動物生理學實驗課件

動物生理學實驗

動物醫(yī)學系實驗一

動物生理學實驗常用儀器

實驗基本操作技術1動物生理學實驗的地位共27學時，屬專業(yè)基礎課成績：報告60%，考試30%，考勤10%2動物生理學實驗的要求實驗前、實驗中、實驗后4常用手術器械（1）刀：姿勢有指壓式、執(zhí)筆式及反挑式等。（2）剪：外科剪、眼科剪、毛剪、普通剪等。（3）鑷：眼科鑷、外科鑷。（4）鉗：止血鉗、持針鉗、創(chuàng)巾鉗。（5）其他：探針、玻璃分針、蛙板、鋅銅弓、蛙心夾、動脈導管、氣管插管、肌槽等。5動物的麻醉（1）麻醉前準備：P21①藥物選擇：根據(jù)實驗內容合理選用麻醉藥。33%乙醇生理溶液：5～7mL/kg，耳緣靜脈注射。速眠新：0.1～0.2mL/kg，皮下或肌肉注射。②麻醉前核對藥名，檢查藥品有無變質。③嘔吐中樞發(fā)達的動物（狗、貓等）在手術前應禁食12h，以減輕嘔吐反應。④需在全麻下進行手術的動物，可適當給予麻醉輔助藥，如皮下注射嗎啡鎮(zhèn)痛，注射阿托品減少呼吸道分泌物產(chǎn)生等。（2）麻醉效果觀察①呼吸：呼吸加快且不規(guī)則，表示麻醉過淺；呼吸規(guī)則且平穩(wěn)，已達麻醉深度；呼吸變慢，且以腹式呼吸為主，表示麻醉過深，動物有生命危險。②反射：角膜反射靈敏，麻醉過淺；角膜反射遲鈍，麻醉程度適宜；角膜反射消失，伴瞳孔散大，則麻醉過深。③肌張力：肌張力亢進，麻醉過淺；全身肌肉松弛，麻醉合適。④皮膚夾捏：夾捏動物皮膚，觀察皮膚的反應。6常見手術方法（家兔）（1）麻醉（靜脈、皮下、肌肉）（2）保定（3）除去被毛、切口（4）頸部神經(jīng)、血管分離（5）氣管插管（6）輸尿管、膀胱分離7器械打結（1）活結：用于家兔保定。（2）死結：用于血管、神經(jīng)結扎。要領：鉗壓線，線壓鉗。實驗二計算機生物信號采集處理系統(tǒng)

1系統(tǒng)組成與工作原理由硬件和軟件構成。硬件主要完成對各種生物電信號（如心電、肌電、腦電）與非電信號（如血壓、張力）進行調理、放大，并對信號進行模/數(shù)（A/D）轉換，使之進入計算機。軟件主要對已經(jīng)數(shù)字化了的生物信號進行顯示、記錄、存儲、處理及打印輸出，同時對系統(tǒng)各部分進行控制，與操作者進行人機對話。3使用方法3.1設置：標準配置，恢復出廠時的配置。3.2新建：選擇實驗項目，填寫實驗信息，進入實驗窗口，開始實驗。3.3采樣：記錄實驗數(shù)據(jù)3.4控制面板參數(shù)調節(jié)：通道功能調節(jié)、刺激參數(shù)調節(jié)3.5存儲：文件保存位置：F：/文件名：12動醫(yī)3-呼吸（左2）3.6編輯：打開原文件→選擇→復制→“工具”下的“畫圖”→處理文件→復制圖片→存盤到F：/。實驗三影響血液凝固的因素紅細胞脆性的測定血紅蛋白的測定影響血液凝固的因素1實驗目的以凝血時間為指標，了解影響凝血的因素，加深對生理止血過程的理解。2實驗原理血液凝固是一個酶解激活過程，有多種凝血因子參與。根據(jù)凝血過程起動時凝血因子來源不同，可將凝血分為內源性激活途徑和外源性激活途徑。5實驗結果表1血液凝固及其影響因素試管號實驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟4滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7肺組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴6注意事項6.1采血過程要盡量快，以減少計時誤差，對比實驗的采血時間要緊接著進行。6.2每支試管口徑大小及采血量要相對一致，不可相差太大。6.3判斷凝血的標準要一致，一般以傾斜試管達45°時試管內血液不見流動為準。紅細胞脆性的測定1實驗目的學習測定紅細胞滲透脆性的方法，理解細胞外液滲透張力對維持細胞正常形態(tài)與功能的重要性。2實驗原理正常紅細胞懸浮于等滲的血漿中，著置于高滲溶液內，則紅細胞會因失水而皺縮；反之，置于低滲溶液內，則水進入紅細胞，使紅細胞膨脹。如環(huán)境滲透壓繼續(xù)下降，紅細胞會因繼續(xù)膨脹而破裂，釋放血紅蛋白，稱之為溶血。紅細胞膜對低滲溶液有一定的抵抗力，這一特征稱為紅細胞的滲透脆性。4.2制備抗凝血：檸檬酸鈉作抗凝劑。4.3加抗凝血：每只試管加1滴。4.4觀察結果①未溶血試管：液體下層有大量紅細胞下沉，上層為無色透明，表明無紅細胞破裂。②不完全溶血試管：液體下層有紅細胞下沉，上層出現(xiàn)透明淡紅色，表明部分紅細胞已經(jīng)破裂，稱為不完全溶血。②完全溶血試管：液體完全變成透明紅色，管底無紅細胞下沉。5實驗結果表2家兔Hb含量及RBC脆性測定分組Hb測定（g/L）RBC脆性測定（NaCl%）最小抵抗力最大抵抗力實驗組對照組80～1500.60～0.550.40～0.356注意事項6.1試管要干凈；6.2配液要準確；6.3加血量要一致；6.4輕輕混勻，減少溶血機會；6.5靜置時間不少于30min。3實驗對象：動物種類不限4方法與步驟：使用沙里氏血紅蛋白計測定。

比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成粽色的高鐵血紅蛋白，然后和標準比色板進行比色。（1）血紅蛋白計由標準比色箱和測定管組成。測定管兩側有刻度，一側為血紅蛋白量的絕對值，以每100mL血液中所含血紅蛋白的克數(shù)表示；另一側為相對值，以％（即相當于正常平均值的百分數(shù)）來表示。（2）測定方法①血紅蛋白吸管清潔：自來水→蒸餾水→無水乙醇。②將0.1N鹽酸加入測定管中至刻度“2”處。③用血紅蛋白吸管吸取20μL血液，將血液吹入鹽酸中，并利用上層鹽酸將吸管反復洗滌多次（避免起泡）。④酸化10min后，逐滴加入蒸餾水，邊加邊混勻并與標準比色板比較，至二者顏色相同為止。⑤讀數(shù)即為每100mL血液中血紅蛋白的克數(shù)。3實驗結果3.1家兔Hb含量及RBC脆性測定：見表1。表1家兔Hb含量及RBC脆性測定分組Hb測定含量（g/L）RBC脆性測定（NaCl%）最小抵抗最大抵抗實驗組對照組80～1500.60～0.550.40～0.353.2不同因素對血液凝固時間的影響表2血液凝固及其影響因素試管號實驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟4滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7腦組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴4分析與探討4.1本次實驗家兔Hb測定結果比對照高（或低、或基本一致），從操作過程方面說明原因：……。4.2本次實驗家兔RBC脆性測定結果，最小抵抗比對照組高（或低、或基本一致），最大抵抗……，從操作過程方面說明原因：……。4.3家兔凝血時間測定結果表明，××處理能加快（抑制或不凝）血液凝固，為什么？××管加CaCl2后凝固，為什么？（從凝血機制分析）5參考文獻[1]伍莉，黃慶洲.動物生理學實驗[M].重慶：西南師范大學出版社，

2013，87-100.[2]鄒永新，郭予強.我國鴨病毒性疾病的發(fā)生和流行概況[J].中國獸醫(yī)雜志，2002（6）：38-40.家兔Hb、RBC脆性測定及影響血凝的因素觀察1實驗相關信息及目的2材料2.1動物2.2主要藥品：2.3主要儀器：3實驗方法：簡述或按《動物生理學實驗》方法進行[1]。4結果4.1家兔Hb、RBC脆性測定：見表1。4.2家兔血凝時間的測定：見表2。

表1家兔Hb含量及RBC脆性測定表2不同因素對家兔血凝時間的影響5討論5.1家兔Hb測定結果與對照比較，其值偏高，原因：5.2家兔RBC脆性測定結果與對照比較，其值，原因：5.3家兔血凝時間測定結果表明，時間長短，原因：參考文獻[1]陳杰.家畜生理學[M]，第四版.北京：中國家業(yè)出版社.2004，23-34.分組實驗組對照組Hb（g/L）RBC脆性（NaCL%）最小抵抗最大抵抗80-1500.6～

0.550.4～0.35血凝時間（S）實驗管號處理因素草+Ca++肝素+Ca++對照棉花肝素冰水石蠟草腦組織實驗四心肌收縮的特點【實驗目的】

學習蟾蜍心臟活動描記的方法，觀察心肌收縮的特點?！緦嶒炘怼?/p>

心肌的有效不應期特別長，幾乎占據(jù)了整個收縮期和舒張早期，在此期內任何刺激均不能引起心肌收縮。在心臟舒張早期之后，給心肌一次有效刺激，會引起心臟一次期前收縮，緊接著出現(xiàn)一次較長的間歇——代償間歇?！緦嶒瀸ο蟆客芑蝮蛤堋緦嶒炈幤贰咳问弦骸緦嶒灧椒ㄅc步驟】1.實驗準備（1）在體蛙心制備：取蛙一只，破壞腦、脊髓，仰臥固定于蛙板上。左手持鑷子提起胸骨后端的皮膚剪一小口，然后向左、右兩側鎖骨外側剪開皮膚、肌肉，剪斷左右鎖骨，使創(chuàng)口呈一倒三角形，充分暴露心臟部位，并用眼科剪剪開心包膜，徹底暴露心臟。（2）觀察心臟的結構識別蛙心臟。自心臟腹面可觀察到心室、心房、動脈球和主動脈。用玻璃分針向前翻轉蛙心，暴露心臟背面可觀察到靜脈竇和心房。（3）連接實驗裝置將蛙心夾上的細線與張力換能器相連，讓心臟搏動信號傳入計算機生物信號采集處理系統(tǒng)。將銅絲與心室接觸良好并固定穩(wěn)妥后，與刺激器的輸出連接。2.實驗項目（1）描記正常曲線，觀察曲線的收縮相和舒張相。（2）用中等強度的單個閾上刺激在收縮期刺激心室，有何變化？為什么？（3）用中等強度的單個閾上刺激在舒張中后期刺激心室，有何變化？為什么？（4）心肌“全或無”反應：用絲線在靜脈竇與心房之間作一結扎，心臟停止跳動。然后給予閾下及不同強度的閾上刺激，觀察蛙心收縮強度的變化?！窘Y果及分析】1.心縮期單個閾上刺激，心臟有何變化，為什么？2.心舒期單個閾上刺激，心臟有何變化，為什么？3.第一結扎后，心房、心室活動有何變化，為什么？4.閾下刺激心臟的收縮曲線幅度有何變化，為什么？5.不同強度閾上刺激，曲線幅度有何變化，為什么？【注意事項】1.破壞蛙的大腦和脊髓要徹底。2.經(jīng)常給心臟滴加任氏液，以保持心臟適宜的環(huán)境。3.張力傳感器與蛙心夾之間的絲線應保持適宜的緊張度。4.銅絲與心室接觸良好的同時，還應盡量不讓其阻礙心臟的自發(fā)收縮。實驗四蟾蜍心肌收縮的特點1實驗相關信息及目的2實驗原理3材料3.1動物3.2主要藥品：任氏液3.3主要儀器：計算機生物信號采集系統(tǒng)、張力換能器4方法：簡述或按生理實驗指導書a～b頁介紹方法進行[]

5結果：見圖。正常心肌舒縮曲線心縮期單刺激心舒期單刺激代償間歇期前收縮第一結扎竇房溝閾刺激閾上刺激閾上刺激圖：不同時期刺激心肌其收縮活動的變化

6討論

6.1心縮期單個閾上刺激，心活動變化？其原因？

6.2心舒中后期單個閾上刺激，心活動變化？其原因？

6.3竇房溝結扎后，心活動變化？其原因？

6.4結扎后單個不同強度閾上刺激，心肌收縮強度的變化趨勢？其原因？參考文獻實驗五蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標本的制備骨骼肌的生理特性1原理：用蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本研究刺激與反應的關系和肌肉收縮的特性。

2材料：蟾蜍。3方法：參照《動物生理學實驗》和實驗錄像進行。4結果實驗六心血管活動的神經(jīng)-體液調節(jié)[目的]學習動脈血壓的直接測定方法，并觀察神經(jīng)-體液因素對心血管活動的調節(jié)。[原理]正常情況下，動脈血壓通過神經(jīng)和體液因素的調節(jié)而保持相對穩(wěn)定，其中以降壓反射尤為重要。若阻斷頸動脈血流，頸動脈竇壓力感受器受到的刺激減少，通過竇神經(jīng)傳向心血管中樞的刺激亦減少，降壓反射活動減弱，血壓升高；當壓迫頸動脈竇時，通過竇神經(jīng)傳向心血管中樞的刺激增加，降壓反射活動增強，血壓降低。

腎上腺素使心率加快，心縮力加強，心輸出量增加，血壓升高；乙酰膽堿引起心縮力減弱，心率減慢，血管擴張，外周阻力降低，血壓下降。

[對象]家兔。[藥品]846，肝素（300U/mL），0.01%AD，0.01%Ach。

[器械]生物信號采集處理系統(tǒng)，血壓換能器，手術器械等。

[步驟]1.實驗準備：（1）肌肉麻醉（2）分離頸部神經(jīng)、血管（3）動脈插管2.連接實驗裝置：

3.實驗項目：見圖示。[注意事項]1.麻醉應適量，以免過量引起動物死亡；2.分離血管、神經(jīng)原則：先認準再分離；先神經(jīng)再血管；先細后粗；3.動脈插管的固定要可靠，防止漏液和血管堵塞；4.要待前一項目恢復正常后才能進行下一項目；5.實驗結束后，結扎動脈近心端后再拔除動脈插管。實驗七離體小腸平滑肌的生理特性1原理：平滑肌具有特定的生理特性，對化學、溫度和牽拉刺激非常敏感。2材料：家兔、采集系統(tǒng)、張力換能器、Ach、Ａd。3方法：參照《動物生理學實驗》和實驗錄像進行。4項目：Ach、Ａd、降溫、升溫。5注意事項5.1實驗動物要禁食24h；5.2實驗前標本要放在38℃臺氏液中浸泡數(shù)分鐘，使標本興奮性穩(wěn)定再進行實驗；5.3實驗中注意控制溫度；5.4實驗中隨時更換新鮮臺氏液；5.5實驗中添加的藥物量要由少至多。實驗八呼吸運動的調節(jié)1原理：呼吸運動受內、外環(huán)境刺激的影響。2材料：家兔、采集系統(tǒng)、壓力換能器、2%乳酸、CO2、

33%乙醇溶液。3方法：參照《動物生理學實驗》方法進行。4項目：吸入CO2、增大無效腔、夾閉氣管、靜注乳酸、切斷迷走神經(jīng)。5注意事項5.1氣管插管內壁要干凈；5.2氣流適宜，以免直接影響呼吸運動，干擾實驗結果；5.3注射乳酸時要避免外漏以引起動物躁動；5.4每項實驗前均應有正常呼吸曲線作比較；5.5吸入CO2時，出現(xiàn)現(xiàn)象應立即移開CO2，防止動物死亡。實驗九影響尿生成的因素1原理：觀察不同生理因素對動物尿液量的影響。2材料：家兔、垂體后葉素、0.9%NaCl、20%G.S、Ａd、Ach、33%乙醇溶液。3方法：參照《動物生理學實驗》和實驗錄像進行。4結果：記錄3min尿量。4.1正常尿量記錄（3min）；4.2靜脈注射0.9%NaCl20mL（37℃）；4.3靜脈注射0.01%Ad0.3～0.5mL；4.4靜脈注射20%G.S10mL（37℃）；4.5靜脈注射垂體后葉素0.3mL；5.1實驗前家兔多喂菜葉或水，以增加基礎尿量；5.2保護好耳靜脈，應從耳靜脈遠心端開始注射，逐漸向耳根部推進；5.3暴露膀胱時，手術切口3～4cm為度，防止腸管漏出；5.4輸尿管插管時一定要準確，且事先在插管內充滿水；5.5每一項目要待前一項的影響基本結束后再進行。實驗十脊髓反射的基本特征與反射弧分析1實驗目的2實驗原理3實驗對象4器材藥品5標本制備6實驗項目6.1脊髓反射（1）屈肌和對側伸肌反射：0.5%H2SO4刺激蛙腳趾。（2）騷扒反射：0.5%H2SO4濾紙片刺激蛙腹側部。（3）反射時測定：分別用0.5%H2SO4和1%H2SO4刺激蛙腳趾（三次，求平均值），比較反射時與刺激強度的關系。（4）中樞興奮的擴散：用不同力量夾蛙腳趾，觀察有何現(xiàn)象。（5）中樞興奮的后作用：上述刺激停止后觀察有何現(xiàn)象。6.2反射弧分析（1）正常反射活動觀察：0.5%H2SO4刺激蛙腳趾。（2）破壞腳趾感受器：后肢踝關節(jié)處破壞皮膚感受器，檢驗屈肌反射。（3）破壞神經(jīng)纖維：分離對側坐骨神經(jīng)，用2%普魯卡因麻醉后，再用

0.5%H2SO4刺激腳趾，待屈肌反射消失后，1%H2SO4濾紙片刺激蛙腹側部檢驗騷扒反射。（4）搗毀脊髓：檢驗各種反射活動。家兔呼吸運動的調節(jié)（不同方法）[目的要求]1.學習記錄家兔呼吸運動的方法。

2.觀察并分析不同因素對呼吸運動的影響。[基本原理]

高等動物的呼吸運動之所以能持續(xù)、節(jié)律性地進行，是由于體內調節(jié)機制的存在。體內、外的各種刺激，可以直接作用于中樞或不同部位的感受器，反射性地影響呼吸運動，以適應機體代謝的需要。肺的牽張反射參與呼吸節(jié)律的調節(jié)。[動物及器材]

家兔、手術臺、手術器械、張力傳感器、壓力傳感器、計算機采集系統(tǒng)、846、2%乳酸、CO2氣袋。[方法與步驟]

急性動物實驗時，記錄呼吸運動的方法有三種：一種是通過壓力傳感器與氣管插管連接記錄；另一種是通過系在胸（或腹）部，通過張力傳感器記錄；第三種是通過張力傳感器記錄膈肌運動。今天做第一和第二種方法。（一）氣管插管1.麻醉→背位固定→剪去頸部與胸部被毛→切開頸部皮膚，分離氣管并插入氣管插管→分離雙側迷走神經(jīng)，穿線備用。注意：氣管需分離干凈，插管后扎緊，避免漏氣。（二）記錄呼吸運動2.將金屬鉤鉤于胸部，線的另一端系于張力傳感器的應變梁上。（另外3組按原來方法連接壓力傳感器）3.調節(jié)記錄系統(tǒng)，使呼吸曲線清楚地顯示出來。（三）觀察項目1.記錄正常呼吸運動，注意區(qū)分吸氣和呼氣方向2.吸入C023.增大無效腔4.夾閉氣管5.注射2%乳酸2mL

6.剪斷一側或雙側迷走神經(jīng)

[注意事項]1.氣管需分離干凈，插管后扎緊，避免漏氣，插管內壁要干凈；2.氣流適宜，以免影響呼吸運動，干擾實驗結果；3.吸入CO2時，