蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證實(shí)施方案

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：1/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案吉林亞泰生物藥業(yè)股份有限公司2015年10月

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：2/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密方案批準(zhǔn)題目蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案起草人 部門 職務(wù) 起草日期審核人 部門 職務(wù) 審核日期批準(zhǔn)人 部門 職務(wù) 批準(zhǔn)日期蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：3/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密目錄TOC\o"1-5"\h\z目的 42?范圍和責(zé)任 43.人員確定 44?引用標(biāo)準(zhǔn) 45?材料 55.1儀器設(shè)備 55.2器材、用具 56?風(fēng)險因素分析 5內(nèi)容 57.1檢查法驗(yàn)證簡述 57.2驗(yàn)證方法 57.3驗(yàn)證步驟 58?偏差 79.附錄 8蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：4/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密目的在進(jìn)行常規(guī)的蛋白質(zhì)含量檢查之前，需驗(yàn)證在實(shí)際檢驗(yàn)條件下，檢驗(yàn)用物品及操作程序不得對檢驗(yàn)方法造成不良影響。本試驗(yàn)是關(guān)于對本公司產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量檢查方法的驗(yàn)證，結(jié)果應(yīng)顯示：本公司產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量的檢查方法符合驗(yàn)證要求。范圍和責(zé)任本驗(yàn)證方案適用于吉林亞泰生物藥業(yè)股份有限公司人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液、精制卡介菌多糖核酸檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。驗(yàn)證委員會：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審批；驗(yàn)證的協(xié)調(diào)工作，以保證本驗(yàn)證方案規(guī)定項(xiàng)目的順利實(shí)施；驗(yàn)證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核；負(fù)責(zé)驗(yàn)證報告的審批。質(zhì)量控制部：負(fù)責(zé)本驗(yàn)證方案、報告的起草與實(shí)施，并做好相應(yīng)的記錄；在驗(yàn)證過程中對驗(yàn)證相關(guān)SOP進(jìn)行確認(rèn)。驗(yàn)證管理部：負(fù)責(zé)驗(yàn)證過程中的組織協(xié)調(diào)，負(fù)責(zé)審核驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報告,并對驗(yàn)證全過程進(jìn)行跟蹤和督導(dǎo)質(zhì)量保證部QA：參與驗(yàn)證實(shí)施，協(xié)助驗(yàn)證部門對過程中出現(xiàn)的偏差進(jìn)行處理。質(zhì)量副總：批準(zhǔn)驗(yàn)證文件。人員確定確定參與本次驗(yàn)證的人員并要求所有參與人員簽名確認(rèn)。小組職務(wù)姓名所在部門簽字日期組長孫麗萍質(zhì)量控制部組員張晶質(zhì)量控制部組員趙磊驗(yàn)證管理部組員范博質(zhì)量保證部4. 引用標(biāo)準(zhǔn)《蛋白質(zhì)含量測定SOP》《偏差管理SOP》《中華人民共和國藥典》2015版第四部

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：5/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密5.材料5.1儀器設(shè)備5.1.1紫外分光光度計(jì)、電子天平5.2器材用具5.2.1.比色皿、量瓶、刻度吸管、具塞試管6.風(fēng)險因素分析評估項(xiàng)目潛在風(fēng)險風(fēng)險級別控制措施是否需要確認(rèn)專屬性不能正確檢出被測物。中進(jìn)行專屬性試驗(yàn)證明輔料等基質(zhì)成分對待檢成分檢出無影響。低重現(xiàn)性不能準(zhǔn)確測定出被測物含量。中進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)證明該方法的精密度可以滿足試驗(yàn)要求。低線性與范圍不能準(zhǔn)確測定出被測物含量。中進(jìn)行線性試驗(yàn)證明該物質(zhì)的濃度與含量成正比例關(guān)系。低7. 內(nèi)容7.1檢查法驗(yàn)證簡述蛋白質(zhì)含量測定系采用福林酚法（Lowry法），蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵在堿性溶液中與CU2+螯合形成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物，此復(fù)合物使酚試劑的磷鉬酸還原，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，同時在堿性條件下酚試劑易被蛋白質(zhì)中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸還原呈藍(lán)色反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比，以蛋白質(zhì)對照品溶液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用比色法測定供試品中蛋白質(zhì)的含量。7.2驗(yàn)證方法嚴(yán)格按照蛋白質(zhì)含量檢驗(yàn)方法，準(zhǔn)備人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液樣品、精制卡介菌多糖核酸樣品各3批和試驗(yàn)材料，并依據(jù)檢驗(yàn)方法的操作步驟對樣品進(jìn)行多次檢驗(yàn)，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果均應(yīng)表明試驗(yàn)的專屬性、重現(xiàn)性蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：6/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密及線性與范圍均能達(dá)到試驗(yàn)要求。7.3 驗(yàn)證步驟文件檢查目的：驗(yàn)證所需的參考文件是完整可用的。測試方法：根據(jù)資料清單，逐一檢查文件的完整性?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：所有必需的文件必須是可用的和經(jīng)過批準(zhǔn)的。記錄：見附錄1。培訓(xùn)目的：確認(rèn)參與驗(yàn)證的人員都經(jīng)過此方案和相關(guān)SOP的培訓(xùn)。測試方法：檢查培訓(xùn)記錄?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：驗(yàn)證執(zhí)行前，參與驗(yàn)證的人員已進(jìn)行此方案和相關(guān)SOP的培訓(xùn)。記錄：見附錄2。測試用儀器、儀表檢查目的：對測試用儀器、儀表進(jìn)行確認(rèn)。測試方法：檢查儀表參數(shù)和設(shè)備登記卡。可接受標(biāo)準(zhǔn)：測試用儀器、儀表符合測試要求。記錄：見附錄3。試劑配制堿性銅試液：取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g,加水400ml使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g,加水50ml使溶解，另取硫酸銅0.25g,加水30ml使溶解,將兩液混合作為乙液。臨用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取血清白蛋白（牛）標(biāo)準(zhǔn)品1支，至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，用刻度吸管移取10ml至25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。供試品溶液的制備精密量取供試品溶液1ml至具塞試管中。線性關(guān)系考察精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml（對照品蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：7/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密溶液取用量可在本法測定范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整），分別置具塞試管中，各加水至1.0ml,再分別加入堿性銅試液1.0ml,搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液[取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1-16]4.0ml,立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長處測定吸光度。7.3.5.2.可接受標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度和其吸光度在在規(guī)定范圍內(nèi)呈線性，相關(guān)系數(shù)（R2）>0.995o記錄：見附錄4.專屬性精密量取空白輔料溶液、供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液各1ml置玻璃試管中，再分別加入堿性銅試液1.0ml,搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液[取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1-16]4.0ml,立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長處測定吸光度。7.3.6.2.可接受標(biāo)準(zhǔn)空白輔料溶液對蛋白質(zhì)含量測定無干擾；供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液在650nm波長處有吸收峰；7.3.6.3.記錄：見附錄5。3.7.重現(xiàn)性1. 取供試品人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液3批，取精制卡介菌多糖核酸3批，精確稱取0.1g樣品用10ml水稀釋，分別精確量取1.0ml樣品，再分別加入堿性銅試液1.0ml,搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液[取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1-16]4.0ml,立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長處測定吸光度。2.可接受標(biāo)準(zhǔn)每批供試品的平行含量測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不得過2.0%。記錄：見附錄6。偏差當(dāng)該方案的某一部分無法實(shí)施或?qū)嶋H情況無法達(dá)到可接受標(biāo)準(zhǔn)時，需要進(jìn)行蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：8/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密偏差報告。當(dāng)偏差出現(xiàn)時，參考《偏差管理SOP》處理，確保所有的偏差得到評估和有效的解決。驗(yàn)證過程中產(chǎn)生的偏差記錄在附錄7。附錄附錄1：文件檢查確認(rèn)記錄附錄2：培訓(xùn)記錄附錄3：儀器、儀表校驗(yàn)檢查記錄附錄4：線性關(guān)系檢查記錄9.5. 附錄5：專屬性檢查9.6. 附錄6：人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液含量測定記錄9.7. 附錄7：精制卡介菌多糖核酸含量測定記錄9.8. 附錄8：驗(yàn)證偏差

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁 碼：9/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密附錄1文件檢查確認(rèn)記錄資料名稱文件編號存放地點(diǎn)是否可接受蛋白質(zhì)含量測定SOPJYT-SOP03-5-1-033質(zhì)量保證部是口否口偏差管理SOPJYT-SOP02-7-0-003質(zhì)量保證部是口否口測試的符合性 □合格 □不合格備注：□無（如沒有，打勾）檢杳人：日期：審核人：日期：

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁碼：10/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密附錄2培訓(xùn)記錄培訓(xùn)課題蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案的培訓(xùn)培訓(xùn)目的使被培訓(xùn)人員掌握蛋白質(zhì)含量檢查方法的驗(yàn)證方法和過程培訓(xùn)內(nèi)容蛋白質(zhì)含量檢查方法的驗(yàn)證方法培訓(xùn)日期： 培訓(xùn)時間： 一 共 小時培訓(xùn)師： 培訓(xùn)方式： 培訓(xùn)地點(diǎn)：培訓(xùn)人員簽到：姓名簽字姓名簽字姓名簽字趙磊張晶范博測試的符合性 □合格 □不合格備注：□無（如沒有，打勾）檢杳人：日期：審核人：日期：

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁碼：11/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密附錄3儀器、儀表校驗(yàn)檢查記錄儀器、儀表名稱型號設(shè)備編號生產(chǎn)廠家是否接受？(Y/N)紫外分光光度計(jì)UV-2401PC03A-032日本島津是口否口電子天平FA22403B-164上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司是口否口測試的符合性□合格 □不合格備注：□無(如沒有，打勾)檢杳人：日期：審核人：日期：

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁碼：12/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密附錄4線性關(guān)系檢查記錄濃度（yg/ml）4080120160200A值曲線方程相關(guān)系數(shù)□測試的符合性□合格 □不合格備注：□無（如沒有，打勾）檢杳人：日期：審核人：日期：

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁碼：13/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密附錄5專屬性檢查記錄樣品名稱在650nm處A值空白輔料溶液人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液精制卡介菌多糖核酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液測試的符合性 □合格 □不合格備注：□無（如沒有，打勾）檢杳人：日期：審核人：日期：

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁碼：14/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密附錄6人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液含量測定記錄檢品名稱：人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）純化原液檢品來源：檢品批號：檢驗(yàn)日期：年月日報告日期：年月日檢驗(yàn)依據(jù)：《蛋白質(zhì)含量測定SOP》JYT-SCP03-5-1-0331.儀器設(shè)備紫外-可見分光光度計(jì)：型號編號校驗(yàn)有效期至 2.檢驗(yàn)方法：lowry法2.1.標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液的制備：取蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品1支,用膠頭滴管加注射用水定容至ml容量瓶中，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液。取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。2.2?供試品溶液的制備：ml定容至ml容量瓶中，即為Ug/ml取供試品，加水制成含蛋白質(zhì)約200卩g/ml的溶液，搖勻，即得供試品溶液。再用刻度吸管精密量取供試品溶液1ml。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：用刻度吸管精確量取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（口g/ml）0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置于試管中，用刻度吸管加水補(bǔ)至1ml。再用刻度吸管準(zhǔn)確量取水1ml,作空白對照。測定：取上述溶液，用刻度吸管加入堿性銅試液1.0ml,搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液[取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1-16]4.0ml,立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法，在650nm的波長處測定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（口g/ml） 650nmA值直線方程：r二 ；Y=a+bx= 結(jié)果計(jì)算：用直線回歸法計(jì)算結(jié)果。蛋白質(zhì)含量（卩g/ml）=樣品相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)溶液體積數(shù)X稀釋倍數(shù)測定結(jié)果：稀釋倍數(shù)— —

蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁碼：15/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密檢品批號吸收值含量(Mg/ml)平均值（Mg/ml）測試的符合性□合格 □不合格備注：□無（如沒有，打勾）檢杳人：日期：審核人：日期：此表可根據(jù)需要復(fù)制蛋白質(zhì)含量檢查方法驗(yàn)證方案編號：VP-2015-1-015頁碼：16/18版本號：01修訂號：01機(jī)密等級： 秘密附錄7精制卡介菌多糖核酸含量測定記錄檢品名稱：精制卡介菌多糖核酸檢品來源：檢品批號：檢驗(yàn)日期：年月日報告日期：年月日檢驗(yàn)依據(jù)：《蛋白質(zhì)含量測定 SOP》JYT-SCP03-5-1-033儀器設(shè)備電子天平：型號 編號 校驗(yàn)有效期至 紫外-可見分光光度計(jì)：型號 編號 校驗(yàn)有效期至 檢驗(yàn)方法：lowry法2.1.標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液的制備：取蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品1支，用膠頭滴管加注射用水定容至 ml容量瓶中，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液。取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液貯備液 ml定容至 ml容量瓶中，即為 Ug/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。2.2?供試品溶液的制備：用精度為0.0001g的電子天平精密稱取本品約0.1000g置10ml量瓶中，用膠頭滴管加適量水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。再用刻度吸管精密量取供試品溶液1ml。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：用刻度吸管精確量取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（口g/ml）0.2ml、0.4ml、0.6ml、