各種無機培養(yǎng)基配方

本文格式為Word版，下載可任意編輯——各種無機培養(yǎng)基配方1、畢赤酵母表達硒代重組人血清白蛋白：

基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基BSM:硫酸鈣0.93g/L,硫酸鉀18.2g/L,七水硫酸鎂14.9g/L,檸檬酸三鈉1.47g/L,微量元素2mL/L,甘油40g/L,硫酸銨10g/L,磷酸鉀緩沖液(pH6.0)0.1mol/L。

微量元素主要成分:五水硫酸銅6.0g/L,碘化鉀0.08g/L,一水硫酸錳3.0g/L,二水鉬酸鈉0.2g/L,硼酸0.02g/L,硫酸鈣0.5g/L,氯化鈷0.5g/L,氯化鋅20.0g/L,七水硫酸亞鐵65.0g/L,硫酸5.0mL/L,生物素0.2g/L。試劑均為國產(chǎn)生化試劑純或分析純。

發(fā)酵將50μL種子液接種于5mL的YPG培養(yǎng)基中,30℃振蕩培養(yǎng)18222h,轉(zhuǎn)接到裝有100mL基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基的500mL帶擋板的搖瓶中。轉(zhuǎn)速180r/min,溫度30℃培養(yǎng),每8小時用濃氨水調(diào)理發(fā)酵液pH值至610。約48h時,取樣檢測甘油濃度,待甘油耗盡后參與甲醇開始誘導。誘導期培養(yǎng)溫度為28℃,pH值調(diào)理至710[526],每12h補加體積分數(shù)015%的純甲醇和10mg/L的亞硒酸鈉,對照發(fā)酵液不添加亞硒酸鈉。誘導96h后中止發(fā)酵。

2、重組人血清白蛋白在畢赤酵母表達中的降解控制

PBM：甘油40g/L，磷酸（85%）26.7g/L，二水硫酸鈣0.6g/L，硫酸鉀9.5g/L，七水硫酸鎂7.8g/L，氫氧化鉀2.6g/L，PTM12ml/L，生物素0.00004g/L，硫胺0.00019g/L，濃氨水調(diào)理為所需pH，試劑均為國產(chǎn)生化試劑純或分析純。PTM1：Invitrogen公司提供的標準配方。

發(fā)酵：生長期溫度為30℃，pH用濃氨水調(diào)理，培養(yǎng)期間每4h調(diào)理一次維持原pH值，甘油耗盡后甲醇誘導，誘導過程中每12h補加體積分數(shù)0.5的純甲醇，搖床轉(zhuǎn)速180r/min，搖瓶為500ml的底部有擋板的三角瓶，裝液量50mml。

3、High-LevelExpressionofRecombinantHumanSerumAlbuminfromtheMethylotrophicYeastPichiapastoriswithMinimalProteaseProductionandActivation

BasalBatchMedium

ComponentGlycerol甘油(NH4)2SO4硫酸銨KH2PO4磷酸二氫鉀KCl氯化鉀NaCl氯化鈉MgSO4.7H2O七水硫酸鎂ZnSO4.7H2O七水硫酸鋅CuS04.5H2O五水硫酸銅FeCl3.6H2O六水氯化鐵CaCl2.2H2O二水氯化鈣Biotin生物素Concentration（g/L）50.02.020.04.00.48.00.10.020.10.40.001VitaminBlVB1VitaminB6VB6Na-Pantothenate泛酸鈉Inositol肌醇0.10.010.10.5PBMmedium

ComponentsGlycerol甘油H3PO4(85%)磷酸CaSO4.2H2O二水硫酸鈣K2SO4硫酸鉀MgSO4.7H2O七水硫酸鎂KOH氫氧化鉀PTM1w/obiotinBiotin生物素Thiamin硫胺（VB1）Concentration(g/L)50.023.70.69.57.82.60.930.000040.00019發(fā)酵：3L發(fā)酵罐裝1LBasalBatchMedium或PBMmedium，30℃，調(diào)理轉(zhuǎn)速保持溶氧大于10%，甘油耗盡后流加PFM（每升含有2mlPTM1-不含生物素的甲醇），手動控制甲醇濃度低于1%（w/w），28%的氨水調(diào)理pH為5.85。

4、提高重組畢赤酵母表達hIFNβ-HSA的碳源控制策略

發(fā)酵培養(yǎng)基(BSM,g/L)：Glycerol20.0，(NH4)2SO45.0，KH2PO442.9，CaSO4

?2H2O1.0，K2SO414.3,MgSO4?7H2O11.7及1mL/LPTM4微量元素溶液.

PTM4微量元素溶液(g/L):CuSO4?5H2O2.0，NaI0.08，MnSO4?H2O3.0，

Na2MoO4?2H2O0.2，H3BO30.02，CaSO4?2H2O0.5，CoCl20.5，ZnCl27.0，F(xiàn)eSO4?7H2O22.0，生物素0.2，H2SO41.0mL/L.

誘導培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO45.0，KH2PO442.9，CaSO4?2H2O1.0，K2SO414.3，

MgSO4?7H2O