臨床基因擴(kuò)增檢測實驗室室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序

臨床基因擴(kuò)增檢測實驗室室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序1 目的隨時了解并控制實驗室檢測的精密度變化。2 適用范圍核酸擴(kuò)增熒光定量檢測實驗室，其中包括使用RocheLightCycler定量PCR儀的實驗室。3 操作人XXX4 操作步驟4.1 自制血清質(zhì)量控制品a）自制的質(zhì)量控制血清來自臨床收集的已知HBV陽性血清，每收集到一份凍存于－20℃。b）預(yù)定室內(nèi)質(zhì)控品靶值為1×106copies/ml,總量20ml，計算各份血清的混合量。c）室溫下復(fù)融質(zhì)控血清，按比例混合血清，充分混勻。d）用0.5ml離心管盛裝質(zhì)控血清，每管100μl，分裝100管，剩余血清根據(jù)廢棄物處理及生物防護(hù)操作程序處理。e）每10管質(zhì)控品裝一小袋，可分成10小袋。1小袋置于－20℃冰箱，其余9小袋置于－80℃超低溫冰箱，用完1小袋，就從－80℃轉(zhuǎn)移1小袋質(zhì)控品到－20℃冰箱備用。4.2 測定及計算RCV取準(zhǔn)備用于下一階段室內(nèi)常規(guī)室內(nèi)質(zhì)量控制的血清，每天隨病人標(biāo)本測定一管，20天后計算各項目的測定結(jié)果的X、s和CV。此處的CV即RCV。RCV的計算公式如下：其中X為RCV測定中所得20份結(jié)果的均值?！票硎究偤?。n表示結(jié)果的份數(shù)（或天數(shù)）。其中各符號所代表的含義與X計算公式相同。n-1為自由度。S計算也可以使用下面的公式其中∑X2為各檢測結(jié)果平方值之總和。(∑X)2為各檢測結(jié)果之和的平方。4.3 繪制RCV圖a）計算X+2s、X－2s、X+3s、X－3s并在縱坐標(biāo)上標(biāo)出的X、X+2s、X－2s、X+3s、X－3s的位置，并將其具體數(shù)值標(biāo)在左側(cè)標(biāo)尺上。b）用紅筆畫出X±2s線，用藍(lán)筆畫出X±3s線，即成為一張“空圖”。其中每一小格代表實際檢測數(shù)值的1/10。還應(yīng)填齊圖紙上方的各項，如：試驗項目，質(zhì)控血清來源及批號，起止日期，主要儀器等。還應(yīng)填上RCV中測定中所得的X、s、CV。測定過程中的特殊情況，應(yīng)在備注欄內(nèi)記錄。c）在圖紙下方“日期”、“測定值”、和“操作者”欄內(nèi)按原始記錄填入相應(yīng)內(nèi)容，邊填寫邊核對。注意數(shù)據(jù)順序應(yīng)嚴(yán)格按實際操作情況，不得顛倒。日期一欄內(nèi)，應(yīng)填寫實際日期。未做測定的節(jié)假日，星期天在圖上留出空格似更為合理，因為這樣可以真實反應(yīng)情況，便于分析誤差原因。d）畫出每個檢測值所對應(yīng)的圖點。每個圖點在圖上的橫坐標(biāo)為其日期（或序號），而縱坐標(biāo)（即與相距的小格數(shù)目）可按下式計算。每個點的縱坐標(biāo)＝ 該點對應(yīng)的檢測值－靶值(X) 圖中每個小格所代表的檢測數(shù)值e）計算結(jié)果為正數(shù)，則點在X軸上方，反之，則在X軸下方。各點畫在圖上后，用直線將各點順序連接，以便于觀察。4.4 室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法4.4.1 描點a）圖中X線為靶線，X±2s為警告線，X±3s為失控線。對于同一批號的質(zhì)控血清不論使用幾個月，其空圖均不變化。只要將圖紙上方“起止日期”項填入每個月的實際起止日期即可。b）每天將該批號質(zhì)控血清按有關(guān)規(guī)定程序復(fù)融隨同病人的標(biāo)本同時檢測。將日期、檢測結(jié)果和操作者如實記錄在圖下方的相應(yīng)位置，并按前面的方法畫出圖上的對應(yīng)點，用直線將該點與前一天的點連接。c）月底計算當(dāng)月全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的X、s和CV，并進(jìn)行圖形分析和小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案。4.4.2 圖形分析a）如果在X±3s線以外，則為失控，應(yīng)立即報告有關(guān)負(fù)責(zé)人，迅速查找原因。必要時復(fù)測標(biāo)本，然后方可發(fā)出報告，并將失控情況、查找過程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄。b）如果在X±2s線以外，或出現(xiàn)連續(xù)6點以上在一側(cè)等規(guī)律變化，均應(yīng)及時向有關(guān)負(fù)責(zé)人反映，并積極查找原因。但當(dāng)天的檢驗結(jié)果一般可以發(fā)出。4.4.3 通過觀察圖形的規(guī)律性變化進(jìn)行誤差分析，消除誤差來源a）曲線漂移：提示有系統(tǒng)誤差，準(zhǔn)確度發(fā)生了一致性的向上或向下改變。這種變化往往是由于一個新的情況引起的。如更換不同批號試劑，啟用新批號的質(zhì)控血清、操作人員的變換等。在找原因時，應(yīng)重點注意“漂移”前后發(fā)生了那些變動的因素。b）趨勢性變化：向下或向上的趨勢性變化表明檢測的準(zhǔn)確度發(fā)生了漸漸地變化。這種變化往往是由于一個逐漸改變的因素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價的降低等。c）連續(xù)多點分布在靶值一側(cè)：目前，一般認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測結(jié)果連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)，則應(yīng)迅速查找原因，爭取盡快使之回復(fù)圍繞在靶值隨機分布的狀態(tài)。因為按照統(tǒng)計學(xué)原理，由純隨機誤差造成的這種情況的可能性很小。連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)可能性小于1.5％。因此凡出現(xiàn)連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)者均有可能存在非隨機誤差因素。如結(jié)果與靶值偏離并不太大，不會給臨床使用帶來太大影響時，一般化驗報告可以照常填發(fā)。d）其他規(guī)律變化：（周期性等）4.4.4 通過圖形的資料對比進(jìn)行誤差分析，消除誤差來源a）每個月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的X和s與該批測定的X和s進(jìn)行比較。如果X發(fā)生了變化，說明準(zhǔn)確度發(fā)生了變化提示有非隨機誤差存在。如果當(dāng)月s不同側(cè)表明檢測的精密度發(fā)生了變化。b）將使用同一批號質(zhì)控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐在月上升，應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，則主要提示常規(guī)工作的精密度下降，應(yīng)重點從操作、管理上找原因。c）在數(shù)年中，把每個月的CV和失控規(guī)律列成表，可用作檢測質(zhì)量的歷史性回顧及趨勢分析。5．本SOP的變動程序本SOP的變