乙肝核心抗原的檢測(cè)與應(yīng)用

HBcAg的檢測(cè)(jiǎncè)與應(yīng)用

檢驗(yàn)科

胡亞遠(yuǎn)

第一頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件摘要(zhāiyào)

HBcAg存在于Dane顆粒的核心，是HBV的結(jié)構(gòu)蛋白即病毒核殼蛋白，具有重要的生物學(xué)特性和臨床病理意義，HBcAg由HBV基因組的C開(kāi)放讀碼區(qū)（ORF）編碼，具有高度免疫原性，對(duì)HBcAg的免疫應(yīng)答在病毒清除中有重要作用。血清HBcAg陽(yáng)性可提供肝內(nèi)HBV合成的信息，是病毒存在的直接標(biāo)志，HBcAg感染的肝細(xì)胞是細(xì)胞免疫效應(yīng)攻擊的靶細(xì)胞，肝細(xì)胞溶解后HBcAg可直接釋放入血，故能直接反映肝細(xì)胞損害和病情進(jìn)展的程度。檢測(cè)肝組織HBcAg有助于確定乙型肝炎病原學(xué)診斷和評(píng)估肝細(xì)胞壞死炎性活動(dòng)的程度及病變發(fā)展的趨向，推測(cè)慢性乙型肝炎的預(yù)后。血清和肝組織HBcAg檢測(cè)具有多種實(shí)用價(jià)值，值得(zhídé)推薦。

第二頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件0引言(yǐnyán)

乙型肝炎病毒（HBV）是嗜肝DNA病毒，完整的HBV顆粒又稱Dane顆粒，球形，直徑約42urn。HBV核心抗原（HepatitisBCoreAntigen，HBcAg）存在于Dane顆粒的核心，是HBV的結(jié)構(gòu)(jiégòu)蛋白即病毒核殼蛋白，主要存在于受感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，它反映血清中Dane顆粒的存在及肝內(nèi)HBV的復(fù)制。存在于乙型肝炎患者血液和肝組織內(nèi)的HBcAg具有重要的生物學(xué)特性和臨床病理意義。

第三頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

1生物學(xué)特性(tèxìng)1.1一般特性(tèxìng)

HBcAg由HBV基因組的C開(kāi)放讀碼區(qū)（ORF）編碼，從第二個(gè)ATG（1901nt）起始翻譯（終止密碼子在2458nt）。HBcAg有保守的三維結(jié)構(gòu)，可因血清型不同(bùtónɡ)而有183-185個(gè)氨基酸殘基（aa），相對(duì)分子質(zhì)量Mr21,000，180個(gè)HBcAg形成27nrn的正20面體以構(gòu)成核心顆粒。HBV核心部分含有環(huán)狀雙股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和e抗原（HBeAg），是病毒復(fù)制的主體。HBcAg包裝HBVDNA，在病毒成熟過(guò)程中起重要作用。HBcAg己被證明含有HBV特異性DNA聚合酶，是HBV復(fù)制的標(biāo)志。

第四頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

1.1一般(yībān)特性

HBcAg可在受染的肝細(xì)胞核中查到，但它主要在胞質(zhì)中產(chǎn)生，由胞核定位序列（nuclearlocalizationsequences，NLS）介導(dǎo)HBcAg進(jìn)人細(xì)胞核中。胞核定位序列位于HBcAg的羧基末端區(qū)（C端區(qū)）第145-156位和第172-183位的氨基酸序列，具有與細(xì)胞核特異性結(jié)合，并將與之相連(xiānɡlián)的蛋白或DNA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中的功能。

第五頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件1.2免疫(miǎnyì)反應(yīng)

HBcAg具有高度免疫原性，在T細(xì)胞和B細(xì)胞水平上，HBcAg的抗原性較HBeAg強(qiáng)100倍，幾乎所有HBV感染者都產(chǎn)生抗-HBc，同時(shí)有T細(xì)胞免疫應(yīng)答。對(duì)HBcAg的免疫應(yīng)答在病毒清除中可能有重要作用。這對(duì)HBcAgDNA的疫苗(yìmiáo)研究有重要的指導(dǎo)意義。

第六頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

1.2免疫(miǎnyì)反應(yīng)

Th細(xì)胞根據(jù)其的分泌細(xì)胞因子不同可分為Th1和Th2亞群。Th1細(xì)胞主要產(chǎn)生白介素-2（IL-2），干擾素γ（IFNγ）和腫瘤(zhǒngliú)壞死因子α（TNFα）等促進(jìn)細(xì)胞免疫反應(yīng)；Th2細(xì)胞主要產(chǎn)生白介素-6（IL-6）、白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）等促進(jìn)體液免疫反應(yīng)。Th1和Th2細(xì)胞通過(guò)分泌的細(xì)胞因子相互下調(diào)對(duì)方的生長(zhǎng)分化，刺激自身的增生。

第七頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

1.2免疫(miǎnyì)反應(yīng)

機(jī)體的Th1型免疫反應(yīng)可促進(jìn)病原體的清除(qīngchú)，而Th2型免疫反應(yīng)則可加重機(jī)體的病理?yè)p害，在HBcAg誘導(dǎo)下，外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）產(chǎn)生Th1類細(xì)胞因子量明顯增高；在HBeAg誘導(dǎo)下，Th2類細(xì)胞因子量明顯增高。慢性HBV感染進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)治療的一個(gè)目標(biāo)就是使HBeAg特異性T細(xì)胞由Th2細(xì)胞主導(dǎo)型轉(zhuǎn)化為Th1細(xì)胞型，HBcAg有望打破HBeAg誘導(dǎo)的免疫耐受狀態(tài)而增強(qiáng)Th1細(xì)胞優(yōu)勢(shì)表達(dá)達(dá)到治療的目的。慢性乙型肝炎患者和HBV慢性攜帶者體內(nèi)針對(duì)HBV的特異性CTL應(yīng)答明顯低下，糾正這種CTL低反應(yīng)狀態(tài)，對(duì)于機(jī)體有效地清除HBV至關(guān)重要。

第八頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

1.2免疫(miǎnyì)反應(yīng)

DNA疫苗（基因疫苗）是近幾年免疫學(xué)和分子生物學(xué)研究的新興領(lǐng)域，它作為一種全新的高效免疫方法，己在許多難治性感染性疾病(jíbìng)、自身免疫性疾病(jíbìng)、過(guò)敏性疾病(jíbìng)和腫瘤性疾病(jíbìng)的預(yù)防及治療領(lǐng)域顯示出較好的應(yīng)用前景。DNA疫苗可刺激機(jī)體特異性CTL功能的特性給HBV慢性持續(xù)感染的治療帶來(lái)新的希望。

第九頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件1.2免疫(miǎnyì)反應(yīng)

采用治療性疫苗打破宿主對(duì)HBV的免疫耐受狀態(tài)來(lái)治療慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒攜帶者是一新的有效途徑。HBV核心抗原區(qū)AA1-AA151段含有多個(gè)不連續(xù)的抗原表位，對(duì)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫均具有(jùyǒu)重要作用。Kuhober和Geissieretal作了HBcAgDNA疫苗肌內(nèi)注射法免疫小鼠的初步觀察。該DNA疫苗具有良好的細(xì)胞免疫原性，確可刺激宿主產(chǎn)生較強(qiáng)的CTL反應(yīng)。這一結(jié)果為我們進(jìn)一步探索該DNA疫苗在治療主要因機(jī)體CTL功能低下所致HBV慢性持續(xù)感染方面的應(yīng)用前景奠定了初步的實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。

第十頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

2臨床應(yīng)用(yìngyòng)

2.1血清HBcAg

HBsAg、HBeAg、抗-HBc等免疫學(xué)指標(biāo)都是體內(nèi)存在乙型肝炎病毒顆粒的間接標(biāo)志，而HBcAg則是HBV存在的直接標(biāo)志。所以，HBcAg測(cè)定更能反映HBV的存在及其復(fù)制程度(chéngdù)，比其他各種免疫學(xué)指標(biāo)更靈敏、更特異。HBcAg是乙型肝炎病毒（HBV）的核心成分，若在血清中檢出HBcAg則說(shuō)明有HBV復(fù)制。

第十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

血中的HBcAg是作為Dane顆粒內(nèi)部成分存在，極少有游離的HBcAg，故用常規(guī)方法不易檢出，在血清中不能直接檢出HBcAg，需加用開(kāi)殼劑，使HBcAg釋放于溶液中然后進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)HBcAg，目前多采用間接(jiànjiē)的方法，即首先在試管內(nèi)將Dane顆粒沉淀，再用裂解劑裂解Dane顆粒外殼，使HBcAg暴露游離，并經(jīng)過(guò)多次洗滌處理后，用放免或酶免方法檢測(cè)。如用EIA微板法檢測(cè)血清HBcAg，被檢標(biāo)本不須任何處理，直接在微孔板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)用于臨床，可與乙型肝炎病毒標(biāo)志物同步檢測(cè)。

檢測(cè)(jiǎncè)

第十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

血HBcAg與HBsAg的關(guān)系(guānxì)

HBcAg出現(xiàn)的陽(yáng)性率與HBsAg的出現(xiàn)密切相關(guān)，往往HBcAg（＋）與HBsAg（＋）同時(shí)存在，而HBsAg（＋）時(shí)不一定(yīdìng)會(huì)出現(xiàn)HBcAg（＋）?？?HBs的出現(xiàn)并不標(biāo)志著HBV復(fù)制的中止，而是復(fù)制水平減低。不能以HBsAg陰性就排除HBV感染，臨床上HBsAg陰性的患者，只要HBcAg檢出陽(yáng)性，說(shuō)明仍有乙型肝炎病毒復(fù)制。以往認(rèn)為血清中僅HBsAg陽(yáng)性者，病毒為非復(fù)制相，無(wú)傳染性，但這種患者中，也有檢測(cè)出HBcAg、HBVDNA陽(yáng)性者，故判斷單項(xiàng)血清HBsAg陽(yáng)性者的傳染性時(shí)應(yīng)慎重。

第十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件血HBcAg與e系統(tǒng)(xìtǒng)的關(guān)系

HBeAg陽(yáng)性是HBV持續(xù)高水平復(fù)制和傳染性強(qiáng)的標(biāo)志，其與HBcAg、HBVDNA密切相關(guān)，并具有明顯的平行關(guān)系。多年來(lái)，一直認(rèn)為e抗原是復(fù)制標(biāo)記(biāojì)物，由于HBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物，以可溶性蛋白形式存在，在結(jié)構(gòu)上不及HBcAg與病毒顆粒關(guān)系密切，對(duì)判斷病毒復(fù)制、評(píng)估傳染性不及HBcAg敏感可靠。

第十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件血HBcAg與e系統(tǒng)(xìtǒng)的關(guān)系

一般認(rèn)為，當(dāng)HBeAg/抗-HBe轉(zhuǎn)換后，HBV復(fù)制趨于減少，沒(méi)有傳染性或傳染性很小。HBeAg被公認(rèn)為是HBV復(fù)制的標(biāo)志物。但部分陰性者HBeAg的血清中仍可檢出HBcAg和（或）HBVDNA，說(shuō)明HBeAg的表達(dá)可能不是HBV復(fù)制的必然結(jié)果，對(duì)HBeAg陰性感染者的帶毒狀態(tài)(zhuàngtài)及抗-HBe表達(dá)的臨床意義必須重新認(rèn)識(shí)，不能忽視其具有傳染性的可能。

第十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

血HBcAg與HBVDNA、HBVDNA-P的關(guān)系(guānxì)

在慢性乙型肝炎患者中，血HBcAg與血HBVDNA有很好的相關(guān)性；而在急性期，尤其是在肝損害極期時(shí)，往往血HBcAg陽(yáng)性，而血HBVDNA陰性，考慮為HBcAg從受免疫損傷的被感染的肝細(xì)胞內(nèi)釋放入血，這種情況甚至在病毒已終止(zhōngzhǐ)復(fù)制后也可出現(xiàn)。對(duì)HBsAg慢性攜帶狀態(tài)患者，判斷HBV復(fù)制及傳染性，HBcAg的敏感性最高，HBVDNA和HBVDNA-P次之，HBeAg敏感性低。

第十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件不同(bùtónɡ)肝病的檢出率

慢性活動(dòng)性肝炎中血HBcAg陽(yáng)性率明顯高于ASC（無(wú)癥狀病毒攜帶者），說(shuō)明血HBcAg陽(yáng)性較多見(jiàn)于病變活動(dòng)較重的慢性肝炎(ɡānyán)而較少見(jiàn)于病變較靜止的ASC。血清中的HBcAg陽(yáng)性與肝臟病變活動(dòng)程度有關(guān)，且對(duì)估計(jì)預(yù)后有很好價(jià)值。HBcAg檢出結(jié)果是：肝硬化＞慢性乙型肝炎中型＞慢性乙型肝炎輕型。

第十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件檢測(cè)(jiǎncè)血HBcAg的臨床意義（1）對(duì)血液內(nèi)HBV的開(kāi)殼處理，能直接檢測(cè)HBcAg，能比HBeAg更客觀地反映血HBV的存在，以及作出數(shù)量多少的判斷，可替代HBeAg而作為病毒復(fù)制和傳染性的敏感指標(biāo)，是病毒存在的直接標(biāo)志。它與HBV復(fù)制標(biāo)志呈正相關(guān)，可以反映HBV活動(dòng)(huódòng)的復(fù)制程度。HBcAg與乙型肝炎病毒其他五項(xiàng)標(biāo)志物相比更是反映HBV復(fù)制的直接證據(jù)。它可與其他的HBV血清學(xué)標(biāo)志物起到相互配合和相互補(bǔ)充的作用。

第十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件檢測(cè)(jiǎncè)血HBcAg的臨床意義

（2）有助于對(duì)乙型肝炎病情和預(yù)后的判斷，HBcAg感染的肝細(xì)胞是細(xì)胞免疫效應(yīng)攻擊的靶細(xì)胞，肝細(xì)胞溶解后HBcAg可直接釋放入血，故能直接反映肝細(xì)胞損害和病情進(jìn)展的程度。在急性乙型肝炎早期HBcAg亦達(dá)高峰值，而且病情嚴(yán)重者的HBcAg水平也相應(yīng)(xiāngyīng)提高。慢性乙型肝炎患者，血HBcAg陰性者比陽(yáng)性者有明顯的臨床及生化指標(biāo)的改善。HBcAg含量與肝臟損害的情況有關(guān)，有助于抗病毒藥物及免疫治療的療效評(píng)價(jià)。

第十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件檢測(cè)(jiǎncè)血HBcAg的臨床意義

（3）從理論上講，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)法比固相放射免疫法靈敏度高，但實(shí)際上可出現(xiàn)HBcAg陽(yáng)性而HBVDNA陰性的結(jié)果。因此，兩種檢測(cè)方法可以互補(bǔ)使用，以減少漏檢。在不具備(jùbèi)PCR檢測(cè)條件的單位，以酶聯(lián)（ELISA）法試劑盒在檢測(cè)血清HBV五項(xiàng)標(biāo)志的同時(shí)，檢測(cè)HBcAg不僅能進(jìn)一步了解病毒的復(fù)制情況，還可了解肝細(xì)胞損害和病情進(jìn)展的程度，且檢測(cè)費(fèi)用低廉，有臨床實(shí)用價(jià)值。

第二十頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件檢測(cè)(jiǎncè)血HBcAg的臨床意義（4）在對(duì)獻(xiàn)血員的篩選中，單憑HBsAg的測(cè)定來(lái)判斷是否受HBV感染也是不夠的，會(huì)漏診HBsAg陰性而HBcAg和抗-HBc陽(yáng)性的乙型肝炎患者，只有(zhǐyǒu)三者同時(shí)檢測(cè)，才能更好地診斷乙型肝炎并防止在輸血中傳播，降低輸血后肝炎的發(fā)生率。第二十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件2.2肝組織(zǔzhī)HBcAg分布

HBcAg主要存在(cúnzài)于HBV顆粒和受染的肝細(xì)胞中，HBV復(fù)制時(shí)HBcAg表達(dá)于肝細(xì)胞內(nèi)，分胞核型、胞質(zhì)型和胞膜型。Delladetsimaetal發(fā)現(xiàn)膽管上皮細(xì)胞也是HBV的適合宿主，HBV能夠在其中復(fù)制并表達(dá)HBcAg和HBsAg抗原。

第二十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝內(nèi)HBcAg與HBVDNA關(guān)系(guānxì)

肝內(nèi)HBcAg與HBVDNA的分布區(qū)域常較一致，有的肝細(xì)胞可同時(shí)檢出HBcAg和HBVDNA，但多數(shù)HBVDNA（＋）肝細(xì)胞并不同時(shí)含有HBcAg。HBV高復(fù)制期HBcAg以胞核表達(dá)為主，無(wú)或很少在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)；而低復(fù)制期時(shí)相反，HBcAg在肝細(xì)胞核內(nèi)而不是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá)程度(chéngdù)能夠精確地反映慢性乙型肝炎患者的病毒復(fù)制水平。肝HBcAg與血清HBVDNA水平呈正相關(guān)。經(jīng)干擾素α治療后的慢性活動(dòng)性乙型肝炎患者，HBcAg發(fā)生從核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)換。第二十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝內(nèi)HBcAg與HBeAg關(guān)系(guānxì)

HBcAg與HBeAg常同時(shí)表達(dá)在肝細(xì)胞內(nèi)，但在亞細(xì)胞水平有重要差異。在病毒活躍復(fù)制的ASC，常有較強(qiáng)的HBcAg胞核表達(dá)和HBeAg胞質(zhì)表達(dá)；活動(dòng)性慢性乙型肝炎時(shí)常有HBcAg的胞質(zhì)表達(dá)，因免疫清除而病毒減少(jiǎnshǎo)，難以檢出HBeAg。作為免疫攻擊的靶抗原，HBeAg不及HBcAg重要。

第二十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝內(nèi)HBcAg與肝組織炎癥活動(dòng)(huódòng)關(guān)系

血清HBVDNA、HBeAg和定位于核內(nèi)的HBcAg都與肝組織的損害程度無(wú)關(guān)。慢性(mànxìng)HBV感染者肝組織中漿膜型HBcAg的表達(dá)強(qiáng)度隨肝組織病變活性積分（HAI）評(píng)分值的增高而增強(qiáng)，HAI評(píng)分值低者核型HBcAg的表達(dá)增強(qiáng)。HBcAg在核內(nèi)或胞質(zhì)內(nèi)同時(shí)表達(dá)的其“炎癥活動(dòng)指數(shù)”高于HBcAg在胞質(zhì)內(nèi)和膜內(nèi)表達(dá)。

第二十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝內(nèi)HBcAg與肝組織炎癥(yánzhèng)活動(dòng)關(guān)系

光鏡下發(fā)現(xiàn)(fāxiàn)漿膜型HBcAg多分布于碎屑樣壞死及灶性壞死區(qū)，漿膜型HBcAg陽(yáng)性肝細(xì)胞常有各種變化，或明顯萎縮，或腫脹變形。增生胞核抗原（PCNA））是再生肝細(xì)胞的標(biāo)志，代表肝組織的炎癥活性，PCNA與胞質(zhì)HBcAg表達(dá)程度正相關(guān)，但不是胞核型HBcAg的獨(dú)立影響因素。發(fā)生前-C區(qū)突變的HBV與未發(fā)生突變的野生株相比HBcAg在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)顯著增高，并伴有較明顯的肝組織炎癥活動(dòng)。HBcAg在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)預(yù)示預(yù)后不良。

第二十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

肝內(nèi)HBcAg與肝組織炎癥(yánzhèng)活動(dòng)關(guān)系乙型肝炎引起的肝硬化肝組織中HBcAg、HBVDNA的陽(yáng)性率較高。HBcAg顆粒在肝組織中主要(zhǔyào)呈彌漫的漿膜型分布，HBcAg和HBVDNA呈漿、膜型分布者，其肝組織中HBVDNA表達(dá)程度、炎癥活動(dòng)度和纖維組織增生程度，明顯較呈核型分布者高。HBcAg及HBVDNA陽(yáng)性的肝組織，炎癥活動(dòng)明顯，界面呈碎屑?jí)乃?，灶性壞死?/p>

第二十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝內(nèi)HBcAg與肝組織(zǔzhī)炎癥活動(dòng)關(guān)系

觀察肝內(nèi)顆HBcAg粒的分布類型(lèixíng)，有助于判斷HBV在肝組織中的復(fù)制狀況；肝組織病變的活動(dòng)程度。這可能是由于機(jī)體對(duì)呈漿、膜型分布的HBcAg和HBVDNA具有更加強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，將肝內(nèi)含活躍復(fù)制的HBVDNA和靶抗原HBcAg表達(dá)的肝細(xì)胞溶解破壞，以清除病毒所致。

第二十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件合并丁型肝炎時(shí)，肝內(nèi)HBcAg表達(dá)(biǎodá)特點(diǎn)

HBV合并HDV感染者的肝組織中，HBcAg和HDAg陽(yáng)性細(xì)胞分布關(guān)系不密切，HBcAg陽(yáng)性細(xì)胞明顯少于HDAg陽(yáng)性細(xì)胞，HBcAg主要呈核型表達(dá)，胞質(zhì)中陽(yáng)性顆粒較少見(jiàn)到，表達(dá)強(qiáng)度也較弱，表明HDV感染者HBV是低水平復(fù)制，HDV可能有抑制HBV基因復(fù)制或病毒抗原表達(dá)的作用，特別(tèbié)是在HDV復(fù)制活躍的階段，即HDAg大量表達(dá)時(shí)，HBV復(fù)制受到的抑制最為明顯。

第二十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件兒童(értóng)肝內(nèi)HBcAg表達(dá)特點(diǎn)

兒童肝內(nèi)HBcAg主要表達(dá)于核內(nèi)。肝內(nèi)HBcAg呈彌漫性分布者，多見(jiàn)于10歲以內(nèi)的較小兒童；而呈局灶性分布者，多見(jiàn)于10歲以上的較大兒童，HBcAg呈局灶性分布比彌漫性分布者，ALT水平(shuǐpíng)較高并伴有較明顯的肝臟炎癥活動(dòng)。在兒童慢性乙型肝炎患者中，肝內(nèi)HBcAg呈彌漫性分布者為病毒感染早期，HBcAg呈局灶性分布并伴隨HBeAg陽(yáng)性者為疾病短期內(nèi)進(jìn)展的標(biāo)志。

第三十頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝組織HBcAg檢測(cè)(jiǎncè)的應(yīng)用價(jià)值

（1）檢測(cè)肝組織HBcAg有助于確定乙型肝炎病原學(xué)診斷，尤其是對(duì)于血清乙型肝炎病毒(bìngdú)標(biāo)志物陰性病例，在病原學(xué)診斷中彌補(bǔ)血清學(xué)診斷乙型肝炎的不足。

第三十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝組織(zǔzhī)HBcAg檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值

（2）有助于評(píng)估肝細(xì)胞壞死炎性活動(dòng)的程度及病變發(fā)展的趨向，推測(cè)慢性(mànxìng)乙型肝炎的預(yù)后。肝細(xì)胞內(nèi)HBcAg轉(zhuǎn)陰和肝細(xì)胞壞死病變減輕具有一致性。HBcAg漿膜型者顯示此種一致性，而核型則否，可能由于肝細(xì)胞質(zhì)、膜上的HBcAg作為靶抗原易受到殺傷性了淋巴細(xì)胞的攻擊，導(dǎo)致肝細(xì)胞損害，而核型HBcAg則不具有此種作用。

第三十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件肝組織HBcAg檢測(cè)的應(yīng)用(yìngyòng)價(jià)值

（3）HBcAg檢測(cè)(jiǎncè)也是判斷HBV復(fù)制狀態(tài)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，肝組織HBcAg與HBVDNA兩種病毒復(fù)制標(biāo)志物相關(guān)。研究結(jié)果證實(shí)肝組織HBcAg檢測(cè)具有多種實(shí)用價(jià)值，值得推薦。

第三十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件2.3其他(qítā)組織的HBcAg表達(dá)

國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)乙型肝炎孕婦所分娩的死胎進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)HBcAg在多種臟器內(nèi)均可表達(dá)，其中以肺、肝、腎臟、臍帶為最高，胸腺、心臟、脾、胎盤次之，大腦最低。說(shuō)明HBV有可能在多種組織內(nèi)復(fù)制并表達(dá)抗原。這可能是HBV通過(guò)產(chǎn)婦傳播，導(dǎo)致(dǎozhì)新生兒乙型肝炎的高發(fā)病率、新生兒發(fā)育不良和死亡的重要因素。

第三十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件3小結(jié)(xiǎojié)總之，充分認(rèn)識(shí)HBcAg的生物學(xué)特點(diǎn)和其在血液、肝組織內(nèi)表達(dá)(biǎodá)的規(guī)律，有助于我們通過(guò)對(duì)HBcAg的檢測(cè)而正確判斷是否有HBV的復(fù)制以及復(fù)制的強(qiáng)度，正確評(píng)估肝病活動(dòng)及肝組織損害的程度，從而指導(dǎo)制定有效的治療方案。對(duì)HBcAg的強(qiáng)免疫原特性的認(rèn)識(shí)，可以指導(dǎo)我們研制更有效的預(yù)防或治療乙型病毒性肝炎的疫苗。

第三十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

4HBcAg的ELISA法檢測(cè)(jiǎncè)4.1試劑

HBcAgELISA試劑(shìjì)由北京美迪科生物技術(shù)有限公司提供，試劑(shìjì)主要包括HBsAb包被板、HBcAg包被板、開(kāi)殼劑、HBcAb-HRP結(jié)合物、底物液TMB等。第三十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。整理課件

4.2步驟(bùzhòu)（1）標(biāo)本處理：取血清檢測(cè)。（2）乙肝病毒Dane顆粒的分離。將HBsAb包被板用蒸餾水洗2次并拍干，每孔加樣本、陰陽(yáng)(yīnyánɡ)性對(duì)照血清各100ul（空白對(duì)照孔不加），用封片紙封好，45℃溫育30分鐘，棄去孔內(nèi)液體并用蒸餾水洗7次并拍干。（3）加開(kāi)殼劑釋放出HBcA