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文檔簡介

園林植物病原菌的分離培養(yǎng)

園林植物病原菌的分離培養(yǎng),是獲得園林植物病害病原菌的重要方法之一,同時也是正確診斷園林植物病害的基礎(chǔ)。

分離培養(yǎng):就是將病原物從發(fā)病的組織上與其他微生物分開,并移到適合其生長的營養(yǎng)基質(zhì)(培養(yǎng)基)上,從而獲得病原菌的純培養(yǎng)的方法。第一節(jié)滅菌和消毒

植物病原菌的分離培養(yǎng)實驗,盡量要做到不能有雜菌污染,因此對所有的器材,培養(yǎng)基和工作場所都要進行嚴格的消毒和滅菌。

消毒:消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體。滅菌:殺死一切微生物的營養(yǎng)體和孢子主要方法:加熱、過濾、輻射和使用化學藥品等。

熱力滅菌干熱法濕熱法火焰燒灼熱空氣滅菌高壓蒸汽滅菌間歇滅菌(常壓)煮沸滅菌(常壓)熱力滅菌干熱滅菌:利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌目的。

細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)。菌體受熱時,當環(huán)境和細胞內(nèi)含水量越大時,則蛋白質(zhì)的凝固就越快,反之含水量越小凝固越慢。火焰燒灼

火焰燒灼滅菌主要適用于接種環(huán),接種針和金屬器具(鑷子)等,無菌操作時的試管口和三角瓶口也可以在火焰上做暫時燒灼滅菌。熱空氣滅菌(干熱滅菌)

通常所說的干熱滅菌就是在烘箱內(nèi)利用高溫干燥的空氣進行滅菌。這種方法適合于玻璃器皿(培養(yǎng)皿,吸管等)的滅菌。溫度

160~170℃,時間為1~

2h注意事項

物品不能堆放的太緊密,以免妨礙空氣流通物品不能接觸烘箱的鐵質(zhì)內(nèi)壁加熱完畢,溫度低于70℃以下,才能打開烘箱門電烘箱

濕熱滅菌:是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),在0.1MPa,121℃下,保持15-30min進行滅菌。

滅菌的時間的長短主要取決于滅菌物品的種類和數(shù)量。適用于培養(yǎng)基、橡膠類,也可用于玻璃器皿的滅菌手提式高壓蒸汽滅菌鍋立式高壓蒸汽鍋和臥式高壓蒸汽鍋大容量立式高壓蒸汽鍋

過濾除菌主要適用于血清、抗生素、糖溶液等,這些物質(zhì)用一般加熱消毒滅菌方法,均會被破壞,因此應(yīng)采用過濾除菌的方法。

應(yīng)用最廣的過濾器有蔡氏過濾器和微孔濾膜過濾器。

蔡氏過濾器分上、下兩節(jié),過濾時,用螺旋把石棉板緊緊地夾在上、下兩節(jié)濾器之間,然后將溶液置于濾器中抽濾,每次過濾必須用一張新濾板。濾板根據(jù)其孔徑的大小可分為3種類型:K型最大,用于澄清;EK型縷空較小,用來過濾細菌;EK-S最小用于過濾病毒。

蔡氏過濾器示意圖微孔濾膜過濾器

輻射滅菌含義:輻射滅菌主要是利用不同波長的射線進行滅菌。紫外線(UV)和60Co-γ紫外線:波長200~300nm的紫外線都具有殺菌能力,其以260nm的殺菌能力最強。在一定的波長條件下,紫外線的殺菌率與強度和時間的乘積成正比。原理:1.

紫外線可以誘導胸腺嘧啶(T)二聚體和DNA交聯(lián)的形成

2.臭氧或者雙氧水(H2O2)O2hγ2[O]oxidizationO2O3胸腺嘧啶二聚體的形成及光修復示意圖

注意:1.紫外線的穿透力較弱,只能用于物體表面的消毒。主要用于無菌室,接種箱,手術(shù)室等的空氣和物體表面消毒。

2.紫外線對視神經(jīng)及眼結(jié)膜有較大的損傷,請勿直視紫外線。紫外線燈距離照射物距離最好不超過1.2m。

3.60Co-γ穿透力較強,主要用于不能加熱的紙張,塑料膜和醫(yī)用生物敷料皮的滅菌。

化學藥品含義:應(yīng)用能抑制或者殺死微生物的化學藥劑進行消毒滅菌種類:1.殺菌劑和重金屬鹽(破壞代謝機能并有致死作用)

2.抗生素(抑制細菌代謝機能并不直接殺死)用途:主要是病組織的表面消毒

2%煤酚皂溶液(來蘇爾);0.1%升汞溶液;3%-5%的甲醛;75%的醫(yī)用酒精來蘇爾甲醛水溶液(3%-5%)甲醛分子模型實驗一滅菌和消毒一、實驗目的

學習滅菌與消毒的基本原理,掌握高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法。二、實驗原理通過加熱使滅菌鍋內(nèi)的水變?yōu)樗魵?,待水蒸氣將鍋?nèi)的冷空氣排除干凈后,關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱,由于蒸汽不能溢出,鍋內(nèi)的壓力逐漸增大,隨著壓力的增加,水的沸點升高,從而獲得高于100℃的高溫,高溫導致微生物菌體蛋白質(zhì)變性而達到滅菌的目的。

0.1MPa,121℃,20~30min。三、儀器與材料

儀器與用具:高壓蒸汽滅菌鍋,培養(yǎng)皿材料:馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA,PotatoDextroseAgar)

四、操作步驟檢查滅菌鍋內(nèi)水位(不能用自來水?)高壓蒸汽滅菌鍋的使用加蓋、擰緊加熱升溫排冷空氣升溫、保壓持續(xù)升溫,維持0.1MPa,20~30min。降壓、取物

必須等到滅菌鍋內(nèi)的壓力為“0”時,方可打開滅菌鍋??!五、記錄實驗結(jié)果(數(shù)據(jù),圖片)六、分析實驗結(jié)果,總結(jié)實驗成敗的原因七、撰寫實驗報告1、包裝:用報紙包培養(yǎng)皿,并將其放入烘箱(留空隙)2、升溫:接通電源,加熱升溫至160~170℃3、恒溫:保持160~170℃,2小時4、降溫:

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