萘普生體外經(jīng)皮滲透性能的研究

萘普生體外經(jīng)皮滲透性能的研究

類固醇是一種優(yōu)良的非體抗炎藥物，如圖1所示，但口服給藥可引起不同程度的胃腸道毒副作用，對(duì)腎臟和心臟也有一定程度的毒性。有文獻(xiàn)報(bào)道萘普生的經(jīng)皮給藥制劑可以避免口服制劑的“峰谷效應(yīng)”,減少對(duì)胃腸道的刺激。近年來(lái)微乳作為一種優(yōu)良的藥物載體,在提高非甾體類抗炎藥的透皮吸收效果方面有獨(dú)到的作用,但萘普生經(jīng)皮給藥微乳制劑作者至今未見(jiàn)有人研究。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定了萘普生在不同介質(zhì)中的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù),考察了促滲劑和接受液對(duì)其體外經(jīng)皮滲透性能的影響,為萘普生經(jīng)皮給藥微乳制劑的開(kāi)發(fā)進(jìn)行了處方前研究。儀器與試藥LC—10ATVP高效液相色譜儀(SPD—10AVP檢測(cè)器,日本島津);HY—4調(diào)速多用振蕩器(常州國(guó)華電器有限公司);PHS—2C精密酸堿度計(jì)(上海理達(dá)儀器廠);RYJ—6A藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀(上海黃海儀器廠);SHB—Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);KQ—100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海浦東物理光學(xué)儀器廠)。萘普生對(duì)照品(上海市藥檢所提供,批號(hào):100198-200403,HPLC法測(cè)定萘普生純度99.8%);萘普生原料藥(浙江車頭制藥有限公司,批號(hào):N070708,HPLC法測(cè)定萘普生純度99.6%)。Tween-80(天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司);曲拉通X-100(OP)、油酸乙酯、蓖麻油、油酸(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所);Tween-20(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);肉豆蔻酸異丙酯(IPM,上海邦成化工有限公司);橄欖油(北京芳草醫(yī)藥公司),油酸(天津光復(fù)化工公司);聚乙二醇400(分析純,天津方得化學(xué)試劑公司);氮酮(上海昊化化工有限公司);其余試劑均為分析純。方法1分析的建立1.1流動(dòng)相、色譜、進(jìn)水相色譜柱:KromasilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:0.01mol·L-1磷酸二氫鉀(pH值3.0)-甲醇(20∶80);檢測(cè)波長(zhǎng):275nm;流速:1.0mL·min-1;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL。在上述條件下,柱效≥5000,且空白不干擾藥物的測(cè)定。1.2u3000范圍精密稱取105℃干燥至恒重的萘普生標(biāo)準(zhǔn)品5.2mg,置100mL棕色量瓶中,加少量甲醇溶解,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,得質(zhì)量濃度為52μg·mL-1的儲(chǔ)備液。分別精密量取儲(chǔ)備液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,8.0mL,置于10mL棕色量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻。取20μL進(jìn)樣分析,以峰面積值(A)為縱坐標(biāo),濃度(C,μg·mL-1)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:A=12324961C+4324.8,r=0.9998。結(jié)果表明:萘普生在5.2~41.6μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2溶解度的測(cè)定取蒸餾水、pH值分別為5.0,6.8,7.4,8.0,9.0的磷酸鹽緩沖液各5mL,加入過(guò)量的萘普生,超聲使藥物不再溶解。將溶液置于(32±1)℃恒溫水浴中,磁力攪拌,使溶液中始終保持有固體藥物存在。平衡72h后,離心取上清液,用0.45μm微孔濾膜保溫濾過(guò)后,取續(xù)濾液,用甲醇稀釋并定容,搖勻,進(jìn)樣20μL,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算萘普生在各種溶媒中的溶解度。取Tween-80,Tween-20,OP各2mL,加入過(guò)量的萘普生按上法分別測(cè)定其在各種表面活性劑中的溶解度。取適量的萘普生分別加入適量的各種接受液溶媒,按上法分別測(cè)定其在各種接受液中的溶解度。取IPM、蓖麻油、油酸、橄欖油、油酸乙酯各5mL,加入一定量的萘普生,超聲使藥物不再溶解。將溶液置于(32±1)℃恒溫水浴中,磁力攪拌,使溶液中始終保持有固體藥物存在。平衡72h后,抽濾,以除去油相,將濾餅真空干燥后,仔細(xì)從濾紙上刮下,溶解在甲醇中。將還粘有藥物的濾紙放在布氏漏斗中用甲醇反復(fù)洗滌,最后將藥物的甲醇液合并,測(cè)其含量,得未被溶解的藥物的量,進(jìn)而計(jì)算萘普生在油相中的溶解度。3不同溫度對(duì)藥物在油相中的濃度的影響取適量萘普生溶于已被水飽和過(guò)的正辛醇中,制成萘普生的正辛醇溶液。精密移取該溶液1mL置于具塞試管中,分別加入被正辛醇飽和過(guò)的蒸餾水,pH值5.0,6.8,7.4,8.0,9.0的緩沖液9mL后,放入振蕩器中,溫度保持(32±1)℃,避光振搖24h。離心,取下層水溶液20μL稀釋進(jìn)樣,測(cè)定藥物在水相中的濃度CW;另取上層液20μL,稀釋進(jìn)樣,測(cè)定藥物在油相中的濃度CO。萘普生的油水分配系數(shù)用下式計(jì)算:P=CO/CW,其中P為分配系數(shù)。4不同接受液對(duì)供給池的影響取雄性家兔靜脈栓塞處死,剔毛,剝離腹部皮膚,在玻璃板上小心刮去皮下脂肪組織和粘連結(jié)締組織,用生理氯化鈉溶液沖洗干凈,冷凍保存,待用。將皮膚置于供給池和接受池之間,角質(zhì)層面向供給池。在供給池(供給面積為2.54cm2)中加入3mL的滲透促滲劑,接受池(容積為6.5mL)中加入空白接受液,于(32±1)℃恒溫水浴中磁力攪拌90min后,倒掉池中溶液,用蒸餾水洗干凈,重新在供給池中加入萘普生的飽和溶液(以不同接受液為溶媒),接受池中加入空白接受液,并在實(shí)驗(yàn)中始終保持供給池中有固體藥物存在。對(duì)照組在預(yù)處理時(shí),供給池中加入空白接受液,其他操作同上。分別于1,2,3,4,6,8,10h取樣2mL,同時(shí)補(bǔ)充等體積的同溫新鮮空白接受液。取樣用0.45μm的微孔濾膜保溫濾過(guò),進(jìn)樣20μL,計(jì)算藥物的累積滲透量。5穩(wěn)態(tài)滲透速率常數(shù)的計(jì)算本實(shí)驗(yàn)中,累積滲透量按公式(1)計(jì)算:Q=(6.5×Cn+∑i=1n?12×Ci)A(1)Q=(6.5×Cn+∑i=1n-12×Ci)A(1)式中,Cn為第n個(gè)取樣點(diǎn)濃度,Ci為第i個(gè)取樣點(diǎn)濃度,A為供給池面積。以Q對(duì)時(shí)間t作線性回歸,所得直線的斜率即為穩(wěn)態(tài)滲透速率常數(shù)Js(μg·cm-2·s-1)。滲透系數(shù)Ps(cm·s-1)用公式Ps=Js/Cd計(jì)算,其中Cd為供給池中藥物的平衡濃度。ER為增滲比,用公式ER=Js/J0來(lái)計(jì)算,其中J0為無(wú)促滲劑時(shí)的穩(wěn)態(tài)滲透速率常數(shù)。結(jié)果1ph緩沖液中溶解度隨聚氧標(biāo)準(zhǔn)值的變化規(guī)律萘普生在水中的溶解度為25.7mg·L-1,在各種pH緩沖液中的溶解度隨著pH值的增大而增大,結(jié)果如圖2所示。萘普生在各種油相和表面活性劑中的溶解度見(jiàn)表1。萘普生在不同接受液中的溶解度結(jié)果見(jiàn)表2。2表1中的水生油分布系數(shù)萘普生在正辛醇/水體系中的分配系數(shù)logP為2.50,在正辛醇/緩沖液中的油水分配系數(shù)如圖3所示。3透皮促進(jìn)劑的選用選擇藥物以分子形式存在的20%丙二醇-生理氯化鈉溶液(Ⅰ)和溶解度較大的20%乙醇-pH7.4磷酸鹽緩沖液(Ⅱ)和20%聚乙二醇400-pH7.4磷酸鹽緩沖液(Ⅲ)作為接受液來(lái)研究透皮促進(jìn)劑對(duì)萘普生透皮吸收的影響。所用的促滲劑有:5%IPM(A)、5%氮酮(B)、5%油酸(C)、10%乙醇(D)、5%油酸和5%丙二醇(E)(均以甲醇為溶劑)。結(jié)果見(jiàn)表3~表5。表6為奈普生在不同接受液中不加促滲劑時(shí)的體外透皮吸收動(dòng)力學(xué)參數(shù)。接受液選擇:Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,生理氯化鈉溶液(Ⅳ),pH值7.4磷酸鹽緩沖液(Ⅴ)。不同促滲劑的滲透效果萘普生為一弱酸親脂性藥物,在丙二醇中溶解度很大;在水以及生理氯化鈉溶液中,萘普生以難溶性分子形式存在,溶解度很小;在緩沖液中,萘普生發(fā)生解離,使溶液的pH值略有下降,溶解度則隨pH值的增高而顯著增大。因而,在設(shè)計(jì)萘普生經(jīng)皮給藥制劑時(shí),可通過(guò)調(diào)節(jié)制劑的pH值來(lái)改變萘普生的解離度和溶解度,從而提高其透皮吸收效果。萘普生在油相中的溶解度較大,約為水中的200倍。在非離子型表面活性劑中,由于萘普生分子中的羧基與聚氧乙烯基發(fā)生偶極相互作用,使其溶解度顯著增大,約為水中的4000倍,因而制備微乳時(shí)可將其溶解在表面活性劑或油相中。32℃時(shí),萘普生在正辛醇/水體系中的油水分配系數(shù)為2.5(logP)。文獻(xiàn)表明非甾體類抗炎藥透皮吸收的最佳logP為2.44和2.43,結(jié)合萘普生的理化性質(zhì),可推測(cè)萘普生是一種優(yōu)良的透皮給藥模型藥物。由表3~5可知,各種促滲劑對(duì)萘普生的促滲效果不很明顯,ER最多不超過(guò)2。5種促滲劑中,5%的油酸和5%的丙二醇混合使用效果最佳,原因是丙二醇可以改變皮膚角質(zhì)層細(xì)胞的膜蛋白排列結(jié)構(gòu),它對(duì)油酸的促滲效果可起到協(xié)同作用,這和文獻(xiàn)的報(bào)道一致。在以Ⅲ為接受液時(shí),氮酮和IPM的促滲作用明顯被抑制,這可能是由于聚乙二醇與促滲劑間的親和力大,增加了微環(huán)境的粘度,減弱了角質(zhì)層的水合作用,使氮酮和IPM在角質(zhì)層中的分配受到抑制。以Ⅰ為接受液時(shí),由于丙二醇本身就具有較強(qiáng)的促滲作用,使得A,B,C3種促滲劑的增滲比均<1。由表6可知,萘普生在Ⅰ中的Js小于Ⅱ和Ⅲ,但Ps卻遠(yuǎn)大于Ⅱ和Ⅲ,這是由于藥物透過(guò)皮膚有2條吸收途徑:一是藥物透過(guò)皮膚表面分配進(jìn)入角質(zhì)層,擴(kuò)散通過(guò)角質(zhì)層到達(dá)活性表皮再到達(dá)真皮層;另一條是通過(guò)皮膚的附屬器官旁路體系到達(dá)真皮層被循環(huán)吸收利用。一般認(rèn)為只有分子形式藥物可以透過(guò)角質(zhì)層,離子型的通過(guò)皮膚旁路體系吸收。由于附屬器官的總面積在皮膚總表面積中所占的比例很小,故與分子形式相比離子型藥物滲透系數(shù)較小。在以Ⅲ為接受液時(shí),由于聚乙二醇分子中含有大量的醚氧原子,與藥物產(chǎn)生氫鍵結(jié)合,從而降低藥物的熱力學(xué)活性,使得萘普生滲透動(dòng)力學(xué)曲線的線性相關(guān)性較差。萘普生在生理氯化鈉溶液中滲透效果很差,10h累計(jì)滲透量?jī)H為0.484mg,原因是接受液對(duì)藥物的溶解度很差,擴(kuò)散進(jìn)行一段時(shí)間后接受液達(dá)到飽和狀態(tài),從而使透皮過(guò)程減緩或停止。以Ⅴ為接受液時(shí),盡管萘普生在其中的溶解度不及Ⅱ和Ⅲ,Js和Ps也略小于Ⅱ和Ⅲ,但其10h的累積滲透量高達(dá)9.14mg,滲透