抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)

縮寫(xiě)：ATCC，美國(guó)模式菌種保藏所；CAMHB，調(diào)節(jié)過(guò)陽(yáng)離子的Mueller-Hinton肉湯；FDA，美國(guó)食品和藥品管理局；MHA，Mueller-Hinton瓊脂；MIC，最低抑菌濃度；MRS，耐甲氧西林葡萄球菌；MRSA，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌；MOD-SA，修飾的金黃色葡萄球菌；PBP，青霉素結(jié)合蛋白；PCR，聚合酶鏈反應(yīng)；QC，質(zhì)量控制；VRSA，耐萬(wàn)古霉素金黃色葡萄球菌；vanA，萬(wàn)古霉素耐藥基因。BHI，腦心浸液；AST，抗菌藥物敏感性試驗(yàn)；ATCC，美國(guó)模式菌種保藏所；BSC，生物安全柜；BSL-2，二級(jí)生物安全水平；BSL-3，三級(jí)生物安全水平；CAMHB，調(diào)節(jié)過(guò)陽(yáng)離子的MuellerHinton肉湯；CDC，疾病預(yù)防控制中心；CFU，菌落形成單位；LHB，溶解馬血；MHA，Mueller-Hinton瓊脂；MIC，最低抑菌濃度；QC，質(zhì)量控制。抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)銅綠假單胞菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基:紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物:生長(zhǎng)法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育:352°C；空氣環(huán)境

紙片擴(kuò)散法：16-18h

稀釋法：16-20h(1)對(duì)于紙片擴(kuò)散法，直徑150mm平板最大放置12只，直徑100mm平板放置5只進(jìn)行試驗(yàn)(見(jiàn)M02第9.2節(jié))。測(cè)量抑菌圈直徑（用肉眼判讀），包括紙片直徑。保

持平板在反射光照明的、非反射黑的背景上方幾英寸，肉眼觀察無(wú)明顯生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。在抑菌圈邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略

不計(jì)。

(2)用紙片擴(kuò)散法和稀釋法能可靠地測(cè)定分離于囊性纖維化病人的銅綠假單胞菌的敏感性，但在作為敏感結(jié)果報(bào)告前，應(yīng)將孵育時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)。

(3)所有抗菌藥物在延長(zhǎng)治療期間可致銅綠假單胞菌發(fā)生耐藥。因此，初次分離的敏感菌株在開(kāi)始治療后3~4不動(dòng)桿菌屬抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物：生長(zhǎng)法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境；20-24h，所有方法由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌圈內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長(zhǎng)；因此，在測(cè)量抑菌圈直徑時(shí)可忽視輕微生長(zhǎng)

（20%或較少的菌苔）而測(cè)量較明顯抑制的邊緣。（2）對(duì)四環(huán)素敏感的菌株被認(rèn)為對(duì)多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。然而，某些對(duì)四環(huán)素中介或耐藥的菌株可以對(duì)多西環(huán)素或米諾環(huán)素或二者敏感。洋蔥伯克霍爾德菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物：生長(zhǎng)法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境；所有方法，20-24h嗜麥芽窄食單胞菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物：生長(zhǎng)法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境，所有方法，20-24h由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌圈內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長(zhǎng)；因此，在測(cè)量抑菌圈直徑時(shí)可忽視輕微生長(zhǎng)（20%或較少的菌苔）而測(cè)量較明顯抑制的邊緣。氯霉素：分離于泌尿道菌株不常規(guī)報(bào)告。其他非-腸桿菌科細(xì)菌MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)(g/mL)葡萄球菌屬抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB；CAMHB+2%NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈

夫西林；CAMHB補(bǔ)充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素

瓊脂稀釋法：MHA；MHA+2%NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈夫西

林；瓊脂稀釋測(cè)試達(dá)托霉素還未被批準(zhǔn)

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境

紙片擴(kuò)散法：16-18h；24h(凝固酶陰性葡萄球菌與頭孢西丁)

稀釋法：16-20h

所有方法：苯唑西林、甲氧西林、奈夫西林和萬(wàn)古霉素需24h

試驗(yàn)溫度超過(guò)35°C可能檢測(cè)不出MRS(1)對(duì)于紙片擴(kuò)散法，直徑150mm平板最大放置12只紙片，直徑100mm平板放置5只進(jìn)行試驗(yàn)(見(jiàn)M02第9.2節(jié))。測(cè)量抑菌環(huán)直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。保持平板在反射光照明的、非反射黑的背景上方幾英寸，除外利奈唑胺、苯唑西林、萬(wàn)古霉素應(yīng)用透射光閱讀（平板正對(duì)光源）。肉眼觀察無(wú)明顯生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。在抑菌圈邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌環(huán)內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長(zhǎng)；因此，在測(cè)量抑菌環(huán)直徑時(shí)可忽視輕微生長(zhǎng)（20%或較少的菌苔）而測(cè)量較明顯抑制的邊緣。在抑菌環(huán)內(nèi)任何可辨別的菌落生長(zhǎng)提示苯唑西林、利奈唑胺或萬(wàn)古霉素耐藥。

(2)過(guò)去，將對(duì)青霉素酶穩(wěn)定的青霉素類(見(jiàn)術(shù)語(yǔ)表I)耐藥稱為“耐甲氧西林”或“耐苯唑西林”，MRSAs是指表達(dá)mecA或具有另一種甲氧西林耐藥機(jī)制，如青霉素結(jié)合蛋白與苯唑西林的親和力改變(修飾的金黃色葡萄球菌[MOD-SA]菌株)的金黃色葡萄球菌。

(3)對(duì)于耐苯唑西林金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌(MRS)，被認(rèn)為對(duì)其它-內(nèi)酰胺類藥物，即，青霉素類、-內(nèi)酰胺/-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物，頭孢類(新的“具有抗-MRSA活性的頭孢菌素”例外)和碳青霉烯類等是耐藥。這是因?yàn)榇蠖鄶?shù)文獻(xiàn)報(bào)道了MRSa.檢測(cè)金黃色葡萄球菌是否產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，青霉素紙片擴(kuò)散法抑菌圈-邊緣試驗(yàn)比nitrocefin-試驗(yàn)敏感。假如實(shí)驗(yàn)室只使用一種檢驗(yàn)β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)，則推薦青霉素抑菌圈-邊緣試驗(yàn)。然而，某些實(shí)驗(yàn)室可選擇先執(zhí)行nitrocefin-試驗(yàn)，如果此試驗(yàn)陽(yáng)性，報(bào)告β-內(nèi)酰胺酶結(jié)果陽(yáng)性(或青霉素耐藥)。假如nitrocefin試驗(yàn)是陰性，且必須用青霉素治療的情況下(如，心內(nèi)膜炎)，在報(bào)告青霉素為敏感前，應(yīng)執(zhí)行青霉素抑菌圈-邊緣試驗(yàn)。

b.3個(gè)實(shí)驗(yàn)室共研究測(cè)試了168株臨床分離的路登葡萄球菌，結(jié)果表明使用CLSI參考肉湯微量稀釋法（MIC法）和紙片擴(kuò)散法測(cè)試為耐藥菌株均產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，并且所有菌株是誘導(dǎo)nitrocefin試驗(yàn)β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性。青霉素紙片擴(kuò)散法抑菌圈-邊緣試驗(yàn)相比誘導(dǎo)nitrocefin試驗(yàn)要差些，因此，不用于路登葡萄球菌β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)。

假如實(shí)驗(yàn)室使用的是一種非CLSI推薦的參考方法，并且不確定這種方法是否能可靠檢出路登葡萄球菌對(duì)青霉素耐藥性，則在報(bào)告分離菌株為青霉素敏感前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)執(zhí)行誘導(dǎo)nitrocefin腸球菌屬抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB；CAMHB補(bǔ)充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素

瓊脂稀釋法：MHA；瓊脂稀釋法用于達(dá)托霉素不未被認(rèn)可

接種物：生長(zhǎng)法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：35±2°C；空氣環(huán)境

紙片擴(kuò)散法：16-18h

稀釋法：16-20h

所有方法：測(cè)試萬(wàn)古霉素需24h(1)紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置12只紙片，直徑100-mm平板放置5只紙片(見(jiàn)M02第9.2節(jié))。測(cè)量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方幾英寸，但萬(wàn)古霉素需用透射光閱讀（平板正對(duì)光源），肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。在抑菌圈邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。在抑菌圈內(nèi)任何可辨別的菌落生長(zhǎng)提示萬(wàn)古霉素耐藥。(2)警告：對(duì)于腸球菌屬，頭孢菌素、氨基糖苷類(除外高水平耐藥篩選)、克林霉素和復(fù)方新諾明可以在體外顯示活性但臨床上治療無(wú)效，因此，對(duì)于分離菌株這些藥物不應(yīng)報(bào)告為敏感。

(3)應(yīng)用高水平的氨基糖苷類（慶大霉素和鏈霉素）篩選試驗(yàn)，能夠預(yù)測(cè)氨芐西林、青霉素或萬(wàn)古霉素與一種氨基糖苷類抗生素之間的協(xié)同效應(yīng)。其它的氨基糖苷類不需進(jìn)行測(cè)試，因?yàn)樗鼈儗?duì)腸球菌的活性并不優(yōu)于慶大霉素和鏈霉素。(4)對(duì)于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見(jiàn)耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒(méi)有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)附錄A)。(5)氨芐西林是氨芐西林和阿莫西林的代表藥。氨芐西林的結(jié)果可用于預(yù)報(bào)不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的腸球菌對(duì)

阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦敏感性。假如菌株被確認(rèn)為糞腸球菌，氨芐西林敏感性能用于預(yù)報(bào)對(duì)亞胺培南的敏感性。(6)對(duì)青霉素敏感非產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶腸球菌可預(yù)報(bào)其對(duì)氨芐西林、阿莫西林、氨芐西林/舒巴坦、阿莫西

林/克拉維酸、哌拉西林和哌拉西林/他唑巴坦敏感。然而，對(duì)氨芐西林敏感腸球菌不能推定其對(duì)青霉素敏感。假如需要青霉素結(jié)果，必須對(duì)青霉素進(jìn)行試驗(yàn)。(7)Rx:對(duì)嚴(yán)重的腸球菌感染，如心內(nèi)膜炎，需要氨芐西林、青霉素或萬(wàn)古霉素（敏感株）加一種氨基糖苷類藥物進(jìn)行聯(lián)合治療，除非證明其對(duì)慶大霉素和鏈霉素高水平耐藥，上述藥物聯(lián)合對(duì)腸球菌可起到協(xié)同殺菌效果。(8)在腸球菌中，因產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶導(dǎo)致的對(duì)青霉素或氨芐西林耐藥較少報(bào)道。用常規(guī)紙片法或稀釋法不

能可靠檢測(cè)出因產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶而致青霉素或氨芐西林耐藥，但可使用直接的頭孢硝噻吩-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。由于罕見(jiàn)-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性腸球菌，常規(guī)不需要做此試驗(yàn)，但可用于選擇性病例。-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽(yáng)性預(yù)報(bào)菌株對(duì)青霉素、氨基和脲基青霉素耐藥(見(jiàn)術(shù)語(yǔ)表I)。萬(wàn)古霉素(9)當(dāng)測(cè)試腸球菌對(duì)萬(wàn)古霉素敏感性時(shí)，為準(zhǔn)確檢測(cè)耐藥性，應(yīng)將平板孵育24h。使用透射光檢測(cè)抑菌圈；在抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)霧狀或任何生長(zhǎng)表示耐藥。具中介抑菌圈菌株應(yīng)根據(jù)CLSI文件M07-A9描述進(jìn)行MIC試驗(yàn)。對(duì)萬(wàn)古霉素MICs8-16g/mL菌株，執(zhí)行生化試驗(yàn)來(lái)鑒別表2D后的表2D補(bǔ)充表1中“萬(wàn)古霉素耐藥”欄下列出的菌種。(10)分離于呼吸道的菌株不報(bào)告達(dá)托霉素結(jié)果。紅霉素(11)分離于泌尿道菌株不常規(guī)報(bào)告。四環(huán)素類(12)對(duì)四環(huán)素敏感菌株也被認(rèn)為對(duì)多西環(huán)素和米諾環(huán)素敏感，但是，對(duì)四環(huán)素中介或耐藥的某些株可以對(duì)多西環(huán)素或米諾環(huán)素或二者敏感。(14)Rx:利福平不能單獨(dú)用于抗菌治療。.磷霉素(15)僅用于泌尿道分離的糞腸球菌。(16)認(rèn)可的MIC試驗(yàn)方法是瓊脂稀釋法。瓊脂培養(yǎng)基中應(yīng)補(bǔ)充25μg/ml6-磷酸葡萄糖。不能使用肉湯稀釋法。(17)200-g磷霉素紙片中含50g6-磷酸葡萄糖。流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：嗜血桿菌試驗(yàn)培養(yǎng)基(HTM)

肉湯稀釋法：HTM肉湯

接種物：直接菌落懸液法：相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，從孵育過(guò)液

(20-24h更適宜)巧克力平板上挑取菌落進(jìn)行制備[見(jiàn)注

釋(2)]

孵育：35±2°C

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；16-18h

肉湯稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(1)此表中使用的嗜血桿菌僅包括流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其他嗜血桿菌試驗(yàn)和報(bào)告建議見(jiàn)CLSI文件M45。

(2)0.5McFarland菌懸液近似1~4×108CFU/mL。由于高接種物濃度可致某些β-內(nèi)酰胺類藥物出現(xiàn)假耐藥結(jié)果，尤其試驗(yàn)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶流感嗜血桿菌，建議使用者仔細(xì)練習(xí)制備菌懸液。(3)對(duì)于紙擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗(yàn)。測(cè)量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方幾英寸。肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌環(huán)邊緣。在抑菌環(huán)邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌環(huán)內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長(zhǎng)；因此，在測(cè)量抑菌環(huán)直徑時(shí)可忽視輕微生長(zhǎng)（20%或較少的菌苔）而測(cè)量較明顯抑制的邊緣。(4)從CSF中分離的流感嗜血桿菌，常規(guī)只測(cè)試氨芐西林、一種三代頭孢菌素、氯霉素和美羅培南的藥敏結(jié)果并適當(dāng)報(bào)告。(5)阿莫西林/克拉維酸、阿奇霉素、克拉霉素、頭孢克羅、頭孢丙烯、氯碳頭孢、頭孢地尼、頭孢克肟、頭孢泊肟、頭孢呋辛和泰利霉素均是口服藥物，可用于嗜血桿菌引起的呼吸道感染的經(jīng)驗(yàn)治療。這些抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)個(gè)體患者的管理用處不大，但是，適用于對(duì)嗜血桿菌屬耐藥性監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查。(6)HTM制備：首先把50mg氯化血紅素粉溶解在100mL0.01mol/LNaOH溶液中，加熱攪拌至完全溶解，制成新鮮的氯化血紅素原液。再將30mL氯化血紅素原液加到1L含5g酵母粉的Mueller-Hinton瓊脂(MHA)中，高壓滅菌并冷卻后，無(wú)菌手續(xù)加入3mLNAD原液(50mgNAD溶解在10mL蒸餾水中，過(guò)濾除菌)。(7)對(duì)于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見(jiàn)耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒(méi)有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)再確證微生物鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。(8)氨芐西林敏感性試驗(yàn)結(jié)果可用于預(yù)報(bào)阿莫西林的活性。大部分耐氨芐西林和阿莫西林的流感嗜血桿菌可產(chǎn)生TEM-型-內(nèi)酰胺酶。大多數(shù)情況下，直接-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)可以快速檢測(cè)對(duì)氨芐西林和阿莫西林的耐藥性。(9)BLNAR流感嗜血桿菌罕見(jiàn)，這類菌應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為對(duì)阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、頭孢克羅、頭孢孟多、頭孢他美、頭孢尼西、頭孢丙烯、頭孢呋辛、氯碳頭孢和哌拉西林/他唑巴坦耐藥，即使某些BLNAR菌株對(duì)上述藥物在體外顯示為敏感。四環(huán)素類(12)對(duì)四環(huán)素敏感的菌株也被認(rèn)為對(duì)多西環(huán)素和米諾環(huán)素敏感。氯霉素(13)從泌尿道分離菌株不常規(guī)報(bào)告。(14)利福平僅適用于接觸者預(yù)防。此解釋標(biāo)準(zhǔn)不適用于流感嗜血桿菌侵襲性疾病患者的治療。淋病奈瑟菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：GC瓊脂基礎(chǔ)＋1%特定的生長(zhǎng)添加劑。(紙片擴(kuò)散法不需要使用無(wú)半胱氨酸的生長(zhǎng)添加劑)。

瓊脂稀釋法：GC瓊脂基礎(chǔ)＋1%特定的生長(zhǎng)添加劑。(瓊脂稀釋法測(cè)碳青霉烯類和克拉維酸時(shí)需要使用無(wú)半胱氨酸的生長(zhǎng)添加劑。含半胱氨酸的生長(zhǎng)添加劑對(duì)稀釋法測(cè)定其他藥物結(jié)果影響不顯著)。

接種物：直接菌落懸液法，在MHB或0.9%磷酸緩沖鹽水（pH7.0）中，使用巧克力

瓊脂平板5%CO2環(huán)境孵育過(guò)夜(20-24h)生長(zhǎng)的菌落制備，濁度相當(dāng)于0.5麥

氏標(biāo)準(zhǔn)。

孵育：36±1°C(不超過(guò)37°C)；5%CO2；所有方法，20-24h(1)對(duì)于紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗(yàn)。對(duì)某些藥物，如,喹諾酮類或頭孢菌素類，每只平板只能放置2~3只紙片進(jìn)行測(cè)試。測(cè)量抑菌圈直徑（用肉眼判讀），包括紙片直徑。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方幾英寸，肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌環(huán)邊緣。在抑菌環(huán)邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。(2)用體外試驗(yàn)呈現(xiàn)產(chǎn)生“中介”結(jié)果的頭孢美唑、頭孢替坦、頭孢西丁和大觀霉素治療淋病瑟奈菌感染的臨床療效是未知的。(3)紙片擴(kuò)散法測(cè)試淋病瑟奈菌，某種抗菌藥物試驗(yàn)結(jié)果是“中介”，提示或是技術(shù)問(wèn)題，需要重復(fù)試驗(yàn)，或者是在處理具有上述抑菌圈的菌株時(shí)缺乏臨床經(jīng)驗(yàn)。對(duì)于頭孢美唑、頭孢替坦、頭孢西丁和大觀霉素以外的藥物產(chǎn)生“中介”的菌株，已有文獻(xiàn)報(bào)道其臨床治愈率(85%-95%)低于敏感菌株治愈率(>95%)。(4)推薦的測(cè)試淋病奈瑟菌的培養(yǎng)基是含1%特定的生長(zhǎng)添加劑的GC瓊脂。此添加劑(1升水中加入1.1gL-半胱氨酸、0.03g鹽酸鳥(niǎo)嘌呤、3mg鹽酸硫胺、13mg對(duì)氨基苯甲酸(PABA)、0.01g維生素B12、0.1g輔羧酶、0.25gNAD、1.0g腺嘌呤、10gL-谷氨酰胺、100g葡萄糖和0.02g硝酸鐵)是在GC瓊脂高壓滅菌后加入。(5)對(duì)于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見(jiàn)耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒(méi)有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)附錄A)。(6)β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性可預(yù)報(bào)分離菌株對(duì)青霉素、氨芐西林和阿莫西林耐藥。(7)β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)可檢測(cè)淋病奈瑟菌對(duì)青霉素的一種耐藥機(jī)制，也可以提供流行病學(xué)信息。染色體介導(dǎo)的耐藥僅可通過(guò)紙片擴(kuò)散法或瓊脂稀釋MIC法檢測(cè)出來(lái)。(8)淋病奈瑟菌對(duì)10單位的青霉素紙片抑菌圈直徑≤19mm，很可能是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶的菌株。但由于β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)可快速、準(zhǔn)確檢出這種質(zhì)粒介導(dǎo)的青霉素耐藥性，所以優(yōu)于其它敏感性試驗(yàn)方法。(10)淋病奈瑟菌對(duì)30g四環(huán)素紙片抑菌圈直徑19mm，常提示這是一株質(zhì)粒介導(dǎo)的四環(huán)素耐藥的淋病奈瑟菌(TRNG)。此菌株的耐藥性應(yīng)用稀釋試驗(yàn)(MIC16g/mL)來(lái)確證。肺炎鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯稀釋法：含LHB(2.5-5%v/v)CAMHB

(見(jiàn)M07-A9LHB制備說(shuō)明)

瓊脂稀釋法：含綿羊血(5%v/v)MHA；藥敏試驗(yàn)分委會(huì)近期未對(duì)瓊脂稀釋法

進(jìn)行研究和評(píng)估。

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，使用綿羊血平板上過(guò)夜(18-20h)

生長(zhǎng)菌落制備。

孵育：35±2°C

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；20-24h

稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(瓊脂稀釋法需要放CO2環(huán)境)(1)對(duì)于紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗(yàn)。測(cè)量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌環(huán)邊緣。不測(cè)量溶血抑制圈。移去平板蓋反射光照明瓊脂平板，從平板表面上方測(cè)量抑菌環(huán)直徑。在抑菌環(huán)邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌環(huán)內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長(zhǎng)；因此，在測(cè)量抑菌環(huán)直徑時(shí)可忽視輕微生長(zhǎng)（20%或較少的菌苔）而測(cè)量較明顯抑制的邊緣。(2)阿莫西林、氨芐西林、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢呋辛、厄他培南、亞胺培南和美羅培南可用于肺炎鏈球菌引起感染的治療；然而，對(duì)這些藥物紙片擴(kuò)散法敏感試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果不可靠。最好用MIC方法測(cè)定這些藥物的體外活性。(3)從腦脊液中分離的肺炎鏈球菌應(yīng)當(dāng)使用可靠的MIC方法(如CLSIM07-A9文件所描述)測(cè)試青霉素、頭孢噻肟或頭孢曲松、美羅培南，并常規(guī)報(bào)告。對(duì)萬(wàn)古霉素的敏感性可使用MIC或紙片法來(lái)測(cè)定。(4)對(duì)于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見(jiàn)耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒(méi)有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)附錄A)。青霉素類(5)對(duì)于非腦膜炎分離株,青霉素MIC≤0.06g/mL(或苯唑西林抑菌圈直徑≥20mm)能預(yù)報(bào)對(duì)下列β-內(nèi)酰胺類藥物的敏感性：氨芐西林(口服或注射)、氨芐西林-舒巴坦、阿莫西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢克羅、頭孢地尼、頭孢托侖、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢丙烯、頭孢洛林、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢呋辛、多利培南、厄他培南、亞胺培南、氯碳頭孢、美羅培南和青霉素(口服或注射)。(6)苯唑西林抑菌圈直徑20mm肺炎鏈球菌對(duì)青霉素是敏感的(MIC0.06g/mL)。苯唑西林抑菌圈直徑≤19mm分離株，應(yīng)測(cè)定青霉素和頭孢噻肟或頭孢曲松或美羅培南MICs。由于抑菌圈直徑≤19mm可發(fā)生在青霉素耐藥、中介或某些敏感菌株中。苯唑西林抑菌圈直徑≤19mm分離株，未測(cè)定青霉素MIC，則不報(bào)告青霉素耐藥。青霉素注射劑(非腦膜炎)(7)Rx:青霉素MICs≤2μg/mL肺炎鏈球菌引起的非腦膜炎感染的治療，腎功能正常成年人每4h靜脈給藥至少200萬(wàn)單位(每天1200萬(wàn)單位)。MIC為4μg/mL中介株，每天需1800-2400萬(wàn)單位青霉素劑量。(8)CSF外分離的所有菌株，應(yīng)按腦膜炎和非腦膜炎解釋標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告結(jié)果。青霉素注射劑(腦膜炎)(9)Rx:使用青霉素治療腦膜炎，需用最大劑量靜脈給藥進(jìn)行治療(如，腎功能正常成年人每4h靜脈給藥至少300萬(wàn)單位)。(15)Rx:使用頭孢噻肟和頭孢曲松治療腦膜炎需用最大劑量。大環(huán)內(nèi)酯類(18)測(cè)試紅霉素可以預(yù)報(bào)菌株對(duì)阿奇霉素、克拉霉素和地紅霉素的敏感和耐藥性。(19)從泌尿道分離的菌株不常規(guī)報(bào)告。四環(huán)素類(20)對(duì)四環(huán)素敏感菌株被認(rèn)為對(duì)多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。(21)對(duì)左氧氟沙星敏感肺炎鏈球菌分離株可預(yù)報(bào)其對(duì)吉米沙星和莫西沙星敏感。然而，對(duì)吉米沙星和莫西沙星敏感肺炎鏈球菌不能推定其對(duì)左氧氟沙星敏感。β-溶血鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯稀釋法：含LHB(2.5%to5%v/v)CAMHB；CAMHB需補(bǔ)充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素(見(jiàn)M07-A9LHB制備說(shuō)明)

瓊脂稀釋法：含綿羊血(5%v/v)MHA；藥敏試驗(yàn)分委會(huì)近期未對(duì)瓊脂稀釋法進(jìn)行研究和評(píng)估。

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，使用綿羊血平板上過(guò)夜(18-20h)生長(zhǎng)菌落制備。

孵育：352°C;

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；20-24h

稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(瓊脂稀釋法需放CO2環(huán)境)(1)對(duì)于紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗(yàn)。測(cè)量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。不測(cè)量溶血抑制圈。移去平板蓋反射光照明瓊脂平板，從平板表面上方測(cè)量抑菌圈直徑。在抑菌圈邊緣需借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。(2)本表中，β-溶血群包括具有A(化膿鏈球菌)、C或G群抗原形成較大菌落的化膿性鏈球菌及具有B群(無(wú)乳鏈球菌)抗原的菌株。具有A、C、F或G群抗原（咽峽炎鏈球菌，以前稱為“米勒鏈球菌”）形成較小菌落β-溶血的菌株被分到草綠色鏈球菌中。應(yīng)使用草綠色鏈球菌解釋標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)表2H-2)。(3)青霉素和氨芐西林可用于治療β-溶血鏈球菌感染的選擇用藥。由于在β-溶血鏈球菌中非敏感株(即，青霉素MICs＞0.12和氨芐西林MICs>0.25μg/ml)極其罕見(jiàn)，在化膿鏈球菌中還未見(jiàn)報(bào)道,因此，F(xiàn)DA批準(zhǔn)用于治療β-溶血鏈球菌感染的青霉素和其他β-內(nèi)酰胺類藥物，在臨床常規(guī)工作中不需要進(jìn)行敏感性試驗(yàn)。假如試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)任何非敏感β-溶血鏈球菌菌株應(yīng)重新鑒定和試驗(yàn)，如果確證為非敏感株，應(yīng)送交公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室（進(jìn)一步說(shuō)明見(jiàn)附錄A）。(4)β-溶血鏈球菌的解釋標(biāo)準(zhǔn)是基于各菌種的群體分布、抗菌藥物的藥代動(dòng)力學(xué)、以前出版的文獻(xiàn)以及分會(huì)某些委員的臨床經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上提議的。對(duì)許多藥物還沒(méi)有系統(tǒng)地收集到臨床數(shù)據(jù)用于折點(diǎn)的評(píng)估。(5)對(duì)于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見(jiàn)耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒(méi)有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)附錄A)。青霉素類(6)對(duì)下列菌群，青霉素敏感的菌株可認(rèn)為對(duì)下列抗菌藥物也敏感，當(dāng)這些藥物用于其批準(zhǔn)的指征時(shí)，不需要再測(cè)試這些藥物。β-溶血鏈球菌(A、B、C、G群):氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢吡肟、頭孢拉定、頭孢噻吩、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢唑肟、亞胺培南、厄他培南和美羅培南。此外，僅對(duì)A群鏈球菌還包括：頭孢克羅、頭孢地尼、頭孢丙烯、頭孢布烯、頭孢呋辛、頭孢泊肟和頭孢匹林。(8)分離于呼吸道菌株不報(bào)告達(dá)托霉素結(jié)果。大環(huán)內(nèi)酯類(9)測(cè)試紅霉素可以預(yù)報(bào)菌株對(duì)阿奇霉素和地紅霉素的敏感和耐藥性。(10)從泌尿道分離的菌株不常規(guī)報(bào)告。(11)Rx:分娩期婦女預(yù)防B群鏈球菌感染用藥，推薦用青霉素或氨芐西林。低危險(xiǎn)性青霉素過(guò)敏的婦女推薦用頭孢唑啉，而高危險(xiǎn)青霉素過(guò)敏者，建議使用克林霉素。青霉素、氨芐西林和頭孢唑啉敏感的B群鏈球菌，可對(duì)克林霉素和/或紅霉素耐藥。因此，當(dāng)從青霉素嚴(yán)重過(guò)敏（高危過(guò)敏）的妊娠婦女分離到B群鏈球菌時(shí)，應(yīng)對(duì)紅霉素和克林霉素(包括誘導(dǎo)型克林霉素耐藥)進(jìn)行試驗(yàn),并僅報(bào)告克林霉素結(jié)果。四環(huán)素類(12)對(duì)四環(huán)素敏感的菌株被認(rèn)為對(duì)多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。(13)誘導(dǎo)型克林霉素耐藥可通過(guò)使用D-抑菌圈紙片擴(kuò)散法和肉湯微量稀釋試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。草綠色溶血鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯稀釋法：含LHB(2.5%to5%v/v)CAMHB；CAMHB需補(bǔ)充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素(見(jiàn)M07-A9LHB制備說(shuō)明)

瓊脂稀釋法：含綿羊血(5%v/v)MHA；藥敏試驗(yàn)分委會(huì)近期未對(duì)瓊脂稀釋法進(jìn)行研究和評(píng)估。

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，使用綿羊血平板上過(guò)夜(18-20h)生長(zhǎng)菌落制備。

孵育：352°C;

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；20-24h

稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(瓊脂稀釋法需放CO2環(huán)境)(1)對(duì)紙片擴(kuò)散法，測(cè)量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。肉眼觀察無(wú)明顯可見(jiàn)生長(zhǎng)的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。不測(cè)量溶血抑制圈。移去平板蓋反射光照明瓊脂平板，從平板表面上方測(cè)量抑菌圈直徑。在抑菌圈邊緣需借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。(2)草綠色鏈球菌包括下列五個(gè)群，每群中含有幾個(gè)菌種：變異鏈球菌群、唾液鏈球菌群、牛鏈球菌群、咽峽炎鏈球菌群(以前的"米勒鏈球菌"群)和緩癥鏈球菌群。咽峽炎鏈球菌群包括具有A、C、F和G抗原形成小菌落的β-溶血鏈球菌。每群中所包括菌種的詳細(xì)信息，請(qǐng)參見(jiàn)最近的臨床微生物學(xué)文獻(xiàn)。(3)非肺炎鏈球菌的其他鏈球菌的解釋標(biāo)準(zhǔn)是基于各菌種的群體分布、抗菌藥物的藥代動(dòng)力學(xué)、以前出版的文獻(xiàn)以及分會(huì)某些委員的臨床經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上提議的。對(duì)許多藥物還缺乏系統(tǒng)的臨床數(shù)據(jù)用于評(píng)估其折點(diǎn)。(4)對(duì)于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見(jiàn)耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒(méi)有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)附錄A)。(5)分離于正常無(wú)菌部位的草綠溶血鏈球菌(如，CSF、血液和骨髓)應(yīng)使用MIC法測(cè)試青霉素的敏感性。(6)Rx:青霉素或氨芐西林中介菌株，需與一種氨基糖苷類藥物聯(lián)合進(jìn)行治療，起殺菌作用。大環(huán)內(nèi)酯類(8)測(cè)試紅霉素可以預(yù)報(bào)菌株對(duì)阿奇霉素、克拉霉素和地紅霉素的敏感和耐藥性。(9)從泌尿道分離的菌株不常規(guī)報(bào)告。四環(huán)素類(10)對(duì)四環(huán)素敏感菌株被認(rèn)為對(duì)多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。腦膜炎奈瑟菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯微量稀釋法：補(bǔ)充LHB(2.5%to5%v/v)(見(jiàn)M07-A9LHB制備)的CAMHB

瓊脂稀釋法：補(bǔ)充綿羊血(5%v/v)的MHA接種物：直接菌落懸液法，從巧克力瓊脂上挑取35°C孵育20-24h菌落制備；5%CO2；相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。綿羊血平板上生長(zhǎng)的菌落可用于接種物的制備。然而，從綿羊血平板制備0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)菌懸液，實(shí)際含量大約低于50%CFU/mL。在制備最終稀釋濃度接種板條前，應(yīng)按要求進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)

孵育：352°C；5%CO2；20-24h。(1)警告：應(yīng)在生物安全柜（BSC）中執(zhí)行所有腦膜炎奈瑟菌對(duì)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)。在BSC外制作腦膜炎奈瑟菌菌懸液罹患腦膜炎球菌疾病風(fēng)險(xiǎn)增高。實(shí)驗(yàn)室獲得性腦膜炎球菌疾病有50%致死率。暴露于含腦膜炎奈瑟菌液滴或氣溶膠是實(shí)驗(yàn)室獲得性感染最可能的風(fēng)險(xiǎn)因素。當(dāng)對(duì)腦膜炎奈瑟菌分離株執(zhí)行微生物學(xué)程序時(shí)(包括AST)，要求操作人員嚴(yán)防液滴或氣溶膠。(2)假如無(wú)BSC，應(yīng)盡量減少對(duì)這種分離菌處理，通常僅限制于石炭酸鹽水處理后的革蘭染色或血清鑒定，操作時(shí)穿工作服和戴手套，并在防濺板后面工作。處理高度潛在產(chǎn)生液滴或氣溶膠活動(dòng)和涉及生產(chǎn)大量或高濃度感染材料時(shí)，應(yīng)在BSL-3實(shí)驗(yàn)室使用防護(hù)設(shè)施、程序及設(shè)備。假如達(dá)不到BSL-2或BSL-3設(shè)施和設(shè)備要求，應(yīng)將分離株送交至少具有BSL-2設(shè)施的參考或公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室。(3)通常對(duì)暴露于潛在腦膜炎奈瑟菌氣溶膠的實(shí)驗(yàn)室工作人員，根據(jù)疾病預(yù)防和控制中心(CDC)預(yù)防接種咨詢委員會(huì)當(dāng)前建議()，應(yīng)考慮預(yù)防接種。接種疫苗可以降低但不能消除感染風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)樗⒎?00%有效，對(duì)常見(jiàn)引起實(shí)驗(yàn)