實驗室診斷皮膚病檢查講義

實驗室診斷皮膚病檢查個人簡介2002年畢業(yè)于北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院，之后參加中國農(nóng)業(yè)大學繼續(xù)教育，并完成本科學業(yè)；自2002年畢業(yè)后，一直從事小動物臨床護士工作，至2005年很榮幸的加入北京觀賞動物醫(yī)院，并成為化驗室的一員，2008年至今得到領(lǐng)導的信任，兼北京觀賞動物醫(yī)院化驗室主任一職至今。2設(shè)有專家室、診療室免疫室中西醫(yī)結(jié)合室影像室、B超室藥房、注射室、輸液室內(nèi)窺鏡室、無菌手術(shù)室處置室、住院區(qū)化驗室346789顯微鏡的正確使用1、開電源開關(guān)2、調(diào)光（光圈、聚光器）3、低倍鏡頭對準通光孔4、將要觀察的部位調(diào)到通光孔正中10顯微鏡使用的注意事項使用高倍鏡、油鏡時，應(yīng)按從低倍鏡逐步至高倍鏡，用細調(diào)節(jié)器螺旋調(diào)節(jié)。使用完畢轉(zhuǎn)動粗調(diào)手輪將工作臺下降到底；每次油鏡用后，必須用擦鏡紙擦去鏡頭上的油鏡油；使用后4-10倍鏡間把鏡頭八字形放置，鏡體復(fù)原。12顯微鏡使用的注意事項忌頻繁開關(guān)顯微鏡電源，臨時不用時只需將光源亮度調(diào)至最弱。重找或換片時的順序：1、在加油區(qū)外應(yīng)按：低倍→高倍→油鏡2、在加油區(qū)內(nèi)重找應(yīng)按：低倍→油鏡13顯微鏡的維護

對于顯微鏡的維護保養(yǎng)，主要做到防塵、防潮、防熱、防腐蝕。用后及時清洗擦拭干凈，并定期在有關(guān)部位加注中性潤滑油脂。對于一些結(jié)構(gòu)復(fù)雜，裝配精密的零部件，如果沒有一定的專業(yè)知識，一定的技能和專用工具，就不能擅自拆裝，以免損壞零部件。（不能放在離心機附近?。?/p>

14皮膚片在顯微鏡下的適用倍數(shù)癬菌：40X10、100X10鏡螨蟲：10X10、20X10鏡細菌：40X10、100X10鏡馬拉色氏菌：40X10、100X10鏡細胞學：40X10、100X10鏡15病變分布局部多處全身對稱性分布非對稱性分布16皮膚病變特征17皮膚病變特征18皮膚病變特征19皮膚病變特征20皮膚病采樣前準備了解患病動物的病史：包括性別、年齡、是否絕育、皮膚瘙癢程度、持續(xù)時間、病變部位、臨床癥狀、有無季節(jié)性、食物種類、生活環(huán)境、用藥史、用藥時間等。觀察皮膚的整體印象，包括：皮膚及被毛干燥、油膩、易掉毛、氣味等觀察有無跳蚤、跳蚤排泄物、虱子、蜱等與主人溝通，了解有無新生的患處，瘙癢最嚴重部位等，最好刮取新生病變與健康皮膚交界處，取2-3處病變局部剪毛，（75%酒精稍作擦拭），采樣。21采樣工具的準備剪毛剪1把、手術(shù)刀2把（鈍刀片）、止血鉗一把、載玻片、蓋玻片、碘酒棉球、酒精棉球在載玻片上分兩點各滴上一滴50%甘油（主要查看螨蟲類）和10%KOH（主要查看真菌類）備用干凈的載玻片備用（主要查看細胞、細菌類）根據(jù)采樣方法還可選擇膠帶、伍德氏燈等22采樣基本工具23刮片法流程刮片法：適用于檢查疥螨

、皮膚癬菌等采樣的處局部剪毛（剪毛部要大于要刮取的病變部）用手術(shù)刀輕輕刮取新患部與健康皮膚交界處（1）其中一把手術(shù)刀刮取皮膚表層皮屑置于事先準備好的10%KOH中（起到透明化作用）備用，主要查看真菌（2）表層刮取后，用手擠壓其患部，并用另一把手術(shù)刀將擠壓處毛囊內(nèi)的皮膚表層下刮取物置于事先準備好的50%甘油中（起到固定和透明化作用）備用，主要查看螨蟲在另一患處做同樣的取樣，分別將刮取物置于載玻片上相應(yīng)的溶液中取蓋玻片分別將刮取物輕輕按壓，盡量使刮取物與溶液混勻采樣結(jié)束后，在采樣部位涂擦碘酒消毒24拔毛法流程拔毛法：適用于查看外寄生蟲、蠕形螨、皮膚癬菌，毛發(fā)形態(tài)等在病變處用止血鉗拔出少量毛發(fā)（連同毛根拔出），置于KOH中/甘油中備用25擠壓法流程擠壓法：適用于查看蠕形螨在病變部位，以拇指和食指捏起皮膚，用力擠，使毛囊擴張，用刀片刮取經(jīng)擠壓毛囊液置于甘油中備用26膠帶法流程膠帶法：適用于查看外寄生蟲、癬菌、細菌、細胞學選擇合適的透明膠帶，在患病處皮膚上粘取一些皮屑和組織碎片，粘置于載玻片上備用27抹片法流程抹片法：適用于查看細菌，癬菌，細胞學等在用刀片淺層刮取后，直接用載玻片于皮膚上按壓，盡量較均勻涂滿玻片，火焰固定或自然晾干備用28伍德氏燈檢查法伍氏燈：適用于查看部分小孢子屬的癬菌感染用手提式伍德氏燈在暗室內(nèi)開啟燈光，預(yù)熱5-10分鐘，光源與皮膚距離約5-10cm左右，光線對準被檢處，觀察有無熒光出現(xiàn)29染色法流程細菌、馬拉色氏菌：通常臨床使用革蘭氏染色法。

操作步驟：

1、抹片后自然晾干或采用火焰固定（待玻片完全恢復(fù)常溫）2、按照革蘭氏染色步驟進行染色3、晾干或用濾紙沾去玻片表面的水份備用細胞：通常臨床使用瑞-姬氏染色法或迪夫染色法。（操作步驟同上）30常用染色液用途及步驟瑞氏-姬姆薩染色液（主要用于血液、骨髓、脫落細胞的涂片等）

染色步驟：瑞氏-姬姆薩A液1-2滴；瑞氏-姬姆薩B液2-4滴；將AB液混勻，靜止3-5分鐘左右---水洗---甩干---鏡檢31常用染色液用途及步驟迪夫染色液（主要用于血液、骨髓、脫落細胞的涂片等）

染色步驟：迪夫A液浸泡30秒---磷酸鹽緩沖液沖洗A液---甩干---迪夫B液浸泡30秒---水洗---甩干---鏡檢32常用染色液用途及步驟

革蘭氏染色液（主要用于區(qū)分G+菌和G-菌）

染色步驟：

龍膽紫---10秒---水洗---甩干---碘溶液---10秒---水洗---甩干---脫色液---10秒---水洗---甩干---沙黃溶液---10秒---水洗---甩干---鏡檢33蠕形螨

疥螨

姬螯螨

癬菌

細菌

馬拉色氏菌

過敏性皮炎

細胞學34蠕形螨35蠕形螨36

蠕形螨整個生活史共需24d；蟲體寄生于皮膚毛囊和皮脂腺內(nèi)；有4對足，口器小，體表無毛，吻突小而鈍，正常犬貓體表均會有少量蠕形蟎存在；病變以動物眼、唇、耳、前肢內(nèi)側(cè)的無毛處；病變周圍有界限分明的紅斑，癢感不強烈。但嚴重時，身體大面積脫毛、浮腫、皮脂溢和膿性皮炎；本病是一種可以使動物致死的外寄生蟲??；37蠕形螨臨床癥狀皮損可出現(xiàn)頭面部、趾（指）部。臨床癥狀各異，起初常為局灶性皮損，隨后擴大，出現(xiàn)斑片狀、局灶性、多灶性或彌漫性脫毛，伴有各種紅斑、皮屑、丘疹、瘙癢等，感染皮膚可能出現(xiàn)苔蘚化、色素過度沉著、膿包、糜爛、淺表性潰瘍或深部膿皮病。

38蠕形螨（刮片的要點）臨床上多以頭面部、四肢關(guān)節(jié)處刮片較容易檢測；刮片時應(yīng)擠壓或拔毛；39雌雄疥螨40疥螨卵經(jīng)3-8d孵化成幼蟲，移至皮膚表面蛻皮發(fā)育為1期幼蟲、2期幼蟲和成蟲。整個生活史需10-14d；蟲體終生寄生于皮膚內(nèi)蟲體呈卵圓形，體表覆以平行的細毛，有三對足直接接觸傳染，具有高度傳染性，可引起患畜劇烈的瘙癢，導致自我擦傷寄生于外耳、面部、肘部，嚴重時波及全身；局部表現(xiàn)脫毛、丘疹、紅斑、皮膚增厚和結(jié)痂41疥螨（刮片要點）能挖掘隧道，刮片時應(yīng)多摩擦，反復(fù)刮；臨床上病變常以耳部刮取較容易檢測；臨床上以劇烈瘙癢為典型癥狀；42姬螯螨43姬螯螨44姬螯螨無嚴格的宿主特異性，以幼犬多發(fā)以組織液為食，不打洞，有大量皮屑姬螯螨蟲體很大，有4對腿，末端呈梳子狀，最具特征的是鉤子樣的附屬口器或觸須，稱為螯針，這是與其他螨蟲鑒別的重要標志。寄生于宿主的表皮角質(zhì)層，在皮屑形成的假隧道內(nèi)快速移動，會定期用螯針刺入表皮，從而將自己牢牢固定在皮膚上4546真菌真菌主要包括酵母菌、霉菌、癬菌三大類臨床上引起犬、貓皮膚真菌病的主要為癬菌，分別有犬小孢子菌、石膏樣小孢子菌和須毛癬菌犬小孢子菌和須毛癬菌屬親動物型，主要侵害動物；石膏樣小孢子菌是親土壤型，多數(shù)腐生于土壤中，也可感染人和動物皮膚癬菌對外界的抵抗力很強。犬小孢子菌能在干燥環(huán)境中長達13個月保持活性，有些甚至可存活幾年47癬菌淺部癬菌主要為皮膚絲狀菌，侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲等角化組織引起癬癥，又稱癬菌癬癥病灶可見有隔菌絲和關(guān)節(jié)孢子；菌絲深入角化組織內(nèi)生成營養(yǎng)菌絲體，縱橫交織成網(wǎng)狀；孢子可排列成鏈狀或零散分布，在病發(fā)上可見孢子在毛干外排成厚鞘48伍德氏燈下癬菌49癬菌引起的朽木樣毛發(fā)5051孢子（10*10和10*20）52孢子100*1053孢子54↓20*10↓40*1055迪夫染色孢子56菌絲瑞-姬氏染色57真菌培養(yǎng)58細菌臨床以G+球菌、鏈球菌多見大多數(shù)化膿性球菌都屬于革蘭氏氏陽性菌59酵母菌

厚皮馬拉色氏菌紅斑、黃色皮屑和結(jié)痂，油膩和惡臭皮膚多見于面部、趾部、頸腹側(cè)、腹部、指間、皮膚皺褶處瘙癢60過敏性皮炎多見于過敏性引起的皮膚??；皮膚刮片染色可見嗜酸性粒細胞；61耳道檢查采樣工具的準備兩根棉簽、兩張載玻片

采樣用棉簽取患病耳道深處的分泌物，在玻片上涂抹均勻。

檢查方法將一張樣本片火焰固定、染片后觀察細菌和真菌。另一張直接看活片，檢查是否有螨蟲。耳道常見菌耳道感染常見的真菌：主要是馬拉色氏菌常見細菌：球菌耳道常見寄生蟲耳癢螨：寄生于外耳道，它們采食表皮碎屑并對患病動物造成嚴重的刺激，感染通常是雙側(cè)的，表現(xiàn)為甩頭和搔抓耳部。嚴重的感染可以引起中耳炎，繼續(xù)發(fā)展可能形成耳血腫。臨床多見于貓的耳癢螨感染，感染耳癢螨的貓耳道內(nèi)常有大量棕黑色的分泌物，分泌物多干結(jié)成塊。耳癢螨可以通過直接接觸在犬貓群中高度傳播。耳癢螨蟲體呈卵圓形，足較疥螨長,有4對足，從卵到成蟲需要2—3周細胞學（部分借鑒于陳宇馳老師課件）67穿刺的技術(shù)與要領(lǐng)1、盡量避免反復(fù)穿刺2、以左手觸摸穿刺物，右手持注射器一次進針（進針深淺根據(jù)穿刺物大?。?，拔出再進針（只限在穿刺物內(nèi)，不可將針頭拔出皮膚外），反復(fù)3-4次操作即可68穿刺的準備1、選擇適當?shù)淖⑸淦鳎ㄒ话憬ㄗh20G-40G的針頭和5-20ml的針管）2、清理病灶表面,必須嚴格無菌操作，以防感染3、穿刺的部位（懷疑是腫瘤時，穿刺的部位應(yīng)是手術(shù)時會切除的部位）69穿刺的方法1、細針抽吸：A注射器刺入被檢樣本B拉動活塞并使針頭部分在被檢樣本內(nèi)以不同角度刺入C松開活塞D拔出注射器70穿刺的方法2、細針活檢：適用于細胞較脆弱的組織，如淋巴結(jié)，或是采集樣本部位的血管比較豐富，或是用細針抽吸方法會采到血液或是其他類型液體使之不易判讀時方法：A拉開注射器活塞B使針頭部分在被檢樣本內(nèi)以不同角度刺入C拔出注射器71制片的技術(shù)與要領(lǐng)1、推片技術(shù)（適用于淋巴活檢組織這樣比較脆弱的樣本或含有較多液性成分的樣本）2、拉片技術(shù)（同上）3、海星技術(shù)（適用于細胞脆弱，而且是液性的樣本）4、壓片技術(shù)（適用于不易采到樣本的固體）72惡性細胞核標準1、巨型細胞核2、細胞核大小不等3、核仁不規(guī)則（大小、形態(tài)、數(shù)量）4、非典型，不對稱的有絲分裂相5、染色質(zhì)粗糙73肥大細胞瘤→惡性預(yù)后不良↓惡性預(yù)后良好1.圓形細胞瘤2.細胞質(zhì)或細胞外可見大量嗜堿性染色的顆粒3.“煎蛋樣”外觀4.預(yù)后較復(fù)雜74淋巴瘤

1.發(fā)生于皮膚的病灶早期出現(xiàn)皮屑和瘙癢，后形成結(jié)痂2.*細胞核呈現(xiàn)明顯嗜堿性染色；*部分細胞核中可見明顯巨大核仁或多個核仁；*染色質(zhì)質(zhì)地粗糙，染色性低于正常淋巴細胞；75傳染性性病腫瘤淡藍色或煙灰色胞漿細胞核多偏于細胞一側(cè)細胞質(zhì)內(nèi)可見數(shù)量不等的透明空泡76基底細胞瘤良性預(yù)后良好一般僅在局部呈浸潤性生長，很少發(fā)生轉(zhuǎn)移是皮膚癌腫最多見的一種77組織細胞