微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)資料課件

革蘭陽(yáng)性球菌

第一頁(yè)，共八十頁(yè)。革蘭陽(yáng)性球菌是指革蘭染色為陽(yáng)性的一群球菌，與醫(yī)學(xué)有關(guān)的兼性厭氧球菌有9屬通常引起化膿性感染，故又稱化膿性球菌（pyogeniccocci）本章主要介紹葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬。專性厭氧球菌在第十六章厭氧菌中介紹。

第二頁(yè)，共八十頁(yè)。

第一節(jié)葡萄球菌屬葡萄球菌屬（Staphylococcus）在自然界廣泛分布。存在于人和動(dòng)物的皮膚黏膜上的菌株可致多種化膿性感染癤、癰、膿腫、菌血癥等燙傷樣皮膚綜合癥毒性休克綜合癥第三頁(yè)，共八十頁(yè)。一、分類葡萄球菌屬目前有35個(gè)種、17個(gè)亞種凝固酶凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌凝固酶陰性葡萄球菌（Coagulasenegativestaphylococcus,CoNS）噬菌體分型可將金黃色葡萄球菌分成4～5群26型質(zhì)粒分型、血清學(xué)分型、抗生素分型和細(xì)菌DNA的RFLP或PFGE分型，用來(lái)研究細(xì)菌的致病性、耐藥性、流行病學(xué)特點(diǎn)和細(xì)菌鑒別的關(guān)系第四頁(yè)，共八十頁(yè)。分類引起人類疾病的重要菌種有金黃色葡萄球菌（S.aureus）表皮葡萄球菌（S.epidermidis）頭狀葡萄球菌（S.capitis）人葡萄球菌（S.hominis）腐生葡萄球菌（S.saprophyticus）其余尚有一些能在人體中分離到溶血葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌、中間葡萄球菌等。第五頁(yè)，共八十頁(yè)。二、臨床意義凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌是人類重要致病菌可引起社區(qū)和醫(yī)院感染感染常以急性、化膿性為特征，如果未經(jīng)有效治療，感染可擴(kuò)散至周圍組織或經(jīng)菌血癥轉(zhuǎn)移至其他器官常見(jiàn)的感染癤、癰、外科切口、創(chuàng)傷等局部化膿性感染和骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、菌血癥等全身性感染第六頁(yè)，共八十頁(yè)。臨床意義致病性主要與各種侵襲性酶類和多種毒素有關(guān)腸毒素引起食物中毒，表現(xiàn)為急性胃腸炎噬菌體II群產(chǎn)生的剝脫毒素（或稱表皮溶解素）可引起人類燙傷樣皮膚綜合征多見(jiàn)于新生兒、幼兒和免疫功能低下的成人皮膚呈彌漫性紅斑和水皰形成，繼以表皮上層大量脫落由噬菌體Ⅰ群產(chǎn)生的毒性休克綜合征毒素-I（ToxicshocksyndrometoxinI,TSST-1）屬超抗原家族，刺激T細(xì)胞誘發(fā)TNF和IL-1可致機(jī)體多個(gè)器官的功能紊亂或引起毒性休克綜合征(TSS)第七頁(yè)，共八十頁(yè)。臨床意義CoNS是人體皮膚黏膜正常菌群之一是醫(yī)院感染的主要病原菌表皮葡萄球菌人工瓣膜性心內(nèi)膜炎、靜脈導(dǎo)管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關(guān)節(jié)感染等腐生葡萄球菌女性尿路感染的重要病原菌其他凝固酶陰性葡萄球菌重要的條件致病菌和免疫受損患者的感染菌產(chǎn)生莢膜多糖或糖萼有關(guān)增強(qiáng)細(xì)菌與外來(lái)物質(zhì)（生物性瓣膜、導(dǎo)管等）表面的粘附或在其表面形成一層生物膜而保護(hù)細(xì)菌對(duì)抗殺菌物質(zhì)作用。第八頁(yè)，共八十頁(yè)。

三、生物學(xué)特性直徑0.5~1.5μm、革蘭陽(yáng)性球菌呈單個(gè)、成雙、短鏈（液體培養(yǎng)基或膿汁中）或成簇排列呈葡萄串樣，無(wú)鞭毛和芽胞，某些菌株能形成莢膜在金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁有葡萄球菌A蛋白，具有抗原性大多為兼性厭氧菌,對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適生長(zhǎng)條件35~37℃，pH7.4~7.6。普通培養(yǎng)基上形成直徑2~3mm不透明的圓形凸起菌落產(chǎn)生金黃色、白色、檸檬色等非水溶性色素附著在菌落上。第九頁(yè)，共八十頁(yè)。生物學(xué)特性金黃色葡萄球菌血瓊脂平板上菌落周圍有透明溶血環(huán)。能在含10%~15%NaCl瓊脂中生長(zhǎng)該菌的抵抗力比其他無(wú)芽胞細(xì)菌強(qiáng)，耐干燥近年來(lái)耐藥性增強(qiáng)，對(duì)多種抗菌藥物不敏感生化反應(yīng)活潑、能分解多種糖類和蛋白質(zhì)，觸酶陽(yáng)性該屬細(xì)菌DNAG+Cmol%為30~39第十頁(yè)，共八十頁(yè)。酶和毒素葡萄球菌屬產(chǎn)生多種酶和毒素產(chǎn)生2種血漿凝固酶結(jié)合凝固酶或聚集因子是結(jié)合在菌體表面的凝固酶，能與血漿中的纖維蛋白原交聯(lián)使菌體快速凝集游離凝固酶是細(xì)菌分泌到菌體外的凝固酶，能被血漿中的協(xié)同因子（cofactor）激活形成復(fù)合物，再使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，而使血漿凝固第十一頁(yè)，共八十頁(yè)。酶和毒素耐熱核酸酶葡萄球菌溶素有α、β、γ、δ等破壞紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板以及肝細(xì)胞等腸毒素是一組對(duì)熱穩(wěn)定的可溶性蛋白質(zhì)，耐熱100℃30min,分子量為26～30kDa，能夠抵抗胃腸液中蛋白酶的水解作用根據(jù)抗原性和等電點(diǎn)的不同可分為A、B、C1、C2、C3、D、E、G和H等9個(gè)血清型，以A、D型多見(jiàn)編碼腸毒素基因大多位于染色體上（D型由質(zhì)粒編碼）第十二頁(yè)，共八十頁(yè)。酶和毒素毒性休克綜合征毒素透明質(zhì)酸酶、磷脂酶、觸酶、殺白細(xì)胞素和表皮剝脫毒素等攜帶誘導(dǎo)性的青霉素酶和乙酰基轉(zhuǎn)移酶質(zhì)粒，通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移部分菌株通過(guò)獲得外源性的macA基因而產(chǎn)生青霉素結(jié)合蛋白2a（PBP2a），導(dǎo)致對(duì)所有β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥第十三頁(yè)，共八十頁(yè)。

四、微生物檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)程序

第十四頁(yè)，共八十頁(yè)。（二）標(biāo)本采集根據(jù)感染的部位，采集不同的標(biāo)本。該屬細(xì)菌廣泛分布在人體皮膚和黏膜，采取時(shí)避免病灶周圍正常菌群污染。第十五頁(yè)，共八十頁(yè)。

（三）標(biāo)本直接檢查無(wú)菌體液如腦脊液和關(guān)節(jié)穿刺液可使用涂片、革蘭染色后直接顯微鏡檢查，查見(jiàn)細(xì)菌具有重要臨床價(jià)值。其他體液標(biāo)本如同時(shí)伴有炎性細(xì)胞時(shí)則直接顯微鏡檢查結(jié)果也具有參考價(jià)值。涂片檢查發(fā)現(xiàn)有形態(tài)相似的革蘭陽(yáng)性球菌，則可初步報(bào)告“查見(jiàn)類似葡萄球菌屬革蘭陽(yáng)性球菌”，并進(jìn)一步進(jìn)行分離和鑒定予以證實(shí)。

第十六頁(yè)，共八十頁(yè)。

（四）分離培養(yǎng)與鑒定膿液、分泌物等接種于血瓊脂平板有污染的標(biāo)本如糞便等應(yīng)接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板血液標(biāo)本則用肉湯增菌培養(yǎng)基

第十七頁(yè)，共八十頁(yè)。葡萄球菌屬內(nèi)各菌種鑒定方法

第十八頁(yè)，共八十頁(yè)。1.菌落性狀

金黃色葡萄球菌直徑6~8mn，金黃色或橙色，菌落周圍出現(xiàn)或不出現(xiàn)透明溶血環(huán)表皮葡萄球菌直徑為5~6mm，某些產(chǎn)粘液菌株能粘附在瓊脂平板表面，無(wú)色或白色溶血葡萄球菌直徑5~9mm，不透明，無(wú)色素或奶油色、黃色里昂葡萄球菌直徑4~7mm，邊緣整齊稍扁，奶色、黃色和沃氏葡萄球菌相似腐生葡萄球菌直徑5~8mm，白色或檸檬色菌落外觀疑為葡萄球菌者應(yīng)進(jìn)行革蘭染色證實(shí)甘露醇高鹽平板上金黃色葡萄球菌菌落為黃色第十九頁(yè)，共八十頁(yè)。2．凝固酶試驗(yàn)

有玻片法和試管法兩種玻片凝固酶試驗(yàn)-測(cè)定結(jié)合型凝固酶試驗(yàn)時(shí)挑取少數(shù)菌落培養(yǎng)物（不能用生長(zhǎng)高鹽瓊脂上的菌落）加入1滴血漿，10秒內(nèi)觀察細(xì)菌聚集和凝塊形成金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)第二十頁(yè)，共八十頁(yè)。2．凝固酶試驗(yàn)試管凝固酶試驗(yàn)-測(cè)定分泌型凝固酶以孵育過(guò)夜的牛心腦浸液肉湯培養(yǎng)物和血漿在37℃水浴中孵育4h，觀察凝塊形成。如試驗(yàn)結(jié)果為陰性者再置室溫18~24h，因某些菌種（中間葡萄球菌、豬葡萄球菌）的凝集出現(xiàn)所需時(shí)間長(zhǎng)于4h必須注意某些菌株產(chǎn)生的葡激酶在延長(zhǎng)孵育時(shí)間后可使凝塊溶解使之產(chǎn)生假陰性若使用的不是無(wú)菌血漿可產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果；細(xì)菌不是純培養(yǎng)物或污染可導(dǎo)致假陽(yáng)性第二十一頁(yè)，共八十頁(yè)。3．耐熱核酸酶試驗(yàn)

大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。第二十二頁(yè)，共八十頁(yè)。4．磷酸酶試驗(yàn)

大多數(shù)的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌和豬葡萄球菌為陽(yáng)性。將待測(cè)菌種點(diǎn)種在加有硝基酚磷酸鹽的pH5.6~6.8MH瓊脂上，孵育18~24h，菌落周圍出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性。第二十三頁(yè)，共八十頁(yè)。5．吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗(yàn)

溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中間葡萄球菌為陽(yáng)性。將孵育24h斜面培養(yǎng)物接種在含吡咯烷酮-β萘基酰胺（PYR）肉湯中，使細(xì)菌濃度調(diào)整為2號(hào)麥?zhǔn)瞎軡岫龋?5℃孵育2h，加入PYR試劑后2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)深紫紅色為陽(yáng)性。第二十四頁(yè)，共八十頁(yè)。6．其他鑒定試驗(yàn)

常用的葡萄球菌屬種間細(xì)菌的鑒定生化試驗(yàn)鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)、脲酶試驗(yàn)、β-半乳糖苷酶、3-羥基丁酮酸試驗(yàn)、新生霉素敏感試驗(yàn)、多粘菌素B耐藥試驗(yàn)、糖產(chǎn)酸試驗(yàn)第二十五頁(yè)，共八十頁(yè)。（五）腸毒素檢測(cè)動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)經(jīng)典的方法是采用幼貓腹腔注射(肉湯培養(yǎng)物或嘔吐物)，4h內(nèi)發(fā)生嘔吐腹瀉和體溫升高或死亡等現(xiàn)象者，提示金黃色葡萄球菌腸毒素存在瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)或ELISA法測(cè)定用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測(cè)定待測(cè)標(biāo)本中的金黃色葡萄球菌腸毒素與相應(yīng)抗毒素在瓊脂糖中進(jìn)行雙相擴(kuò)散，觀察有無(wú)沉淀線產(chǎn)生將抗毒素包被在固相載體中以雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)樣本中的腸毒素第二十六頁(yè)，共八十頁(yè)。第二節(jié)鏈球菌屬鏈球菌屬（Streptococcus）細(xì)菌種類多，分布廣其中某些菌種為毒力強(qiáng)的致病菌另一些則是作為正常菌群棲居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道還有一些是皮膚上的過(guò)路菌和黏膜上的定居菌第二十七頁(yè)，共八十頁(yè)。一、分類鏈球菌屬的分類較為復(fù)雜傳統(tǒng)分類以血平板上溶血現(xiàn)象Lancefield抗原血清分型種系分類法鏈球菌屬的分類較以前的分類有較大的變化第二十八頁(yè)，共八十頁(yè)。傳統(tǒng)分類根據(jù)鏈球菌屬各種細(xì)菌在血平板上的溶血現(xiàn)象甲型（α）溶血性鏈球菌乙型（β）溶血性鏈球菌不出現(xiàn)溶血的丙型（γ）鏈球菌根據(jù)Lancefield抗原血清分型分為A、B、C、D、……等20群血清群與溶血特性沒(méi)有相關(guān)性。對(duì)人類致病的主要是A群第二十九頁(yè)，共八十頁(yè)。種系分類法根據(jù)種系分類法的研究結(jié)果原來(lái)歸屬為D群鏈球菌的腸球菌和N群鏈球菌已分別獨(dú)立為腸球菌屬（Enterococcus）和乳球菌屬（lactococcus）遺傳學(xué)和血清學(xué)分型不能統(tǒng)一在遺傳學(xué)上相關(guān)的同種細(xì)菌其抗原可出現(xiàn)異質(zhì)性毫無(wú)相關(guān)的菌種可出現(xiàn)同一抗原。根據(jù)伯杰鑒定細(xì)菌手冊(cè)第9版，鏈球菌目前分為40個(gè)種和亞種

第三十頁(yè)，共八十頁(yè)。傳統(tǒng)的分類方法β溶血性鏈球菌A、C、G群抗原菌落直徑大于0.5mmA群的化膿性鏈球菌（S.pyogenes）、C群、G群的馬鏈球菌（S.equi）和似馬鏈球菌（S.equismilis）菌落直徑小于0.5mm具A、C、G群抗原，統(tǒng)稱米勒鏈球菌（S.milleri）咽喉炎鏈球菌、中間型鏈球菌和星座鏈球菌還有α溶血和不溶血的細(xì)菌B群抗原無(wú)乳鏈球菌（S.agalactiae）第三十一頁(yè)，共八十頁(yè)。傳統(tǒng)的分類方法α溶血性鏈球菌包括肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）草綠色鏈球菌群（Viridansstreptococci）不溶血D群鏈球菌牛鏈球菌（S.bovis）第三十二頁(yè)，共八十頁(yè)。二、臨床意義化膿性鏈球菌是致病力最強(qiáng)的一種鏈球菌能產(chǎn)生多種毒素鏈球菌溶素O和S紅疹毒素M蛋白、脂磷壁酸酶（鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶等）可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、膿皰病、軟組織感染、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等產(chǎn)毒株還可引起猩紅熱可致感染后的變態(tài)反應(yīng)性疾病如急性腎小球腎炎、風(fēng)濕熱等近年來(lái)報(bào)道引起毒素休克綜合征第三十三頁(yè)，共八十頁(yè)。臨床意義無(wú)乳鏈球菌是新生兒菌血癥和腦膜炎的常見(jiàn)菌該菌定居于婦女生殖道能導(dǎo)致新生兒感染早發(fā)型新生兒感染多發(fā)病于出生后24h，以肺炎為主晚發(fā)型為產(chǎn)后7天至3月內(nèi)，以腦膜炎和菌血癥為主B群鏈球菌對(duì)成人侵襲力較弱主要有腎盂腎炎、子宮內(nèi)膜炎糖尿病、泌尿生殖道功能失調(diào)、腫瘤和免疫機(jī)能低下者易受B群鏈球菌感染第三十四頁(yè)，共八十頁(yè)。臨床意義C、G群β溶血性鏈球菌與化膿性鏈球菌有相似的毒力因子，引起上述相似的感染米勒鏈球菌是人體口腔、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常菌群盡管在化膿性感染病灶中能分離到該菌，但大都是手術(shù)和創(chuàng)傷引起的內(nèi)源性感染第三十五頁(yè)，共八十頁(yè)。臨床意義肺炎鏈球菌大葉性肺炎、支氣管炎中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎和菌血癥肺炎鏈球菌的莢膜在細(xì)菌的侵襲力上起著重要作用肺炎鏈球菌的溶血素、神經(jīng)氨酸酶也是其主要致病物質(zhì)第三十六頁(yè)，共八十頁(yè)。臨床意義草綠色鏈球菌人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起心臟瓣膜異常患者的亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎從血液中分離出該菌常被認(rèn)為是污染的細(xì)菌血液鏈球菌、溫和鏈球菌、格氏鏈球菌、口腔鏈球菌、中間型鏈球菌常分離自深部膿腫，特別是肝和腦的膿腫

第三十七頁(yè)，共八十頁(yè)。三、生物學(xué)特性第三十八頁(yè)，共八十頁(yè)。1．形態(tài)鏈球菌是直徑小于2μm的球形或卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌，呈鏈狀排列，鏈的長(zhǎng)短和細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)肺炎鏈球菌呈矛尖狀，寬端相對(duì)尖端向外，成雙排列，無(wú)芽胞、無(wú)動(dòng)力，但能形成莢膜和粘液層第三十九頁(yè)，共八十頁(yè)。2．培養(yǎng)特性兼性厭氧菌肺炎鏈球菌和草綠色鏈球菌某些種需要CO2營(yíng)養(yǎng)要求高須在培養(yǎng)基中加入血液、血清。最適生長(zhǎng)溫度35~37℃，pH7.4~7.6血平板上形成灰白色小菌落不同菌種的菌落可形成α、β、γ三種特征性溶血現(xiàn)象液體培養(yǎng)基中表現(xiàn)為絮狀和顆粒沉淀肺炎鏈球菌莢膜多糖使菌落呈粘液狀產(chǎn)生自溶酶，培養(yǎng)48h后出現(xiàn)“臍窩狀”菌落第四十頁(yè)，共八十頁(yè)。3．生化特性和抵抗力發(fā)酵葡萄糖和多種糖，不產(chǎn)氣，乳酸為代謝終末產(chǎn)物，觸酶陰性鏈球菌基因DNA中G+Cmol%為34~46抵抗力本菌屬大多數(shù)細(xì)菌對(duì)干燥和消毒劑敏感本菌屬細(xì)菌較少引起細(xì)菌耐藥性近年對(duì)青霉素耐藥甚至多重耐藥的肺炎鏈球菌的出現(xiàn)并在全球播散，引起高度關(guān)注第四十一頁(yè)，共八十頁(yè)。抗原結(jié)構(gòu)抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜多糖抗原位于細(xì)胞壁以此可將鏈球菌分類為A、B、C、D、F、G等20群蛋白抗原主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等第四十二頁(yè)，共八十頁(yè)。四、微生物檢驗(yàn)檢驗(yàn)程序

第四十三頁(yè)，共八十頁(yè)。（二）標(biāo)本采集咽拭子、痰液、膿汁和血液等標(biāo)本采集后在2h內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，立即進(jìn)行檢查和接種對(duì)B群溶血鏈球菌的檢查，用無(wú)菌棉簽采集第35周~37周妊娠婦女的陰道分泌物，置于含多粘菌素(10μg/ml)和萘啶酸(15μg/ml)選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育18~24h，再作分離培養(yǎng)

第四十四頁(yè)，共八十頁(yè)。（三）標(biāo)本直接檢查直接顯微鏡檢查標(biāo)本涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查見(jiàn)鏈狀排列革蘭陽(yáng)性球菌有助于無(wú)正常菌群污染標(biāo)本的診斷莢膜腫脹試驗(yàn)用于檢查肺炎鏈球菌直接檢測(cè)抗原咽拭標(biāo)本的A群鏈球菌和女性生殖道標(biāo)本的B群鏈球菌可用抗原檢測(cè)用凝集試驗(yàn)或用ELISA方法等檢測(cè)該方法特異性和敏感度高，當(dāng)標(biāo)本所含的菌數(shù)太少可出現(xiàn)假陰性第四十五頁(yè)，共八十頁(yè)。（四）分離培養(yǎng)與鑒定用羊血瓊脂平板培養(yǎng)有助于識(shí)別溶血特性和進(jìn)一步鑒定初代分離需用5%CO2環(huán)境，35~37℃孵育24h觀察菌落性狀菌落周圍呈現(xiàn)透明溶血環(huán)的為β溶血性鏈球菌，菌落直徑大于0.5mm或小于0.5mm。草綠色溶血環(huán)的為α溶血性鏈球菌。有些菌落灰白色不出現(xiàn)溶血環(huán)革蘭染色為革蘭陽(yáng)性球菌，鏈狀或短鏈狀排列觸酶試驗(yàn)陰性，6.5%NaCl不生長(zhǎng)者可確定為鏈球菌屬細(xì)菌第四十六頁(yè)，共八十頁(yè)。鏈球菌屬內(nèi)的鑒定試驗(yàn)第四十七頁(yè)，共八十頁(yè)。β溶血性鏈球菌鑒定β溶血性鏈球菌鑒定Lancefield群特異性抗原鑒定根據(jù)Lancefield分群的要求提取各菌落的抗原，與相應(yīng)的分群血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)。與B群抗血清凝集的菌株可直接確認(rèn)為無(wú)乳鏈球菌與F群抗血清凝集并且菌落直徑＜0.5mm可確定為米勒鏈球菌與A、C、G群抗血清凝集的菌株不能確定種類，還需根據(jù)菌落大小和生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定第四十八頁(yè)，共八十頁(yè)。β溶血性鏈球菌鑒定PYR試驗(yàn)化膿性鏈球菌產(chǎn)生的吡咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮β-萘基酰胺，加入N，N-二甲氧基肉桂醛試劑后產(chǎn)生桃紅色桿菌肽（bacitracin）敏感試驗(yàn)化膿性鏈球菌為陽(yáng)性，有別于其他PYR陽(yáng)性的β溶血性細(xì)菌（豬鏈球菌、海豚鏈球菌）和A群小菌落β溶血性鏈球菌（米勒鏈球菌）此法可作為篩選試驗(yàn)第四十九頁(yè)，共八十頁(yè)。β溶血性鏈球菌鑒定VP試驗(yàn)挑取平板上孵育過(guò)夜菌落置于2mlVP肉湯中，孵育6h后加入VP試劑，搖勻30秒，出現(xiàn)桃紅色者為陽(yáng)性該試驗(yàn)可鑒別A、C、G群β溶血的大、小兩種不同菌落CAMP試驗(yàn)無(wú)乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，它可促進(jìn)金黃色葡萄球菌溶血能力，使其產(chǎn)生顯著的協(xié)同溶血作用本法可作為無(wú)乳鏈球菌的初步鑒定試驗(yàn)第五十頁(yè)，共八十頁(yè)。β溶血性鏈球菌鑒定此外鑒別β溶血鏈球菌還有BGUR（B-D葡糖糖醛酸酶試驗(yàn)）C、G群菌落為陽(yáng)性反應(yīng)，C、G群米勒鏈球菌則為陰性反應(yīng)。第五十一頁(yè)，共八十頁(yè)。2．非β溶血鏈球菌鑒定

通過(guò)血清學(xué)測(cè)定抗原群，可將B群鏈球菌、非β溶血的菌株和肺炎鏈球菌得以鑒定Lancefield的D群抗原可以存在于牛鏈球菌、腸球菌屬和片球菌屬，因此需要進(jìn)行生化反應(yīng)予以鑒別。菌

種

optochin敏感試驗(yàn)

膽汁溶菌試驗(yàn)

膽汁七葉苷試驗(yàn)

肺炎鏈球菌S+—草綠色鏈球菌R——牛鏈球菌R—+第五十二頁(yè)，共八十頁(yè)。草綠色鏈球菌鑒定

草綠色鏈球菌是人體正常菌群一部分，通常不致病，目前借助于常規(guī)方法鑒定到種有一定困難，通常將其鑒定到群。根據(jù)16SrRNA可分為溫和鏈球菌群（mitisgroup）、米勒鏈球菌群（millergroup）、變異鏈球菌群（mutansgroup）和唾液鏈球菌群（salivriusgroup）菌群VP脲酶精氨酸七葉苷甘露醇山梨醇溫和鏈球菌群－－－－－－變異鏈球菌群＋－－＋＋＋唾液鏈球菌群＋/—＋/—－＋－－米勒鏈球菌群＋－＋＋/－＋/――第五十三頁(yè)，共八十頁(yè)。商品化鑒定系統(tǒng)API-Strep系統(tǒng)ID32strep系統(tǒng)Microscan系統(tǒng)第五十四頁(yè)，共八十頁(yè)。抗鏈球菌溶素O抗體檢測(cè)常用于風(fēng)濕熱的輔助診斷活動(dòng)性風(fēng)濕熱患者抗體效價(jià)一般超過(guò)400單位第五十五頁(yè)，共八十頁(yè)。腸球菌屬

Enterococus廣泛分布在自然界常棲居在人、動(dòng)物的腸道和女性生殖道為醫(yī)院感染的重要病原菌第五十六頁(yè)，共八十頁(yè)。一、分類腸球菌屬原歸類于鏈球菌屬于1984年將其命名為腸球菌屬至今，經(jīng)由16SrRNA序列分析和核酸雜交等，證實(shí)腸球菌可分為5群19個(gè)種臨床標(biāo)本分離的腸球菌多屬于第2群第五十七頁(yè)，共八十頁(yè)。二、臨床意義腸球菌所致感染最多見(jiàn)于泌尿道感染,是重要的醫(yī)院感染病原菌多與泌尿道器械操作、留置導(dǎo)尿、尿路結(jié)構(gòu)異常有關(guān)腹腔和盆腔創(chuàng)傷時(shí)也是常見(jiàn)的感染菌腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾患的老年人、長(zhǎng)期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者第五十八頁(yè)，共八十頁(yè)。二、臨床意義近年來(lái)不斷上升的腸球菌感染率和廣泛使用抗菌藥物出現(xiàn)的耐藥性有關(guān)在臨床診斷前應(yīng)認(rèn)真評(píng)估分離菌的臨床意義臨床標(biāo)本中分離的80%~90%是糞腸球菌屎腸球菌約占5%~10%很少分離到腸球菌屬的其它種第五十九頁(yè)，共八十頁(yè)。三、生物學(xué)特性形態(tài)：腸球菌為革蘭陽(yáng)性球菌、呈單個(gè)，成對(duì)或短鏈狀排列，瓊脂平板上生長(zhǎng)的細(xì)菌呈球桿狀液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列無(wú)芽胞和莢膜，個(gè)別菌種有稀疏鞭毛第六十頁(yè)，共八十頁(yè)。培養(yǎng)特性兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度35℃，10℃和45℃均能生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)要求不高。部分糞腸球菌菌株在含有兔血、馬血或人血的平板上出現(xiàn)β溶血，而在羊血平板上不出現(xiàn)。其它菌種出現(xiàn)α溶血或不溶血所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生長(zhǎng)第六十一頁(yè)，共八十頁(yè)。生物學(xué)特性在40%膽汁培養(yǎng)基中能分解七葉苷，多數(shù)菌種具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR）不含細(xì)胞色素氧化酶和觸酶但糞腸球菌培養(yǎng)于含血的培養(yǎng)基中，可合成細(xì)胞色素或觸酶或兩者皆有，因而某些菌株表現(xiàn)為觸酶弱陽(yáng)性含鏈球菌D群抗原。G+Cmol%為37~45第六十二頁(yè)，共八十頁(yè)。抵抗力對(duì)頭孢菌素類、林可霉素類和磺胺類抗菌藥物耐藥近年來(lái)獲得性耐藥菌株不斷增多，表現(xiàn)為對(duì)氨基糖苷類耐藥和對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥。對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥是由vanA、vanB和vanC等基因介導(dǎo)第六十三頁(yè)，共八十頁(yè)。四、微生物檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)程序

第六十四頁(yè)，共八十頁(yè)。（二）標(biāo)本采集常規(guī)方法采集血、尿、創(chuàng)傷標(biāo)本和其他拭子，標(biāo)本于1小時(shí)內(nèi)接種完畢。（三）標(biāo)本直接檢查涂片染色顯微鏡檢查可見(jiàn)單個(gè)、成雙或短鏈排列卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌第六十五頁(yè)，共八十頁(yè)。（四）分離培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本接種于含血瓊脂平板若送檢標(biāo)本中含革蘭陰性桿菌可選用選擇鑒別培養(yǎng)基，常用的有：疊氮膽汁七葉苷瓊脂，可抑制革蘭陰性菌生長(zhǎng)，而腸球菌分解七葉苷產(chǎn)生黑色菌落；哥倫比亞多粘菌素-萘啶酸瓊脂(CAN)和苯乙基乙醇瓊脂(PEA)由于耐萬(wàn)古霉素腸球菌發(fā)生率增高，為早期檢出耐藥菌株，可使用含萬(wàn)古霉素瓊脂篩選方法（詳見(jiàn)第三十五章）第六十六頁(yè)，共八十頁(yè)。細(xì)菌鑒定方法如下菌屬的鑒定腸球菌屬細(xì)菌革蘭染色陽(yáng)性，卵圓形，單個(gè)、成雙或短鏈排列。觸酶陰性、膽汁七葉苷和PYR陽(yáng)性、6.5%NaCl肉湯中能生長(zhǎng)菌屬萬(wàn)古霉素分解葡萄糖產(chǎn)氣PYR膽汁七葉苷6.5%NaCl生長(zhǎng)溫度

10℃45℃

腸球菌屬敏感－＋＋＋＋＋乳球菌屬敏感－＋＋V＋V鏈球菌屬敏感――a―――V明串珠菌屬耐藥＋－VbV＋V第六十七頁(yè)，共八十頁(yè)。腸球菌屬間的菌種鑒定根據(jù)對(duì)甘露醇，山梨醇和精氨酸的代謝分五群第一群:分解甘露醇、山梨糖產(chǎn)酸，不水解精氨酸第二群:分解甘露醇和水解精氨酸第三群:水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖第四群:不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸第五群:分解甘露醇不分解山梨糖，不水解精氨酸第六十八頁(yè)，共八十頁(yè)。觸酶陽(yáng)性的其它革蘭陽(yáng)性球菌微球菌屬（Micrococcus）巨球菌屬(Macrococcus)動(dòng)球菌屬(Planococcus)考氏考克氏菌(Kocuriakristinae)觸酶微弱陽(yáng)性的差異球菌屬(Alloiococcus)和粘性羅氏菌(Rothiamucilaginosa)這些菌屬細(xì)菌在人體和動(dòng)物體表廣泛存在，常在臨床標(biāo)本中分離到，一般認(rèn)為是非致病菌。偶爾在某些免疫抑制或缺陷的患者中引起機(jī)會(huì)感染如心內(nèi)膜炎、腦膜炎、肺炎等。第六十九頁(yè)，共八十頁(yè)。微球菌屬以往曾將葡萄球菌屬、微球菌屬、口腔球菌屬和動(dòng)球菌屬共同歸類為微球菌科。細(xì)菌為革蘭陽(yáng)性，直徑為1~1.8μm的球菌，常成對(duì)、四聯(lián)或呈不規(guī)則排列在大多數(shù)臨床標(biāo)本中由于形態(tài)與葡萄球菌屬相似，觸酶陽(yáng)性而混淆。本菌屬氧化酶陽(yáng)性，對(duì)桿菌肽敏感、呋喃唑酮耐藥可以與葡萄球菌屬區(qū)別。第七十頁(yè)，共八十頁(yè)。差異球菌屬是需氧的革蘭陽(yáng)性球菌，成對(duì)或簇排列。觸酶試驗(yàn)弱陽(yáng)性，氧化酶試驗(yàn)陰性，常在中耳炎患者的標(biāo)本中分離到。第七十一頁(yè)，共八十頁(yè)。粘性羅氏菌是兼性厭氧菌，觸酶可變的革蘭陽(yáng)性球菌，成簇排列，在5%NaCl瓊脂上不能生長(zhǎng)，可與葡萄球菌屬、微球菌屬區(qū)別。第七十二頁(yè)，共八十頁(yè)。巨球菌屬菌體直徑為1.3~2.5μm，革蘭陽(yáng)性球菌，觸酶、氧化酶陽(yáng)性，對(duì)溶葡萄球菌素敏感。第七十三頁(yè)，共八十頁(yè)。二、觸酶陰性的革蘭陽(yáng)性球菌臨床標(biāo)本中分離到的觸酶陰性的革蘭陽(yáng)性球菌除了鏈球菌屬和腸球菌屬外，還經(jīng)常分離到乳球菌屬（Lactococcus）氣球菌屬（Aerococcus）片球菌屬（Pediococcus）孿生球菌屬（Gemella）