基因工程的工具及操作程序

基因工程當(dāng)前第1頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程當(dāng)前第2頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程當(dāng)前第3頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程當(dāng)前第4頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子終止子RNA聚合酶能夠識(shí)別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。轉(zhuǎn)錄開(kāi)始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動(dòng)，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。轉(zhuǎn)錄完畢后，RNA鏈釋放出來(lái)，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來(lái)。當(dāng)前第5頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)①不能轉(zhuǎn)錄為信使RNA，不能編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNA，能編碼蛋白質(zhì)編碼區(qū)非編碼區(qū)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)②有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。啟動(dòng)子當(dāng)前第6頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子

外顯子

能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子

不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子啟動(dòng)子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游內(nèi)含子：外顯子：當(dāng)前第7頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)原核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)編碼區(qū)是_____的編碼區(qū)是間隔的、_____的相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的______和具有調(diào)控作用的______區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思考編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長(zhǎng)嗎？連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼當(dāng)前第8頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)什么叫基因工程？基因工程又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。該技術(shù)是在生物體外，通過(guò)對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物。（一）基因工程的概念當(dāng)前第9頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本過(guò)程實(shí)質(zhì)結(jié)果基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)生物體外基因（DNA）分子水平人類需要的基因產(chǎn)物剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)基因重組當(dāng)前第10頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程培育抗蟲棉的簡(jiǎn)要過(guò)程：普通棉花(無(wú)抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因與運(yùn)載體DNA拼接導(dǎo)入棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？當(dāng)前第11頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來(lái)關(guān)鍵步驟二：抗蟲基因與運(yùn)載體DNA連接關(guān)鍵步驟三：抗蟲基因?qū)胧荏w(棉花)細(xì)胞當(dāng)前第12頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)解決培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟需要哪些工具？關(guān)鍵步驟一的工具：關(guān)鍵步驟二的工具：關(guān)鍵步驟三的工具：基因的剪刀——限制性內(nèi)切酶基因的針線——DNA連接酶基因的運(yùn)載工具——運(yùn)載體當(dāng)前第13頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)1.限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”限制酶是在生物體(主要是微生物)內(nèi)的一種酶，能將外來(lái)的DNA切斷，由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性內(nèi)切酶。（原核細(xì)胞內(nèi)的限制修飾系統(tǒng)）特點(diǎn)：特異性。即一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子。（二）DNA重組技術(shù)的基本工具當(dāng)前第14頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)當(dāng)前第15頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)大腸桿菌(E.coli)的一種限制酶能識(shí)別GAATTC序列，并在G和A之間切開(kāi)。限制酶當(dāng)前第16頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)限制酶當(dāng)前第17頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)什么叫黏性末端？被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。當(dāng)前第18頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)當(dāng)前第19頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端？要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)黏性末端。如果把兩種來(lái)源不同的DNA用同一種限制酶來(lái)切割，會(huì)怎樣呢？會(huì)產(chǎn)生相同的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合起來(lái)，就似乎可以合成重組的DNA分子了。當(dāng)前第20頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)2.DNA連接酶——“分子縫合針”

DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，即把梯子兩邊扶手的斷口連接起來(lái)，這樣一個(gè)重組的DNA分子就形成了。當(dāng)前第21頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)當(dāng)前第22頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)外源基因(如抗蟲基因)怎樣才能導(dǎo)入受體細(xì)胞(如棉花細(xì)胞)？導(dǎo)入過(guò)程需要運(yùn)輸工具——運(yùn)載體。運(yùn)載體的作用有哪些？作用一：作為運(yùn)載工具，將外源基因(抗蟲基因)轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞(棉花細(xì)胞)中去。作用二：利用運(yùn)載體在受體細(xì)胞(棉花細(xì)胞)內(nèi)，對(duì)外源基因(抗蟲基因)進(jìn)行大量復(fù)制。當(dāng)前第23頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)作為運(yùn)載體必須具備哪些條件？1）能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存。2）載體DNA必須有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便目的基因插入到載體上去。3）具有某些標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選。如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因等。載體DNA必須是安全的,不會(huì)對(duì)受體細(xì)胞有害,或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他生物細(xì)胞中去;當(dāng)前第24頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)3.基因進(jìn)入受體細(xì)胞的運(yùn)載——”分子運(yùn)輸車”常用的運(yùn)載體主要有兩類：1）細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)的質(zhì)粒2）噬菌體或某些動(dòng)植物病毒當(dāng)前第25頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)質(zhì)粒：質(zhì)粒是染色體外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細(xì)胞器和細(xì)菌細(xì)胞中核區(qū)外的DNA分子。現(xiàn)在習(xí)慣上用來(lái)專指細(xì)菌、酵母菌和放線菌等生物中核以外的DNA分子。

質(zhì)粒是基因工程最常用的運(yùn)載體。絕大多數(shù)細(xì)菌質(zhì)粒都是閉合環(huán)狀DNA分子。有的一個(gè)細(xì)菌中有一個(gè)，有的一個(gè)細(xì)菌中有多個(gè)。當(dāng)前第26頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)大腸桿菌的質(zhì)粒：

最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒，其中常含有抗藥基因，如四環(huán)素的標(biāo)記基因。質(zhì)粒的存在與否對(duì)宿主細(xì)胞生存沒(méi)有決定性作用，但復(fù)制只能在宿主細(xì)胞內(nèi)成。當(dāng)前第27頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程基本操作的四個(gè)步驟1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（并篩選）4、目的基因的檢測(cè)與鑒定當(dāng)前第28頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)當(dāng)前第29頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)一、目的基因的獲取1、目的基因主要是指______________________編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子2、獲取目的基因的常用方法有哪些?（1）鳥(niǎo)槍法（2）反轉(zhuǎn)錄法（3）化學(xué)合成法當(dāng)前第30頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)(一)從基因文庫(kù)中獲取目的基因?qū)⒑心撤N生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫(kù)基因文庫(kù)

基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)（如:cDNA文庫(kù)）1.基因文庫(kù)當(dāng)前第31頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因組文庫(kù)與部分基因文庫(kù)的關(guān)系怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因呢?當(dāng)前第32頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)2.基因文庫(kù)的構(gòu)建方法①鳥(niǎo)槍法：供體細(xì)胞中的DNA許多DNA片段運(yùn)載體限制酶與載體連接載入受體細(xì)胞產(chǎn)生特定性狀導(dǎo)入外源DNA擴(kuò)增目的基因分離(直接分離法)(一)從基因文庫(kù)中獲取目的基因當(dāng)前第33頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)②反轉(zhuǎn)錄法：

以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA雜交雙鏈(單鏈RNA/單鏈DNA)單鏈DNA反轉(zhuǎn)錄酶核酸酶H2.基因文庫(kù)的構(gòu)建方法DNA聚合酶雙鏈DNA(目的基因)當(dāng)前第34頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)③根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA法：

根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出相應(yīng)的信使RNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過(guò)化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測(cè)推測(cè)目的基因化學(xué)合成2.基因文庫(kù)的構(gòu)建方法當(dāng)前第35頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)鳥(niǎo)槍法反轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基酸合成DNA法操作簡(jiǎn)便廣泛使用工作量大，盲目，分離出來(lái)的有時(shí)并非一個(gè)基因?qū)Ｒ恍詮?qiáng)操作過(guò)程麻煩，mRNA很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高專一性最強(qiáng)僅限于合成核苷酸對(duì)較少的簡(jiǎn)單基因當(dāng)前第36頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)(二)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因當(dāng)前第37頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)①概念：PCR全稱為_(kāi)______________，是一項(xiàng)在生物____復(fù)制___________的核酸合成技術(shù)③條件：_______________________、_______________、___________(做啟動(dòng)子)、___________.前提條件：②原理：__________④方式：以_____方式擴(kuò)增，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對(duì)引物DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增(二)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因當(dāng)前第38頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)⑥過(guò)程：a、DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成___________b、退火（復(fù)性25℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈當(dāng)前第39頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)當(dāng)前第40頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)1.用一定的_________切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出____________。2.用_____________切斷目的基因，使其產(chǎn)生_________________。(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的______處，再加入適量___________，形成了一個(gè)重組DNA分子（重組質(zhì)粒）限制酶黏性末端同一種限制酶的黏性末端切口DNA連接酶相同當(dāng)前第41頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)質(zhì)粒DNA分子限制酶處理一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）——核心同一種(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建4.過(guò)程:當(dāng)前第42頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)5.基因表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點(diǎn)+啟動(dòng)子+目的基因+終止子+標(biāo)記基因它們有什么作用？當(dāng)前第43頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化——方法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——感受態(tài)細(xì)胞法將含有目的基因的重組載體與相應(yīng)的受體細(xì)胞放在一起培養(yǎng)，通過(guò)一定的方式進(jìn)行誘導(dǎo)，進(jìn)入受體細(xì)胞的過(guò)程。受體細(xì)胞的選擇？當(dāng)前第44頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（1）農(nóng)桿菌介紹（2）原理及適用范圍(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞當(dāng)前第45頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞（1）方法：顯微注射法（2）程序：(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞當(dāng)前第46頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞當(dāng)前第47頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞（1）思考：為什么選用微生物作為受體細(xì)胞？（2）方法：當(dāng)前第48頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞

大腸桿菌細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法是:首先用Ca2+處理細(xì)胞,以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞.第二步是將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過(guò)程.第三步目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)，隨其繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌繁殖的速度非常快，在很短的時(shí)間內(nèi)就能獲得大量的目的基因。當(dāng)前第49頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)1）將細(xì)菌用CaCl2處理，以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性。2）使含有目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞。3）目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)，隨其繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌繁殖的速度非常快，在很短的時(shí)間內(nèi)就能獲得大量的目的基因。當(dāng)前第50頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定——檢查是否成功檢測(cè)—鑒定——①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法——方法——方法——DNA分子雜交（DNA--DNA）分子雜交（mRNA--cDNA）（注意與上不同之處）抗原--抗體雜交當(dāng)前第51頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)DNA分子雜交示意圖采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒(méi)有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。當(dāng)前第52頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因探針：是一段帶有放射性同位素或熒光標(biāo)記，含有目的基因的DNA單鏈。使探針與轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。當(dāng)前第53頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)1.限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”一，基因工程的基本工具2.NDA連接酶——“分子縫合針”3.運(yùn)載體——“分子運(yùn)輸車”知識(shí)梳理：當(dāng)前第54頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)二，基因工程基本操作的四個(gè)步驟1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（并篩選）4、目的基因的檢測(cè)與鑒定當(dāng)前第55頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)（一）目的基因的獲取1、目的基因主要是指______________________編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子2、獲取目的基因的常用方法有哪些?（1）鳥(niǎo)槍法（2）反轉(zhuǎn)錄法（3）化學(xué)合成法當(dāng)前第56頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)鳥(niǎo)槍法反轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基酸合成DNA法操作簡(jiǎn)便廣泛使用工作量大，盲目，分離出來(lái)的有時(shí)并非一個(gè)基因?qū)Ｒ恍詮?qiáng)操作過(guò)程麻煩，mRNA很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高專一性最強(qiáng)僅限于合成核苷酸對(duì)較少的簡(jiǎn)單基因當(dāng)前第57頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)1.用一定的_________切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出____________。2.用_____________切斷目的基因，使其產(chǎn)生_________________。(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的______處，再加入適量___________，形成了一個(gè)重組DNA分子（重組質(zhì)粒）限制酶黏性末端同一種限制酶的黏性末端切口DNA連接酶相同當(dāng)前第58頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)質(zhì)粒DNA分子限制酶處理一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）——核心同一種(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建4.過(guò)程:當(dāng)前第59頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點(diǎn)+啟動(dòng)子+目的基因+終止子+標(biāo)記基因它們有什么作用？當(dāng)前第60頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化——方法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——感受態(tài)細(xì)胞法將含有目的基因的重組載體與相應(yīng)的受體細(xì)胞放在一起培養(yǎng)，通過(guò)一定的方式進(jìn)行誘導(dǎo)，進(jìn)入受體細(xì)胞的過(guò)程。受體細(xì)胞的選擇？篩選——利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選（標(biāo)記基因）當(dāng)前第61頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定——檢查是否成功檢測(cè)—鑒定——①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法——方法——方法——DNA分子雜交（DNA--DNA）分子雜交（RNA--cDNA）（注意與上不同之處）抗原--抗體雜交當(dāng)前第62頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)基因工程的理論基礎(chǔ)：思考？所有生物的DNA都由相同的四種脫氧核苷酸組成所有的生物共用一套遺傳密碼當(dāng)前第63頁(yè)\共有70頁(yè)\編于星期五\7點(diǎn)探究活動(dòng)：DNA分子的提取與鑒定教科書把DNA的提取與鑒定放在基因工程的內(nèi)容中，目的是讓學(xué)生理解DNA的‘提取與鑒定是開(kāi)展基因工程的基石，只有將DNA分子從細(xì)胞中提取出來(lái)，才能進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)、“切割”、插入目的基因、“縫合”、最后導(dǎo)入受體細(xì)胞使之表達(dá)……通過(guò)探究活動(dòng)培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)際操作能力和科學(xué)探究能力當(dāng)前