迷迭香酸穩(wěn)定性的影響因素研究

迷迭香酸穩(wěn)定性的影響因素研究

氨基酸[r（e）]-[3-（3-羥基苯基）-1-氧代-2-羥基二苯基]-3，4-二羥基苯丙酸。1958年首次從迷迭香植物(Rosmarinusoffinalis)中分離得到,是一種水溶性的多酚類化合物。由于迷迭香酸具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗血栓和抗血小板聚集、抑制透明質(zhì)酸酶等多種生物活性,因此越來越受到人們的關注,在國內(nèi)外食品、化妝品、醫(yī)藥等方面已有著廣泛的應用。為此迷迭香酸的添加及貯藏條件就顯得尤為重要,但目前罕有關于迷迭香酸穩(wěn)定性方面的報道。本文對各種處理條件下迷迭香酸的穩(wěn)定性進行了比較全面的研究,找出影響穩(wěn)定性的各種因素,為迷迭香酸的安全使用及進一步開發(fā)利用提供科學依據(jù)。1材料、試劑和設備1.1材料表面純度80%以上的迷迭香酸天然提取物(本實驗室制備),迷迭香酸標準品(Sigma)。1.2化鉀、氯化鈉、氯化鉀、三各酸鈉、白砂糖、山梨酸鈉、三氮酸鈉、三氮酸鈉、三氮酸鈉、三氮酸鈉、三氮酸鈉、三氮酸鈉等食品級甲醇、乙睛(Merck)均為色譜純;磷酸、氫氧化鈉、鹽酸、氯化鉀、氯化鈉、氯化鎂、氯化鋅、氯化鈣、氯化錳、氯化鋁、氯化鐵、苯甲酸鈉、抗壞血酸、過氧化氫、焦亞硫酸鈉均為國產(chǎn)分析純;蔗糖、食鹽、山梨酸鉀均為食品級;試驗中所用的水均為三重蒸餾水。1.3wsz-33-65型熱電升溫水浴鍋PC2001型高效液相色譜儀:天津市蘭博實驗儀器設備有限公司;WSZ-133-65型電熱恒溫水浴鍋:上海精密儀器儀表有限公司;FA2004A型電子天平:上海精天電子儀器有限公司;sartoriusPB-10型酸度計:賽多利斯科學儀器有限公司。2方法2.1高效液相色譜法取迷迭香酸標準品10.000mg,用三重蒸餾水配成100mL水溶液,取此液10、8、6、4、2mL,分別置于干凈具塞試管中,并加三重蒸餾水體積為0、2、4、6、8mL,充分混勻后,用高效液相色譜檢測。以峰面積與標準溶液的質(zhì)量百分比濃度C(μg/mL),求回歸方程。色譜柱為VP-ODS(150×4mm),柱溫為25℃,檢測波長為280nm,流動相為水(含0.1%H3PO4)和乙腈(60∶40),流速為0.5mL/min。2.2樣品溶液的制備精確稱取迷迭香酸樣品1.000g,用水充分溶解,定容100mL。2.3香酸的穩(wěn)定性研究2.3.1樣品溶液的ph值用氫氧化鈉、鹽酸配制pH值為3~9的溶液待用。取等量的樣品溶液,分別用不同pH值的溶液稀釋至相同體積,于室溫避光條件下保存。定時取樣用高效液相色譜法檢測溶液中迷迭香酸含量,計算保存率。2.3.2光對偶氮胺穩(wěn)定性的影響取等量的樣品溶液,分別置于具塞試管中,在室內(nèi)避光、室內(nèi)散射光和日光直射3種條件下進行試驗,定時取樣測定迷迭香酸含量,計算保存率。2.3.3保存率的測定取等量的樣品溶液,分別置于10mL比色管中,于20、40、60、80、100℃的恒溫水浴中加熱,定時取出冷卻到室溫后,測定溶液中迷迭香酸含量,計算保存率。2.3.4保存率的測定取等量樣品溶液,分別加入一定量含Na+、K+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Al3+、Fe3+相同濃度的水溶液,混勻后室溫避光放置,設對照,定時取樣測定迷迭香酸含量,計算保存率。2.3.5保存率的測定取等量的樣品溶液,分別加入一定量含食鹽和蔗糖濃度為1%、2%、4%、6%、8%、10%的水溶液,混勻后室溫避光放置,設對照,取樣測定迷迭香酸含量,計算保存率。2.3.6保存率的測定取等量的樣品溶液,分別加入一定量含苯甲酸鈉和山梨酸濃度為0.05%、0.08%、0.1%、0.2%的水溶液,混勻后室溫避光放置,設對照,定時取樣測定迷迭香酸含量,計算保存率。2.3.7保存率測定取等量的樣品溶液,分別加入一定量含抗壞血酸濃度為0.1%、0.2%、0.4%、1%的水溶液,混勻后室溫避光放置,設對照,定時取樣測定迷迭香酸含量,計算保存率。2.3.8保存率的測定取等量的樣品溶液,分別加入一定量含過氧化氫和焦亞硫酸鈉濃度為0.05%、0.1%、0.2%的水溶液,混勻后室溫避光放置,設對照,定時取樣測定迷迭香酸含量,計算保存率。3結果與分析3.1繪制標準曲線采用高效液相色譜法,以迷迭香酸的標準品在其最大吸收波長280nm處繪制標準曲線,如圖1所示。求得迷迭香酸的回歸方程為:Y=8424.8X+16953,R2=0.9994,濃度在20.000mg/L~100.000mg/L范圍內(nèi)呈線性關系。3.2迷迭香酸含量從圖2可以看出,在pH3~6的條件下迷迭香酸的含量變化較小;在pH7~9條件下迷迭香酸的含量略有下降,到第5天時測定,迷迭香酸含量變化趨于平緩,保存率均在83%以上,穩(wěn)定性較好?？梢哉J為,pH對迷迭香酸的穩(wěn)定性沒有較大影響,但其穩(wěn)定性在pH3~6條件下要強于在pH7~9條件下,因此,迷迭香酸更易于在偏酸性的條件下使用。3.3迷迭香酸保存率和穩(wěn)定性如圖3所示,迷迭香酸對光照較為敏感。在日光直射條件下,迷迭香酸的含量明顯下降,在第3周測定時其保存率已下降到45.82%,穩(wěn)定性極差;在避光條件下迷迭香酸含量變化小,在第5周測定時其保存率為94.66%,且趨勢已趨于平緩,穩(wěn)定性極好;在室內(nèi)散射光條件下,經(jīng)過5周時間,迷迭香酸的保存率維持在76%以上,穩(wěn)定性一般。因此,迷迭香酸在使用及保存時應盡量避光處理。3.4加熱時間對迷迭香酸含量的影響由圖4可以看出,迷迭香酸對溫度的穩(wěn)定性良好,隨著溫度的升高穩(wěn)定性略有下降。在20、40、60℃條件下迷迭香酸的含量變化小,經(jīng)過7h加熱,迷迭香酸的保存率一直在95%以上,穩(wěn)定性極好;在80℃和100℃條件下,迷迭香酸的含量有所降低,受熱7h其保存率仍在86%以上,且變化趨勢趨于平緩,穩(wěn)定性較好。因此可以認為,溫度對迷迭香酸的穩(wěn)定性影響較小,低溫更利于迷迭香酸的保存及使用。3.5ca2+保存率如圖5所示,Mg2+、Ca2+對迷迭香酸的穩(wěn)定性影響較大,隨著時間的延長,含量明顯下降,到第5天測定時,含Mg2+的保存率由84.62%降到了60.29%,含Ca2+的保存率由89.58%降到了71.79%,且二者的保存率仍有明顯的下降趨勢,穩(wěn)定性差;Zn2+、Na+、K+、Al3+、Mn2+、Fe3+對迷迭香酸影響較小,到第5天測定時,迷迭香酸的保存率分別在87%、89%、89%、83%、80%、80%以上,且變化趨勢均已趨于平緩,穩(wěn)定性較好。因此,迷迭香酸在保存和使用過程中應盡量避免與Mg2+、Ca2+并存。3.6蔗糖濃度對迷迭香酸穩(wěn)定性的影響由圖6a所示,食鹽濃度的增加對迷迭香酸的含量沒有影響,其保存率一直保持在96%以上,穩(wěn)定性極好;從圖6b可以看出,蔗糖濃度的增加對迷迭香酸的含量沒有影響,其保存率一直在97%以上,穩(wěn)定性極好。因此,食鹽和蔗糖可以跟迷迭香酸很好的共存。3.7山梨酸鉀對迷迭香酸穩(wěn)定性的影響由圖7a所示,0.05%的苯甲酸鈉對迷迭香酸的含量幾乎沒有影響,保存率極高;當苯甲酸鈉的濃度增大到0.08%時,迷迭香酸的含量明顯下降,保存率降到了60%,且隨著苯甲酸鈉濃度的增加迷迭香酸的保存率逐漸降低。由圖7b可以看出,山梨酸鉀對迷迭香酸的穩(wěn)定性有影響,當山梨酸鉀的濃度為0.05%時,迷迭香酸的含量減少較小,保存率維持在80%,穩(wěn)定性一般,隨著山梨酸鉀濃度的增大,迷迭香酸的含量急劇下降,穩(wěn)定性變差。因此,迷迭香酸可與濃度低于0.05%的苯甲酸鈉和山梨酸鉀共同使用。3.8抗壞血酸濃度對迷迭香酸保存率的影響由圖8可以看出,抗壞血酸的存在對迷迭香酸的穩(wěn)定性有一定的影響。當抗壞血酸的濃度為0.1%時,迷迭香酸的保存率變化較小;當抗壞血酸的濃度增大到0.2%時,迷迭香酸的保存率明顯下降,在第5天時測定,其保存率降到了72.53%,且仍有繼續(xù)降低的趨勢。隨著抗壞血酸濃度的增加,迷迭香酸的保存率有明顯的下降趨勢。因此,迷迭香酸可與濃度為0.1%的抗壞血酸共存,抗壞血酸的添加濃度控制在0.1%以下,迷迭香酸穩(wěn)定效果最佳,在使用過程中應該注意。3.9焦亞硫酸鈉的濃度如圖9a所示,濃度為0.05%的過氧化氫對迷迭香酸的影響較小,在第72h時測定,其保存率為84.39%,且變化趨勢趨于平緩,保存率較好;當過氧化氫濃度增大到0.1%、0.2%時,在第4h時測定,其保存率已經(jīng)分別降低到了56.74%和51.27%,穩(wěn)定性差。由圖9b可見,焦亞硫酸鈉的存在對迷迭香酸的含量影響較小,當焦亞硫酸鈉的濃度為0.2%時,在第72h時測定,迷迭香酸的保存率為81.73%,且變化趨勢趨于平緩,保存率較好。因此,迷迭香酸可以和還原劑焦亞硫酸鈉和低濃度的氧化劑過氧化氫共存。4其他保護因素對迷迭香酸穩(wěn)定性的研究結果表明:迷迭香酸的穩(wěn)定性較好。食鹽和蔗糖對迷迭香酸穩(wěn)定性的沒有影響;pH和溫度對迷迭香酸的穩(wěn)定性影響較小,結果表明迷迭香酸更適宜在酸性以及低溫的條