硫化氫礦泉浴治療高血壓及高同型半胱氨酸血癥的研究

硫化氫礦泉浴治療高血壓及高同型半胱氨酸血癥的研究郝萬鵬一、立項背景1、硫化氫（H2S）2、同型半胱氨酸(Hcy)3、H2S與Hcy的關(guān)系4、高血壓疾病5、礦泉浴療法6、本課題研究目的

1、硫化氫：一直以來人們認為它只是一個有毒的廢氣。1996年被科學(xué)家證明人體內(nèi)源性硫化氫是一種神經(jīng)活性物質(zhì)。硫化氫是繼一氧化氮和一氧化碳之后發(fā)現(xiàn)的一種新的氣體信號分子。近年來，內(nèi)源性硫化氫在神經(jīng)系統(tǒng)，心血管系及呼吸系統(tǒng)等方面的作用，主要表現(xiàn)為參與一些疾病的病理機制，其在藥物開發(fā)的前景等方面也越來越多的引起人們的重視。由于其具有多種生理功能，并在多系統(tǒng)多種疾病的生理和病理過程中，起重要作用。近年來大量文獻報道了許多學(xué)者做的動物實驗?zāi)Ｐ徒Y(jié)果、臨床研究及流行病學(xué)調(diào)查大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性高血壓，肺動脈高壓、冠心病等疾病的血清硫化氫水平顯著降低。在高血壓患者中，隨著高血壓水平的增加，而硫化氫濃度降低。隨著血壓的升高,患者血壓與血漿硫化氫濃度呈負相關(guān)。說明內(nèi)源性H2S的不足已在早期參與了高血壓的發(fā)生，證實了硫化氫參與人體內(nèi)心血管功能的調(diào)節(jié)。特別是高血壓合并腦卒中的患者。外源性給予硫化氫的供體（硫氫化鈉）后，可以明顯抑制血壓升高程度。硫化氫可是防治高同型半胱氨酸血癥的新吧點。硫化氫具有廣泛的生物效應(yīng)如平滑肌舒張效應(yīng)，誘導(dǎo)細胞凋亡、促進血管新生等作用，傳感分子作用等作用。顯示出極大的治療性應(yīng)用前景。硫化氫理化性質(zhì)為無色氣體。常溫常壓下為氣態(tài)，易溶于水（20℃時2.9體積氣體溶于1體積水）。正常人體內(nèi)也有內(nèi)源性硫化氫。內(nèi)源性硫化氫的來源，內(nèi)源性硫化氫是體內(nèi)含硫氨基酸的代謝產(chǎn)物。硫化氫在體內(nèi)有兩種形式存在。1/3以硫化氫氣體形式存在，2/3以硫氫化鈉離子形式存在。外源性硫化氫在人體的吸收：硫化氫可經(jīng)呼吸道、消化道快速吸收，經(jīng)皮膚吸收率甚低。但在礦泉水中例外。硫化氫主要生理學(xué)作用有①舒張血管平滑?。虎谝种破交≡鲋?；③誘導(dǎo)血管平滑肌細胞凋亡等。內(nèi)源性硫化氫參與調(diào)解平滑肌的舒張功能，故可降低血壓。目前硫化氫治療主要采用硫氫化鈉作硫化氫的供體，部分采用硫化鈉作為供體。2、同型半胱氨酸：1969年報道第一例因高同型半胱氨酸血癥而導(dǎo)致嚴重動脈粥樣硬化的先天性異常患兒以來。學(xué)者做了大量的研究。于1996年通過流行病學(xué)調(diào)查最先提出同型半胱氨酸是心血管疾病的危險因素。同型半胱氨酸是多功能損傷因子。是心腦血管系統(tǒng)（動脈粥化、急性心梗、腦卒中及外周血管病變、神經(jīng)性退行性疾?。┑劝l(fā)病的獨立或相關(guān)危險因子。

大量研究表明，高同型半胱氨酸血癥在動脈粥樣硬化和血栓栓塞疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，被認為是心血管疾病的獨立危險因素之一。高血壓之后成為危害我國居民健康的只要慢性病之一，隨著生活水平的提高，高血壓的發(fā)病率也日趨增長。研究發(fā)現(xiàn)，血清同型半胱氨酸水平與高血壓成正相關(guān)。大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，在高血壓患者中，隨著高血壓水平的增加，血清同型半胱氨酸升高，而硫化氫濃度降低。3、H2S與Hcy的關(guān)系：研究表明同型半胱氨酸與硫化氫存在內(nèi)源性的相互調(diào)節(jié)作用，兩者在體內(nèi)呈負相關(guān)。硫化氫可以顯著拮抗同型半胱氨酸對血管組織和心肌的損傷。硫化氫的生理作用與同型半胱氨酸的毒性作用是相反的。硫化氫可作為防治高同型半胱氨酸血癥的新策略，抵抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)的心血管損傷。

4、高血壓疾?。涸l(fā)性高血壓是常見的心血管病之一，不僅致殘、致死亡率高，而且嚴重消耗醫(yī)療和社會資源，給家庭和社會造成沉重負擔。日益成為世界性的健康問題，是腦心血管疾病、缺血性心臟病、心和腎功能衰竭的重要原因。原發(fā)性高血壓也是常見的慢性病，也是心腦血管最主要的危險因素，是腦卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性腎臟病等主要并發(fā)癥。

國內(nèi)外的實踐證明，高血壓是可以預(yù)防和控制的疾病，降低高血壓患者的血壓水平，可以明顯減少腦卒中及心臟病事件。在原發(fā)性高血壓發(fā)病過程中，同型半胱氨酸在發(fā)生、發(fā)展中起重要的作用，血清中高濃度的同型半胱氨酸可顯著增加原發(fā)性高血壓的發(fā)病率。伴有高同型半胱氨酸的高血壓患者高達75%。我國學(xué)者將伴有血清同型半胱氨酸升高的原發(fā)性高血壓稱“H型高血壓”。建議同時控制高血壓和高Hcy。對于原發(fā)性高血壓患者的研究證實，在原發(fā)性高血壓患者中存在著內(nèi)源性的高同型半胱氨酸與低硫化氫。高血壓人群同型半胱氨酸水平進一步升高，血清硫化氫隨血壓升高明顯降低。因些同時降低原發(fā)性高血壓患者血壓及同型半胱氨酸水平非常重要?？捎行Ы档湍X卒中的發(fā)病率。研究發(fā)現(xiàn)，外源性硫化氫可以通過提高體內(nèi)硫化氫水平而緩解原發(fā)性高血壓血壓升高程度，可作為治療原發(fā)性高血壓的一個新靶點。

5、礦泉浴療法：礦泉浴是一種古老的物理療法,歷史悠久,源遠流長,距今已有幾千年的歷史。礦泉水的降壓原理有三條，一是礦泉浴溫度對人體產(chǎn)生的作用。二是礦泉水的機械刺激作用。三是通過化學(xué)成分的刺激作用，礦泉水中含有的硫化氫時，機體在浸浴時是通過皮膚的直接作用，通過皮膚被機體吸收作用和溢出空氣的H2S被呼吸道吸收到機體的總作用。即硫化氫對血壓的調(diào)節(jié)作用。礦泉水中的硫化氫，進入人體有兩條徑，一時機體在浸浴時是通過皮膚的直接吸收作用（離子透析作用），二是利用礦泉水中逸出的H2S氣體直接吸入呼吸道。6、本課題研究目的：本課題要解決的問題，應(yīng)用硫化氫礦泉浴治療原發(fā)性高血壓病人，且同時伴有高同型半胱氨酸血癥，預(yù)防心腦血管疾病的發(fā)生，防止腦卒中病人復(fù)發(fā)。通過測定患者血清中硫化氫、同型半胱氨酸濃度及測量血壓，探索硫化氫礦泉浴與患者血壓、血清硫化氫及同型半胱氨酸三者之間的關(guān)系。摸索硫化氫礦泉浴科學(xué)合理的治療方案。從而為硫化氫治療疾病建立一個新的方法。

二、研究過程、內(nèi)容與結(jié)果

1、實驗室準備2、實驗設(shè)計及研究對象選擇3、對選擇研究對象采集血清樣本4、檢測指標測定5、實驗組的治療方法6、統(tǒng)計學(xué)處理7、課題研究成果

1、實驗室準備：購買儀器及試劑。購買了測定血清硫化氫儀器離子計及配套用電極。同時購買了所需試劑。做了預(yù)實驗，實驗成功后，做了方法學(xué)評價實驗。撰寫了論文“離子選擇電極法測定血清硫化氫”。并投稿。同型半胱氨酸測定使用儀器OlympusAU400全自動生化分析儀，試劑盒為利德曼產(chǎn)品。2、實驗設(shè)計及研究對象選擇：本實驗采用前后對照研究設(shè)計(同病例自身前后對照)。按照中國高血壓防治指南（2010年）要求標準選擇實驗組人員。即收縮在140—159mmHg之間和（或）舒張壓在90—99mmHg之間。并同時伴有高Hcy血癥，且血清同型半胱氨酸濃度≥15μmol/L。經(jīng)詢問病史，體格檢查、心電圖X線、超聲及血液生化檢驗等排除繼發(fā)性高血壓、糖尿病、冠心病、高脂血癥者。要求初次就診尚未服用降壓藥或可停藥者。已服藥者停藥3天再進入實驗組，對于口服半衰期長的降壓藥（如氨錄地平等）患者，也不選擇。所有患者均簽署書面知情同意書。3、對選擇研究對象采集血清樣本：對入選的實驗組人員空腹12小時以上，采用分離膠真空采血管取時靜脈血液5ml,3000r/min,離心10min。在30min內(nèi)離心血清，當天不能測定時，將采血管置—25℃保存。一周內(nèi)測定。

4、檢測指標測定4.1血壓的測量：所有入選對象，實驗組水療前及對照組至少休息10min，采用臺式水銀柱血壓計，由專人測量，全部測右側(cè)肱動脈血壓。實驗組水療后至少休息30min；由水療前同一人員及血壓計測量血壓。

4.2血清硫化氫測定：采用離子電極測定法。使用離子計（上海雷磁PXSJ-226型），指示電極為硫電極（上海雷磁），參比電極（上海雷磁型）。采用標準加入法（也稱添加法）。檢查儀器零點，進行電極標定，再測定血清樣品。取血清1ml，加入等量抗氧化液混勻放置30min后測定，添加標準液體積為0.02ml。根據(jù)儀器提示操作，記錄血清硫化氫濃度值。血清中內(nèi)源性硫化氫濃度較低。目前在測定硫化氫的方法中，相比較而言離子選擇電極法靈敏度高。采用標準加入法，將會減少誤差，較好的消除基體干擾。文獻報道用標準曲線法，我們通過實驗，發(fā)現(xiàn)標準加入法（添加法）準確度、重復(fù)性及穩(wěn)定性均優(yōu)于標準曲線法。故采用標準加入法（添加法）測定血清中硫化氫。并且做了方法學(xué)評價。本課題測定方法已發(fā)表文獻未見報道。方法學(xué)評價：本課題建立了血清硫化氫的離子電極測定方法。本法最低檢出限為5.1μmol/L，批內(nèi)平均CV為6.2%。批間平均CV為9.1%，線性范圍為5.1~100μmol/L（y=-129.62ln(x)-487.62,R2=0.993），平均回收率為98.7%~105%,正常人體血清硫化氫參考值范圍為35—55μmol/L。硫離子選擇電極電位法具有靈敏、快速、簡便、精密度及準確度良好等優(yōu)點。適用于常規(guī)測定血清硫氫。

4.3血清同型半胱氨酸測定：采用循環(huán)酶法測定血清同型半胱氨酸。使用儀器為OlympusAU400全自