沉淀一次后，再用乙醚將沉淀轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾。沉淀可在空氣中干燥。編輯課件取200mg提取的核酸，加入1.5mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加熱10分鐘制成水解液并進(jìn)行組分的鑒定。

1．嘌呤堿取水解液1mL加入過(guò)量濃氨水，然后加入約1mL0.1mol/L硝酸銀溶液，觀察有無(wú)嘌呤堿的銀化合物沉淀。編輯課件2．核糖取1支試管加入水解液1mL、三氯化鐵濃鹽酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液0．2mL。放沸水浴中10分鐘。注意溶液是否變成綠色，說(shuō)明核糖的存在。3．磷酸取1支試管，加入水解液1mL和定磷試劑1mL。在水浴中加熱，觀察溶液是否變成藍(lán)色，說(shuō)明磷酸是否存在。編輯課件五、【作業(yè)】1．如何得到高產(chǎn)量RNA的粗制品？2．本實(shí)驗(yàn)RNA組分是什么？怎樣驗(yàn)證的？編輯課件

實(shí)驗(yàn)八酶的特性

一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

加深對(duì)酶的性質(zhì)的認(rèn)識(shí)編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】恒溫水浴鍋；酵母；唾液；碘液；氯化鈉；淀粉；檸檬酸；氯化鈉；硫酸銅；硫酸鈉；蔗糖；檸檬酸鈉編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】1、淀粉受唾液淀粉酶的作用水解成麥芽糖和少量葡萄糖。通常以測(cè)定淀粉水解的程度（底物減少）或麥芽糖生成的數(shù)量（產(chǎn)物增加）來(lái)衡量淀粉酶的活性。麥芽糖和葡萄糖都具有還原性，能使班氏試劑中的二價(jià)銅離子（Cu2+）還原成一價(jià)銅離子（Cu+）生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。而蔗糖不能被水解也不具有還原性，故不能被班氏試劑還原。編輯課件2、酶的活性受溫度的雙重影響。低溫時(shí)酶活性表現(xiàn)較低，在一定范圍內(nèi)，酶活性隨溫度上升而增高。通常每升高10℃，反應(yīng)速度增加一倍左右；另一方面，溫度越高使酶蛋白變性越快，致使酶活性隨溫度上升而降低，以致完全喪失活性。當(dāng)酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度，稱為酶作用的最適溫度。編輯課件本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶對(duì)淀粉的消化作用為例，觀察0℃、37℃和100℃三種溫度對(duì)酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)中各管除溫度外，其它反應(yīng)條件皆相同。唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解成各種不同大小的糊精及麥芽糖。它們遇碘呈現(xiàn)不同的顏色反應(yīng)，故可利用碘反應(yīng)的顏色對(duì)比來(lái)判定不同溫度下酶活性的大小。編輯課件3、酶的活性受環(huán)境pH的影響極為顯著。因pH影響酶蛋白和底物的解離狀態(tài)，從而明顯改變酶與底物的結(jié)合和催化作用。每一種酶在一定的條件下都有它發(fā)揮作用的最適pH，此時(shí)酶的活性最大。當(dāng)其它條件相同時(shí)，離最適pH越近，其活性越大，即所催化的反應(yīng)速度越快。本實(shí)驗(yàn)利用唾液淀粉酶對(duì)淀粉的水解作用，在其它條件相同時(shí)，對(duì)比觀察pH變化對(duì)酶活性的影響，用碘反應(yīng)判斷結(jié)果。編輯課件四、【主要內(nèi)容】1.溫度對(duì)酶活力的影響2.PH對(duì)酶活力的影響3.激活劑及抑制劑對(duì)酶活力的影響4.酶的專一性編輯課件五、【作業(yè)】1．什么是酶的特異性？本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為什么能說(shuō)明酶具有這種性質(zhì)？2．何為酶的絕對(duì)、相對(duì)專一性？通過(guò)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明蔗糖酶具有何種專一性？3．說(shuō)明溫度對(duì)酶活性影響的本質(zhì)。請(qǐng)舉出應(yīng)用溫度對(duì)酶影響的實(shí)例。利用最適溫度、零下及沸水浴溫度各有何實(shí)踐意義？4．酶促反應(yīng)的最適溫度是酶的特征物理常數(shù)嗎？它與哪些因素有關(guān)？編輯課件5．實(shí)驗(yàn)二中為什么控制2號(hào)管碘反應(yīng)到陰性時(shí)向各管加碘液？實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中1號(hào)管的作用是什么？有無(wú)必要？6．聯(lián)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果及所學(xué)理論，說(shuō)明pH對(duì)酶活性的影響有什么規(guī)律和實(shí)際意義？7．通過(guò)本次酶學(xué)實(shí)驗(yàn)，你對(duì)下面問(wèn)題如何認(rèn)識(shí)？⑴酶作為生物催化劑具有哪些特征？⑵進(jìn)行酶學(xué)實(shí)驗(yàn)必須注意控制哪些條件？為什么？編輯課件

實(shí)驗(yàn)九發(fā)酵過(guò)程中無(wú)機(jī)磷的利用

一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆斩追ǖ脑砗筒僮骷夹g(shù)了解發(fā)酵過(guò)程中無(wú)機(jī)磷的利用編輯課件二、【實(shí)驗(yàn)儀器與材料】

分光光度計(jì)；恒溫水浴鍋；乳缽；新鮮酵母；磷酸鹽；三綠乙酸；鉬酸銨；1，2，4，-氨基萘酚磺酸鈉編輯課件三、【實(shí)驗(yàn)原理】（一）比色和分光分析法原理光線的本質(zhì)是電磁波的一種，有與電磁波和X線類同的性質(zhì)。光線有不同的波長(zhǎng)，肉眼可見(jiàn)彩色光稱為可見(jiàn)光，波長(zhǎng)范圍在400~750nm，小于400nm的光線稱為紫外線，大于750nm的光線稱為紅外線，如表所示。編輯課件分光光度法采用適當(dāng)?shù)墓庠础⒗忡R和適當(dāng)?shù)墓庠唇邮芷?。可使介質(zhì)濃度測(cè)定范圍不僅僅局限于可見(jiàn)光，尚可擴(kuò)大到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。經(jīng)單色器（棱鏡）得到的光源雖說(shuō)不是純的單色光，但波長(zhǎng)范圍更狹窄，也更符合Lambert-Beer定律，使靈敏度大為提高。編輯課件四、【主要內(nèi)容】?jī)?nèi)容：酵母能使蔗糖和葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇和二氧化碳，但發(fā)酵過(guò)程中需經(jīng)磷酸化作用生成磷酸酯，無(wú)機(jī)磷與鉬酸形成的磷鉬酸絡(luò)合物能被氨基萘酚磺酸鈉還原成鉬藍(lán)，因此，測(cè)定發(fā)酵前后反應(yīng)混合物中無(wú)機(jī)磷的含量，來(lái)觀察發(fā)酵過(guò)程中無(wú)機(jī)磷的消耗。步驟：1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制