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文檔簡介
同工酶巨分子酶第一頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
酶是以多種形式存在在血液中的,如酶原、糖基化修飾、磷酸化、酶單分子的聚集、與免疫球蛋白結合、與脂蛋白結合、與其他蛋白質結合等等形式。酶多種形式的存在常常會引起檢測結果的混亂,并導致電泳圖譜的異常,引起結果的誤報。第二頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
同工酶的定義
3、分子結構不同1、同工酶是以多種分子形式存在于機體的酶2、催化功能相同第三頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二二、檢測同工酶的目的1、檢測同工酶活力比單測定酶的總活力更具有臟器特異性和高靈敏性等優(yōu)點,因而提高了臨床診斷價值2、早期診斷某些疾病,陽性率高,特異性強。3、可以估計病情嚴重性和判斷預后。第四頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
目前廣泛地應用于臨床的同工酶:乳酸脫氫酶同工酶
Lactatedehydrogenase,LDH肌酸激酶同工酶
Creatinekinase,CK堿性磷酸酶同工酶
Alkalinephosphatase,ALP天冬氨酸氨基轉移酶
Aspartatetransaminase,ASTγ-谷氨酰轉移酶
γ-glutamyltransferase,GGT-淀粉酶同工酶
-Amylase,AMY第五頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
同工酶的最主要特征是由遺傳基因決定的一級結構不同的多種形式的分子。正是由于一級結構的不同,高級結構(構象)也就不同;因此一種酶的各個同工酶在化學、物理化學、生物學等方面的性質也就有所差異。這些差異就提供了分析和鑒定同工酶的理論基礎。同工酶鑒定第六頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二同工酶的分析可大致分為兩步:1.精確地分離出各同工酶組分;2.測定酶的總活性和各同工酶組分的活性。對于新發(fā)現的同工酶組分還必須鑒定其真?zhèn)?、排除矯作物。第七頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二在研究同工酶的所有方法中,電泳法的使用最為廣泛。因為此法簡便、快速、分離效果良好,并且一般不會破壞酶的天然狀態(tài)。第八頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
電泳技術
1809年俄國物理學家首先發(fā)現了電泳現象,直至1937年瑞典科學家利用U型管建立了分離蛋白質的界面電泳之后,開創(chuàng)了電泳技術新紀元.各種電泳技術及儀器相繼問世,先進的電泳儀和電泳技術及豐富多彩的電泳形式使其應用什分廣泛.第九頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二電泳技術除了應用于小分子物質的分離分析外,最主要用于蛋白質﹑核酸等生物分子研究.由于電泳法設備簡單,操作方便,具有高分辯率及選擇性特點,已成為醫(yī)學檢驗中常用的技術.第十頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
幾種常用同工酶臨床意義一.肌酸激酶同工酶
(creatinekinase,)簡稱CK.國際酶學委員會的統(tǒng)一編號為EC2.7.3.2,
系統(tǒng)命名為ATP;肌酸磷酸轉移酶)
第十一頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二組織CKU/克濕重CK-MM%CK-MB%CK-BB%
骨胳肌328099<10
(腓腸肌)
骨胳肌189499<1<1
(肋間肌)
心肌62087130
(乳頭狀肌)
心肌40276~88220~2
(右心房)
腦20000100
回腸1613196
結腸1373~4<196
胃1222~41~494~95
(二)CK同工酶在人體組織的分布
第十二頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二肌酸激酶(CK)同工酶的組成
CK是由M和B兩種亞單位組成的二聚體,在細胞質內質內共有三種同工酶:CKMM,CK-MB和CK-BB。在細胞線粒體內還有另一種同工酶,稱為CK-Mt。這幾種同工酶的分子量雖然相同,但免疫特性不同,電泳遷移率也不同。
第十三頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二CK同工酶和巨CK的電泳遷移位置
第十四頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
(三)CK同工酶的臨床意義
1.急性心肌梗死
(1)CK總活性在急性心肌梗死后的4小時便開始升高,至20-30小時達高峰,3-5天后下降至基礎水平。此酶為診斷心肌梗死的一個極靈敏指標。
4小時20-30小時3-5天第十五頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二(2)CK-MB主要存在于心肌細胞內,急性心肌梗死后先于CK總活力1-2小時升高,12-20小時達峰值,如無并發(fā)癥3天后回復至正常水平,如果胸痛病人患者在48小時內CK-MB尚在正常水平活力不足總CK的2%,即可排除急性心肌梗死的診斷。
1-2小時12-20小時3天后第十六頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
(1)肌營養(yǎng)不良
骨骼肌中富含CK,以CK-MM為主,故各型肌營養(yǎng)不良均可引起CK活力升高,發(fā)病年齡越早,予后也越差。其中半數以上可檢出CK-MB,(CK-MB/CK<5%)而心電圖都無陽性發(fā)現,說明并非心肌受累。
2.神經肌肉系統(tǒng)疾病第十七頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
(2)肌肉創(chuàng)傷及肌肉注射
肌肉創(chuàng)傷可使CK活力升高,無CK-MB出現,CK-MM是骨骼肌損傷的特異指標。肌肉注射青霉素,利血平,腎上腺素等藥物期間,約有1/3的病人在12-48小時內總CK活力升高,一般可持續(xù)3-6天,檢測CK同工酶,可見主要是CK-MM占優(yōu)勢,提示這是肌肉創(chuàng)傷所至。
第十八頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二3.神經系統(tǒng)疾病
約有半數腦血管病患者CK活力明顯升高。CK同工酶僅能檢出CK-MM,而CK-BB含量甚微,這是由于CK-BB難于透過血腦屏障之故。
第十九頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第二十頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二CK亞型
CK-MM亞型:MM3─基因型、組織型M2M2
MM2─-LysM1M2
MM1─-2LysM1M1
CK-MB亞型:CK-MB1--2Lys,
CK-MB2(組織型)第二十一頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二電泳法正常參考值:
CK-MM142±6%
CK-MM231±3%
CK-MM319±5%
CK-MM3/CK-MM10.5±0.2
臨床意義:
CK-MM亞型測定對早期心肌梗死的檢出高度敏感,約有94%的病人在首次采血時即證AMI。
第二十二頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第二十三頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第二十四頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二CK-MB測定的干擾巨CK1:CK-BB-IgG(A),CK-MM-IgG(A)巨CK2:低聚線粒體CK,CK-MtCK-BB:AK:腺苷酸激酶第二十五頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第二十六頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二二.乳酸脫氫酶同工酶(LactateDehydrogenase),簡稱LDH,LD,
EC1.1.1.27
(一)組成與分布
LDH1~5H,M,MW140,000.
LDH1,2:心肌,腎,紅細胞
LDH3:肺,脾,胰,甲狀腺,腎上腺,
淋巴結
LDH4,5:骨骼肌,肝
LDHx:睪丸,精子
第二十七頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二總LDH:12~18h─3d─7~14d
LDH1:6h─24h
LDH1/LDH2>=124h
輕癥:總LDH正常,同工酶有變化
(二)LDH同工酶的臨床意義
1.
急性心肌梗死:第二十八頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二2.肝病:急肝:LDH1,2↓,LDH5↑
肝硬化:LDH2↓,LDH5↑
嚴重時可出現LDH6
3.腫瘤:M↑
100%LDH5↑
93.7%LDH4↑
66.1%LDH3↑
4.生殖細胞惡性腫瘤和腎胚細胞瘤:
LDH1↑,1>2
第二十九頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二當病人伴有心衰或發(fā)生心源性休克時,由于心泵打出的血液減少,側肢循環(huán)及心臟收縮力減弱,心博量和心排出量下降,引起全身組織缺氧,肌體產生無氧代謝,造成肝臟受損,肝細胞膜通透性增高,向血中釋放LDH5。第三十頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二AMI伴有并發(fā)癥時LDH同工酶與AMI典型圖形比較
組別NLDH1LDH2LDH3LDH4LDH5(%)
AMI3453.9±7.730.4±5.79.3±4.23.1±3.03.4±3.3AMI伴有1619.4±8.3*28.3±9.713.9±8.47.7±4.032.0±15.8*并發(fā)癥正常3028.4±5.341.0±5.019.2±4.06.8±3.54.6±3.0對照組
*AMI伴有并發(fā)癥與AMI比較P<0.01第三十一頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
充血性心力衰竭,心源性休克等是急性心肌梗死(AMI)病人發(fā)病期間的主要并發(fā)癥,也是影響病人死亡率的重要因素。
34例AMI電泳結果LDH1顯著升高,16例AMI伴有并發(fā)癥者結果LDH1偏低,LDH5升高。
第三十二頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第三十三頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第三十四頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二AspartateTransaminase,簡稱AST,GOT,EC2.6.1.1
三.天冬氨酸氨基轉移酶同工酶(一)組成與分布AST有二種同工酶,位于組織細胞的線粒體內者為ASTm,位于細胞質內者為ASTs.AST廣泛分布于人體各組織器官,此酶在人心,肝,腎和骨骼中含量特別豐富.第三十五頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
1.急性心肌梗死:
ASTm↑
2.肝病:急、慢性肝炎,活動性肝硬變
ASTm↑,評價預后
3.腫瘤:局灶性肝惡性變ASTs:ASTm=1:1
4.肌營養(yǎng)不良:均升高
(二)AST同工酶臨床意義第三十六頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第三十七頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二四.堿性磷酸酶同工酶Alkalinephosphatase簡稱:ALP,AKPEC3.1.3.1磷酸單酯磷酸水解酶膜結合糖蛋白肝,骨,腎,腸,胎盤,膽汁,白細胞第三十八頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二ALP同工酶譜
肝帶膽汁帶骨帶腸帶胎盤帶正常人++急性肝炎、肝癌+++肝硬化++佝僂病+++肝內膽汁淤積+++肝外阻塞性黃疸++∽+++++惡性腫瘤可出現++++
第三十九頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二ALP同工酶的臨床意義膽汁型ALP:
肝外阻塞性黃膽,轉移性肝癌陽性率高肝內膽汁淤積,原發(fā)性肝癌陽性率低第四十頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二膽汁型ALP在腫瘤肝轉移中的陽性率
腫瘤總例數肝轉移膽汁型ALP的陽性數例數(%)有肝轉移無肝轉移
肺癌7756(72.7)50(89.3)6(28.6)結腸癌6244(70.9)40(90.9)4(22.2)胃癌4924(48.9)20(83.3)4(16.0)胰頭癌3231(96.9)29(93.5)1(100)乳腺癌2415(62.5)13(86.7)2(22.2)骨癌194(21.1)4(100.0)0(0.0)前列腺癌157(46.6)4(57.1)2(25.0)第四十一頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二膽汁型ALP在腫瘤肝轉移中的陽性率
腫瘤總例數肝轉移膽汁型ALP的陽性數例數(%)有肝轉移無肝轉移
肺癌
7756(72.7)50(89.3)6(28.6)結腸癌6244(70.9)40(90.9)4(22.2)胃癌4924(48.9)20(83.3)4(16.0)胰頭癌3231(96.9)29(93.5)1(100)乳腺癌2415(62.5)13(86.7)2(22.2)骨癌194(21.1)4(100.0)0(0.0)前列腺癌157(46.6)4(57.1)2(25.0)第四十二頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
研究的非肝癌腫瘤病人278例,腫瘤肝轉移有181例,膽汁型ALP對診斷腫瘤肝轉移的靈敏度為88.9%,特異性為79.1%。因此膽汁型ALP對監(jiān)測腫瘤肝轉移具有較高的價值。第四十三頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二胎盤ALP:
妊娠最后三個月時ALP在血清中增加很快,分娩前突然下降,產后3~4天即消失一半,作為胎盤功能好壞的指標。第四十四頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二骨ALP:
↑:病理性成骨、破骨、生長發(fā)育不能用于鑒別非惡性骨病的惡性腫瘤骨轉移,但骨腫瘤的陽性率高。腸ALP:
正常胃及食道粘膜無ALP,當腸腺化生時,ALP可以增高,此種ALP證明是腸ALP,對早期發(fā)現胃癌有所幫助。第四十五頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二類胎盤ALP:
ReganALP:常見于睪丸、卵巢和胰腺癌NagaoALP:胰尾部腺癌和轉移性膽管腺癌認為這些類胎盤ALP是胎盤型ALP在癌組織的異位合成。第四十六頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二γ-glutamyltransferase,簡稱:γGT,GGT
當ALP增高時可用于鑒別此增高的ALP是來源于肝還是骨,或是胎盤,此點在孕婦尤為重要.
5.γ-谷氨?;D移酶同工酶第四十七頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二GGT同工酶譜
GGT1GGT2GGT3GGT4正常人+∽+++∽++肝內、外膽汁淤積引起血清膽紅素升高++∽+++肝損傷、肝功能障礙++
第四十八頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二第四十九頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二GGT與ALP同時測定可用于鑒別增高的ALP是否來自于肝病所致或來自骨的疾患,此點在兒童和孕婦尤為重要.如果ALP增高而GGT正常,幾乎可完全排除ALP肝的來源,如果二者都增加則還必須先排除一切肝外引起GGT增高的原因,待排除后,則GGT增高實際上就支持了由于肝病所致的酶增高.
第五十頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
GGT可確定酒精或藥物對肝臟潛在的危險性,酒精中毒和酒精性肝炎GGT均增高.出現GGT1者均有肝功能異常.異常深染的GGT4帶與膽紅素增高有密切關系,與肝損傷和肝功能障礙有關.
第五十一頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二ALP測定對影響膽汁淤積的肝病非常敏感,嚴重的彌漫性肝損害患者血清中ALP活性反而下降,而膽紅素恰逐漸上升,稱為酶膽分離,表示病情惡化;若酶膽同時下降病情好轉;
第五十二頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二如膽紅素逐漸下降而ALP升高提示肝細胞再生.對于原因不明的高ALP血清水平,最好測定同工酶,因ALP同工酶有組織特異性,可明確其器官來源.
第五十三頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二由于酶廣泛存在于各臟器、各組織內,在血清中升高的機理又不盡相同,因此單憑某一種酶的活性變化,很難作出獨立診斷,若同時測定一組性質不同的酶,比較酶活性的變化,就能根據酶增高或減少的“譜型”作出診斷.此種同時檢測一組酶,稱為酶譜.第五十四頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
五種酶譜
1.心肌酶譜(CK﹑LD﹑AST同工酶)2.肌酶譜(CK及其亞型﹑LD同工酶)3.肝酶譜(LD﹑AST﹑GGT﹑ALP同工酶)4.腫瘤酶譜(LD﹑GGT﹑ALP同工酶)5.胰酶譜(AMY同工酶
第五十五頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
巨分子酶鑒定
血清中有時可出現相對分子質量遠大于正常酶分子的一些酶,通常稱為巨分子酶或酶的大分子形式,簡稱為巨酶(macroenzyme)。某些巨酶具有重要的診斷價值,某些巨酶卻易導致臨床疾病的誤診。第五十六頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
巨分子酶因其分子量大,在體內不易出也不易被巨噬細胞系統(tǒng)吞噬而降解,又因其有較長的半衰期,故在血中存留時間較長。在常規(guī)生化檢測中往往易引起酶活性假性升高及同工酶的改變。它的存在干擾了酶測定的正確性,極易造成酶測定結果的錯誤判斷和臨床誤診。
巨分子酶的特點第五十七頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
巨分子酶的分子結構酶與免疫球蛋白的復合物.酶與其它蛋白質的復合物.酶亞基或酶分子之間的聚合物第五十八頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二
巨分子酶的種類巨CK巨LDH巨AST巨AMY巨GGT巨ALP第五十九頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二巨CK11.CK-BB-IgG或IgA。老年人、風濕和心臟病、肌炎患者。2.在做冠脈造影的患者中巨CK1的發(fā)生率13.8%,認為至少部分起源于血管壁。3.3例低血鉀性肌病婦女。4.1例急性橫紋肌溶解,肌肉內肉堿棕櫚酰轉移酶缺乏。5.認為巨CK1與自身免疫性疾病無明顯聯系,6.明顯健康人。第六十頁,共六十八頁,編輯于2023年,星期二巨CK21.
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