臨床病原學(xué)檢查知識(shí)

臨床病原學(xué)檢查1精選課件不同病原體(細(xì)菌、螺旋體、支原體、放線(xiàn)菌、衣原體、立克次體、病毒、真菌、原蟲(chóng)、蠕蟲(chóng))所致感染性疾病的實(shí)驗(yàn)診斷方法各有其特點(diǎn)，但幾乎都遵循以下基本原則：①正確、規(guī)范采集和運(yùn)送標(biāo)本；②通過(guò)直接顯微鏡查見(jiàn)病原體或檢出病原體抗原成分；③借助分子生物學(xué)的方法檢測(cè)病原體核酸；④利用免疫學(xué)方法檢測(cè)機(jī)體對(duì)病原體抗原成分產(chǎn)生的免疫產(chǎn)物；⑤對(duì)病原體進(jìn)行分離與鑒定。在完成病原體的檢出和鑒定任務(wù)后，結(jié)合病人的病史、癥狀或體征，快速作出診斷。并積極參與臨床選擇抗微生物藥物，指導(dǎo)和監(jiān)控微生物的治療方案，避免耐藥菌株的產(chǎn)生。2精選課件標(biāo)本采集和運(yùn)送：根據(jù)各種病原體所致感染性疾病的病程確定標(biāo)本采集的時(shí)間、部位和種類(lèi)。所有采集的標(biāo)本均置于無(wú)菌或清潔容器中，不能接觸消毒劑和抗菌藥物。標(biāo)本必須注明姓名、年齡、性別、采集日期、臨床診斷、檢驗(yàn)項(xiàng)目等。標(biāo)本采集后應(yīng)按要求處理，立即送往病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室，對(duì)于烈性傳染病材料的運(yùn)送需專(zhuān)人護(hù)送。3精選課件(一)血液標(biāo)本疑為菌血癥、敗血癥和膿毒血癥患者，一般在發(fā)熱初期和高峰期采集，如已用抗菌藥物治療者，則在下次用藥前采集。采樣以無(wú)菌法由肘靜脈穿刺，成人每次10-20ml，嬰兒和兒童為1-2ml，血液置于盛有抗凝劑聚茴香腦磺酸鈉無(wú)菌瓶中送檢。大多數(shù)菌血癥呈周期性，故血標(biāo)本也需在24h內(nèi)周期性收集，一般24h內(nèi)收集2-3次血標(biāo)本分別培養(yǎng)。4精選課件(二)腦脊液與其他無(wú)菌體液標(biāo)本無(wú)菌采集腦脊液，腦脊液通常離心10000×glOmin，取沉淀作顯微鏡檢查。引起腦膜炎的病原體腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等其抵抗力弱，不耐冷、容易死亡，故采集的腦脊液應(yīng)立即保溫送檢或床邊接種。胸水、腹水和心包液等因標(biāo)本含菌量少宜采集較大量標(biāo)本送檢以保證檢出Tc5精選課件(三)尿液標(biāo)本外尿道寄居有正常菌群，故采集尿液時(shí)更應(yīng)注意無(wú)菌操作，常用清潔中段尿作為送檢標(biāo)本。對(duì)于厭氧菌的培養(yǎng)，采用膀胱穿刺法收集、無(wú)菌厭氧小瓶運(yùn)送。排尿困難者可導(dǎo)尿，但應(yīng)避免多次導(dǎo)尿所致尿路感染。6精選課件(四)呼吸道標(biāo)本鼻咽拭子、痰、通過(guò)氣管收集的標(biāo)本均可作為呼吸道標(biāo)本。后者可避免正常菌群污染，為下呼吸道感染病原學(xué)診斷的理想標(biāo)本。鼻咽拭子和鼻咽洗液可供鼻病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎衣原體、溶血性鏈球菌等病原學(xué)診斷。不合格的痰標(biāo)本(扁平上皮細(xì)胞≥25個(gè)／低倍鏡視野)富含上呼吸道正常菌群，在病原學(xué)診斷時(shí)需加以注意。7精選課件(五)糞便標(biāo)本取含膿、血或粘液糞便置于清潔容器中送檢排便困難者或嬰幼兒可用直腸拭子采集。根據(jù)細(xì)菌種類(lèi)不同選用合適運(yùn)送培養(yǎng)液以提高陽(yáng)性檢出率，如副溶血弧菌引起腹瀉的糞便應(yīng)置于堿性蛋白胨水或卡一布運(yùn)送培養(yǎng)液。一次糞便培養(yǎng)陰性不能完全排除胃腸道病原菌的存在，對(duì)于傳染性腹瀉患者需三次送檢糞便進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。對(duì)疑為寄生蟲(chóng)感染者，應(yīng)盡快運(yùn)送水樣便，以保持原蟲(chóng)滋養(yǎng)體活力；若不及時(shí)送檢，糞便標(biāo)本置于含10％甲醛和聚乙烯醇的小螺口塑料容器內(nèi)保存。8精選課件(六)泌尿生殖道標(biāo)本根據(jù)不同疾病的特征及檢驗(yàn)?zāi)康牟杉煌瑯?biāo)本，如性傳播性疾病常取尿道口分泌物、外陰糜爛面病灶邊緣分泌物、陰道宮頸口分泌物和前列腺液等。對(duì)生殖道皰疹常穿刺皰疹液，盆腔膿腫者則于直腸子宮陷凹處穿刺膿液。懷疑衣原體感染的標(biāo)本不應(yīng)使用木柄拭子，因?yàn)槟举|(zhì)對(duì)該病原體有毒性作用。除淋病奈瑟菌保溫送檢外，所有標(biāo)本收集后40℃保存直至培養(yǎng)。9精選課件(七)創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本對(duì)損傷范圍較大的創(chuàng)傷,應(yīng)從不同部位采集多份標(biāo)本。采集部位應(yīng)首先清除污物,以碘酒,酒精消毒皮膚,防止表面污染菌混入標(biāo)本影響檢測(cè)結(jié)果。開(kāi)放性膿腫的采集,用無(wú)菌棉拭采取膿液及病灶深部分泌物。封閉性膿腫,則以無(wú)菌干燥注射器穿刺抽取;疑為厭氧菌感染者,取膿液后立即排凈注射器內(nèi)空氣，針頭插入無(wú)菌橡皮塞送檢,否則標(biāo)本接觸空氣導(dǎo)致厭氧菌死亡而降低臨床分離率。用于病毒檢測(cè)的組織標(biāo)本宜放在有滅菌鹽水紗布的培養(yǎng)皿內(nèi)或病毒運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)運(yùn)送,用勻漿管勻漿、離心、過(guò)濾后,作病毒分離鑒定。10精選課件(八)血清標(biāo)本用于檢測(cè)患者特異性抗體效價(jià)以輔助診斷感染性疾病。采集血液置無(wú)菌試管中，自然凝固、血塊收縮后吸取血清，56℃加熱30min以滅活補(bǔ)體成分。滅活血清保存于－20℃。11精選課件檢測(cè)方法由實(shí)驗(yàn)技術(shù)直接或間接獲得病原體及病原體結(jié)構(gòu)成分，是確診感染性疾病的一個(gè)重要依據(jù)。臨床實(shí)驗(yàn)室中細(xì)菌性疾病以培養(yǎng)分離技術(shù)為主，病毒性疾病以免疫學(xué)方法為主。12精選課件(一)直接顯微鏡檢查標(biāo)本直接涂片、干燥、固定后染色，或經(jīng)離心濃縮集菌，涂片染色，置光學(xué)顯微鏡下觀察病原體的形態(tài)、染色性或觀察宿主細(xì)胞內(nèi)包涵體的特征。另一種方法是采用懸滴法或壓滴法，在不染色狀態(tài)下借助暗視野顯微鏡或相差顯微鏡觀察病原體的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)方式、螺旋體形態(tài)和運(yùn)動(dòng)。濕式涂片有助于寄生蟲(chóng)蟲(chóng)卵檢查。直接鏡檢結(jié)果對(duì)病原學(xué)診斷具有一定意義，尤其是無(wú)菌體液的直接鏡檢更具有診斷價(jià)值，如腦脊液涂片中查見(jiàn)革蘭染色陰性腎形雙球菌，結(jié)合患者發(fā)熱、噴射狀嘔吐、劇烈頭痛和腦膜刺激體征，可作出流行性腦脊髓膜炎的診斷。13精選課件那些有正常菌群寄居的腔道分泌物，涂片鏡檢雖不能確定診斷，但對(duì)進(jìn)一步檢出的步驟、采用的方法和分離鑒定病原體所需培養(yǎng)基有重要提示作用，如在米泔水樣便的懸滴片動(dòng)力檢查，發(fā)現(xiàn)有運(yùn)動(dòng)活潑的魚(yú)群樣弧菌，常提示弧菌科細(xì)菌感染，可進(jìn)一步用堿性蛋白胨水增菌，分離接種于硫代硫酸鹽一檸檬酸鹽一膽汁一蔗糖(thiosulfatecitrate-bilesalts-sucrose，TCBS)選擇培養(yǎng)基。組織標(biāo)本和皰疹分泌物涂片經(jīng)瑞特染色后，查見(jiàn)多核巨細(xì)胞和核內(nèi)嗜酸性包涵體可早期診斷皰疹病毒感染。臨床上不常規(guī)應(yīng)用電鏡檢查，但對(duì)某些病毒感染有確診價(jià)值，如嬰幼兒急性胃腸炎腹瀉糞便電鏡下查見(jiàn)車(chē)輪狀的雙層衣殼病毒顆粒即可診斷為輪狀病毒感染。常用的電鏡技術(shù)有超薄切片標(biāo)本電鏡觀察、負(fù)染標(biāo)本電鏡觀察和免疫電鏡技術(shù)。14精選課件(二)病原體分離、培養(yǎng)和鑒定分離培養(yǎng)是病原學(xué)檢驗(yàn)中確診的關(guān)鍵步驟，分離出病原體后，才能進(jìn)一步鑒定病原體和作藥敏試驗(yàn)。分離培養(yǎng)細(xì)菌，應(yīng)根據(jù)可疑菌生長(zhǎng)培養(yǎng)特性，選擇合適的培養(yǎng)基，提供合適的氣體條件、溫度和pH，使細(xì)菌在體外人工培養(yǎng)基中得以生長(zhǎng)、繁殖形成菌落。根據(jù)菌落性狀(大小、色澤、氣味、邊緣、光滑度、色素、溶血情況等)和細(xì)菌的形態(tài)、染色性，檢測(cè)細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果和血清學(xué)試驗(yàn)，可對(duì)分離菌作出鑒定。為了盡快地對(duì)分離菌作出檢驗(yàn)結(jié)論，應(yīng)選擇可靠而適用的特征作為鑒定指標(biāo)，同時(shí)也可借助于微量鑒定系統(tǒng)，快速簡(jiǎn)便鑒定分離菌。15精選課件對(duì)于不能人工培養(yǎng)的病原體，如病毒、立克次體、衣原體，可將標(biāo)本接種易感動(dòng)物、雞胚或行細(xì)胞培養(yǎng)，進(jìn)行病原體分離。接種動(dòng)物后，可根據(jù)動(dòng)物感染范圍、動(dòng)物發(fā)病情況及潛伏期，初步推測(cè)為某種病原體。接種于雞胚的病毒，根據(jù)不同接種途徑的敏感性及所形成的特殊病灶，有助于初步鑒定。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的病毒，因病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖后，可引起細(xì)胞病變或紅細(xì)胞吸附、干擾現(xiàn)象、血凝性質(zhì)等特性以縮小病毒的鑒定范圍，最后用血清學(xué)方法作最后鑒定。16精選課件(三)病原體抗原檢測(cè)用已知抗體，借助免疫熒光技術(shù)、酶免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、膠乳凝集試驗(yàn)等技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中未知的病原體抗原即為病原體的抗原檢測(cè)。病原體抗原有細(xì)菌菌體抗原、鞭毛抗原、毒素、侵襲性酶、病毒的衣殼蛋白、包膜抗原等。病原體的抗原成分檢測(cè)有助于早期診斷感染性疾病，陽(yáng)性結(jié)果提示某種感染性病原體的存在，但對(duì)那些存在正常菌群的標(biāo)本，需考慮共同抗原引起的交叉反應(yīng)，必須在有嚴(yán)格對(duì)照試驗(yàn)和排除試驗(yàn)時(shí)，對(duì)陽(yáng)性結(jié)果才能作出正確判斷。17精選課件抗原檢查診斷價(jià)值常隨不同標(biāo)本各異。若在無(wú)菌體液、血液等標(biāo)本中，檢測(cè)出特異性病原體抗原，有診斷價(jià)值，如腦脊液中查到腦膜炎奈瑟菌抗原可診斷為流行性腦脊髓膜炎；若在宮頸拭子或男性尿道拭子檢出淋病奈瑟菌或沙眼衣原體抗原有診斷意義，因?yàn)檫@些標(biāo)本中沒(méi)有或很少有其他微生物存在；若在肛拭中檢出病原體抗原，則因肛拭中存在有多種微生物，可因交叉抗原存在而不能肯定診斷。使用特異性好、效價(jià)高的單克隆抗體尤為重要，在有嚴(yán)格的對(duì)照和排除試驗(yàn)時(shí)，選擇和制備完好的細(xì)胞標(biāo)本，檢測(cè)只能在活細(xì)胞內(nèi)增殖的病毒或立克次體、衣原體，陽(yáng)性的結(jié)果可作出準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷。18精選課件(四)病原體核酸檢測(cè)核酸檢測(cè)技術(shù)主要有聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和DNA探針雜交技術(shù)。PCR是將待檢標(biāo)本經(jīng)細(xì)胞裂解液裂解后，在加有引物、四種三磷酸核苷、TaqDNA聚合酶和含Mg，、緩沖體系中，經(jīng)變性、退火、延伸三個(gè)不同反應(yīng)溫度進(jìn)行多次循環(huán)，再將擴(kuò)增DNA產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳染色法、Southern印跡法、酶譜分析法和序列分析法四種方法之一，檢測(cè)出病原體的核酸。PCR只需在簡(jiǎn)便條件下，在短短數(shù)小時(shí)內(nèi)可將病原體基因或DNA片段特異地?cái)U(kuò)增幾十萬(wàn)倍。19精選課件它已廣泛應(yīng)用于感染性疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷尤其是那些不易分離培養(yǎng)的病原體。由于PCR具有很高的敏感性，試驗(yàn)影響因素很多，不適當(dāng)?shù)臉?biāo)本處理，外源性和內(nèi)源性蛋白酶、核酸酶、DNA多聚酶抑制劑等均可造成假陰性反應(yīng)。反應(yīng)體系中極微量待測(cè)DNA序列的污染均可產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，故操作者必須制訂嚴(yán)格的工作程序防止污染發(fā)生，并設(shè)立陰性對(duì)照。20精選課件將放射性核素或非放射性物質(zhì)標(biāo)記的已知序列核酸單鏈探針和固定在固相載體上的標(biāo)本中病原體核酸退火形成雙鏈雜交體，通過(guò)雜交標(biāo)記物的檢測(cè)，鑒定標(biāo)本中的相應(yīng)病原體基因，此為核酸雜交法。雜交方法以固相法為多，其技術(shù)有斑點(diǎn)雜交、Southen印跡法、原位雜交法和Northen印跡法等。雜交信號(hào)的檢測(cè)常用顯色法、放射自顯影、放射性核素脈沖數(shù)測(cè)量和發(fā)光法。核酸雜交法適用于目前尚不能分離培養(yǎng)或很難分離培養(yǎng)的微生物檢測(cè)。21精選課件(五)病原體抗體檢測(cè)是指用已知病原體抗原檢測(cè)患者血清中相應(yīng)抗體的方法診斷感染性疾病。常用的方法有凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接免疫熒光技術(shù)、放射免疫測(cè)定、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。大多數(shù)的抗體檢測(cè)試驗(yàn)中，所用的抗原為病原體特異性抗原(整個(gè)病原體、病原體成分或產(chǎn)物)，有一部分抗體檢查使用病原體的共同抗原，如診斷梅毒病使用牛心提取的類(lèi)脂抗原，這類(lèi)試驗(yàn)為非特異性試驗(yàn)。22精選課件抗體檢測(cè)的價(jià)值常用敏感性、特異性和預(yù)測(cè)值來(lái)評(píng)價(jià)。臨床醫(yī)生必須根據(jù)其目的要求達(dá)到確診某一疾病、排除某一疾病或監(jiān)測(cè)疾病治療的效果。理論上所希望的一個(gè)高度敏感的導(dǎo)致高陰性預(yù)測(cè)值和高度特異的導(dǎo)致高陽(yáng)性預(yù)測(cè)值的試驗(yàn)并不存在，實(shí)踐中常根據(jù)診斷的兩個(gè)基本目的，權(quán)衡敏感性和特異性選擇試驗(yàn)項(xiàng)目。當(dāng)目的為排除某一疾病時(shí)，即選擇高敏感度、高陰性預(yù)測(cè)值的試驗(yàn)；當(dāng)目的為確診某一疾病時(shí)，即選擇高特異度、高陽(yáng)性預(yù)測(cè)值的試驗(yàn)。23精選課件細(xì)菌感染檢查細(xì)菌感染檢查一、檢驗(yàn)特點(diǎn)各種細(xì)菌都有一定的形態(tài)、染色特性、生化反應(yīng)和抗原結(jié)構(gòu)。通過(guò)對(duì)標(biāo)本直接顯微鏡檢查、病原菌的分離培養(yǎng)鑒定、病原菌的抗原檢測(cè)、核酸檢測(cè)和細(xì)菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答產(chǎn)物的測(cè)定及藥物敏感性試驗(yàn)，對(duì)細(xì)菌感染性疾病可作出及時(shí)、準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷。在檢查項(xiàng)目中，尤以細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定為主，在無(wú)菌標(biāo)本中檢查到細(xì)菌則此細(xì)菌為感染的病原，如血液中檢查到細(xì)菌，診斷為敗血癥；腦脊液中查到細(xì)菌即為細(xì)菌性腦膜炎。存在有正常菌群的標(biāo)本中檢查到細(xì)菌，應(yīng)區(qū)分是正常寄居的菌群或是致病的細(xì)菌，常需作細(xì)菌定量計(jì)數(shù)，根據(jù)細(xì)菌數(shù)判斷是否為感染的病原菌，如尿液中分離到革蘭陰性桿菌，若定量在10‘／mlcfu菌落形成單位菌數(shù)以上，則為尿路感染。24精選課件25精選課件檢測(cè)項(xiàng)目

染色標(biāo)本顯微鏡檢測(cè)1．革蘭染色革蘭染色(Gramstain)和顯微鏡檢查(microscopicexamination)是細(xì)菌感染快速診斷的簡(jiǎn)單方法，用于各種滲出液、抽出液、尿液、腦脊液和血液的細(xì)菌檢查。2?？顾崛旧顾崛旧?fast-acidstain)適用于痰標(biāo)本分枝桿菌檢查，對(duì)診斷結(jié)核病具有重要意義。不染色標(biāo)本顯微鏡檢測(cè)l。濕片懸滴法檢測(cè)(examinationofwetmount)借助暗視野顯微鏡或相差顯微鏡觀察標(biāo)本中病原菌的生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)方式，有助于疾病病原體診斷。2。濕片細(xì)菌計(jì)數(shù)濕片高倍視野鏡檢尿液，若每高倍視野發(fā)現(xiàn)1個(gè)或1個(gè)以上細(xì)菌有診斷其為尿路感染病原菌。26精選課件分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)(isolationandculture)是細(xì)菌學(xué)檢查的關(guān)鍵，其目的是從臨床標(biāo)本中找出活的細(xì)菌，進(jìn)一步進(jìn)行鑒定，確定其致病性和耐藥性，指導(dǎo)抗菌治療和預(yù)測(cè)治療效果。不同細(xì)菌培養(yǎng)所需條件及生長(zhǎng)特征各異，因此必須根據(jù)臨床要求、送檢標(biāo)本的性質(zhì)和培養(yǎng)目的，選用不同的培養(yǎng)基，不同的接種方法和培養(yǎng)條件。27精選課件

鑒定技術(shù)鑒定(identification)是指對(duì)標(biāo)本中分離的細(xì)菌按分類(lèi)原則放入某系統(tǒng)合適位置，是細(xì)菌分類(lèi)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程。細(xì)菌鑒定技術(shù)有生化鑒定(biochemicalidenti-fication)、血清學(xué)鑒定(serologicidentification)、在常量生化鑒定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的數(shù)碼鑒定(numeralidentification)和自動(dòng)化儀器鑒定(automatedidentification)。核酸檢測(cè)PCR技術(shù)適用于細(xì)菌感染診斷，尤其是人工培養(yǎng)基不能生長(zhǎng)的細(xì)菌和營(yíng)養(yǎng)要求高不易培養(yǎng)的細(xì)菌，如麻風(fēng)桿菌、幽門(mén)螺桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌。對(duì)生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌(結(jié)核分枝桿菌)或一種臨床癥狀內(nèi)多種細(xì)菌感染的診斷也可采用PCR方法。28精選課件抗體檢測(cè)抗體檢查適用于經(jīng)抗生素治療后或慢性細(xì)菌性感染，因?yàn)榇藭r(shí)病原體的分離培養(yǎng)常為陰性，可用抗體檢測(cè)診斷感染。由于感染后的抗體反應(yīng)相當(dāng)復(fù)雜，因此抗體檢查結(jié)果需考慮其特異性和敏感性。一次性較高效價(jià)抗體并不能完全說(shuō)明問(wèn)題，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)雙份血清(1份為急性期，1份為1周或數(shù)周后的恢復(fù)期)，效價(jià)4倍增長(zhǎng)，說(shuō)明曾有感染。因此，血清學(xué)診斷更應(yīng)用于流行病學(xué)調(diào)查。利用血清學(xué)方法診斷細(xì)菌感染有肥達(dá)反應(yīng)、抗鏈球菌溶血素“0”試驗(yàn)、檢查兔熱病和波浪熱的凝集反應(yīng)、檢查軍團(tuán)菌病的熒光抗體試驗(yàn)等。29精選課件細(xì)菌毒素檢測(cè)1．外毒素(exotoxin)檢測(cè)有生物學(xué)法、免疫血清學(xué)法和PCR法及自動(dòng)化儀器檢測(cè)法。2。內(nèi)毒素(endotoxin)檢測(cè)革蘭陰性菌的極小量?jī)?nèi)毒素(1ipopolysaCCharidC，LPS)可引起廣泛生物學(xué)作用，因此對(duì)LPS檢測(cè)有利于判定細(xì)菌感染嚴(yán)重程度，及早預(yù)防和發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素休克的發(fā)生。30精選課件細(xì)菌感染檢查項(xiàng)目的選擇和應(yīng)用顯微鏡檢查、分離培養(yǎng)、血清學(xué)試驗(yàn)、生化鑒定和PCR等核酸檢測(cè)是細(xì)菌感染診斷的基本方法，①無(wú)菌性標(biāo)本(血液、腦脊液、體腔滲出液)，采用顯微鏡檢查和直接藥敏試驗(yàn)可作出病原學(xué)診斷和提供用藥指導(dǎo)；②膿血便，革蘭染色無(wú)診斷意義，需用標(biāo)記抗體染色鏡檢獲初步報(bào)告，再經(jīng)選擇培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，挑取可疑菌落作玻片血清凝集，陽(yáng)性者可初步鑒定，配套生化反應(yīng)可作出最后報(bào)告；③尿液標(biāo)本，顯微鏡檢查可初步估計(jì)細(xì)菌菌量，作出初步診斷，再經(jīng)分離培養(yǎng)鑒定后和菌落定量計(jì)數(shù)可作出病原學(xué)診斷；④痰標(biāo)本，采用顯微鏡檢查，判定是否為合格標(biāo)本，經(jīng)過(guò)接種培養(yǎng)，檢出致病性菌落，再進(jìn)行鑒定和藥敏；⑤對(duì)臨床指征明確，只為獲得病原學(xué)證實(shí)的細(xì)菌，常采用對(duì)某一種細(xì)菌檢驗(yàn)程序。31精選課件病毒感染檢查

32精選課件真菌感染檢查

33精選課件34精選課件真菌的抗體檢測(cè)

1.曲霉菌免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(immunodiffusionofAspergillosiss)血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性者其培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性可考慮給予臨床確診。2.芽生菌病血清學(xué)試驗(yàn)(serologictestofBlastomycosis)包括有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、免疫擴(kuò)散試驗(yàn)和酶免疫試驗(yàn)。3．念珠菌病血清學(xué)試驗(yàn)(serologictestofCandidiasis)至今抗體檢測(cè)無(wú)臨床診斷價(jià)值。4．球孢子菌病補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：具有臨床診斷價(jià)值。對(duì)有癥狀患者而其雙份血清抗體效價(jià)4倍增長(zhǎng)或效價(jià)≥1：16可作出診斷。5．隱球菌病血清學(xué)試驗(yàn)(serologictestofCryptococcosis)抗體檢測(cè)無(wú)臨床意義。利用膠乳凝集試驗(yàn)檢測(cè)腦脊液中隱球菌的多糖抗原具有診斷隱球菌性腦膜炎的價(jià)值。6．組織胞漿病血清學(xué)檢測(cè)(serologictestofHistoplamosis)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)單份血清抗體效價(jià)高于1：32或雙份血清效價(jià)4倍增長(zhǎng)可作現(xiàn)期感染診斷。7．孢子絲菌病膠乳凝集試驗(yàn)(1atexagglutinationofSportrichosis)抗體效價(jià)高于1：80有診斷價(jià)值。35精選課件真菌感染檢查項(xiàng)目的選擇和應(yīng)用直接顯微鏡檢查是診斷淺部真菌感染的主要手段，通過(guò)涂片鏡檢查找菌絲和孢子可作出真菌感染診斷，再經(jīng)培養(yǎng)、菌落性狀觀察，鏡下孢子和菌絲形態(tài)特點(diǎn)，可作出對(duì)菌種的鑒定。深部真菌感染常取標(biāo)本作培養(yǎng)，在觀察培養(yǎng)物性狀后，需借助理化特性作出菌種鑒別。血清學(xué)方法對(duì)深部真菌感染及二相型真菌感染具有一定診斷價(jià)值，依各種不同血清學(xué)方法對(duì)不同真菌有不同診斷價(jià)值。分子生物學(xué)技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展的技術(shù)，目前較為成熟的rDNA探針已有試劑盒應(yīng)用于診斷。36精選課件寄生蟲(chóng)感染檢查檢測(cè)項(xiàng)目(一)顯微鏡檢查1。糞便檢查①新鮮糞便生理鹽水涂片檢查滋養(yǎng)體或包囊，根據(jù)滋養(yǎng)體和包囊形態(tài)特點(diǎn)，可診斷腸道阿米巴病、賈第蟲(chóng)病，查找?guī)Ы{蟲(chóng)蟲(chóng)卵及孕節(jié)可作出帶絳蟲(chóng)病診斷；②糞便抗酸染色檢查隱孢子蟲(chóng)卵以診斷隱孢子病，同時(shí)也可作金胺“。”染色糞便涂片、熒光顯微鏡檢查，可作為隱孢子蟲(chóng)病的篩選；③糞便重力沉淀法檢查蟲(chóng)卵或孵化法檢查毛蚴可有助于血吸蟲(chóng)病診斷；④糞便濕片法查找蟲(chóng)卵是診斷腸道蠕蟲(chóng)感染的可靠方法，包括對(duì)蛔蟲(chóng)病、鞭蟲(chóng)病、類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)病和鉤蟲(chóng)病。2．十二指腸引流液檢查對(duì)糞便陰性者，可取十二指腸引流液直接鏡檢或離心濃集后鏡檢，其陽(yáng)性率較高，可用于賈第蟲(chóng)病、阿米巴病、梨形蟲(chóng)病及隱孢子病檢查。37精選課件3．血液涂片檢查分血薄片和厚片檢查，血液涂片檢查是確診瘧疾唯一根據(jù)，傳統(tǒng)上用薄厚同時(shí)涂片方法，吉姆薩或瑞特染色，先在厚片中快速查找瘧原蟲(chóng)，再在薄片中查找細(xì)胞內(nèi)瘧原蟲(chóng)。巴貝蟲(chóng)病的實(shí)驗(yàn)診斷也有賴(lài)于血涂片顯微鏡檢查，形態(tài)頗似惡性瘧原蟲(chóng)，不同的是無(wú)色素和配子體，在同一個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)不同發(fā)育階段的多個(gè)巴貝蟲(chóng)。4．痰和支氣管灌洗液檢查標(biāo)本用粘液溶解劑處理后離心濃縮，沉渣涂片，染色鏡檢，烏洛托品染色后見(jiàn)棕褐色包囊和特征性括弧樣結(jié)構(gòu)，具有診斷價(jià)值。5。陰道、尿道、前列腺分泌物檢查保暖的新鮮標(biāo)本生理鹽水涂片見(jiàn)運(yùn)動(dòng)活潑蟲(chóng)體，也可用標(biāo)本涂片固定后吉姆薩染色，同時(shí)還可觀察微生物病原體。6．活檢組織檢查組織切片或壓片染色鏡檢，觀察賈第蟲(chóng)原體、弓形蟲(chóng)游離或胞內(nèi)滋養(yǎng)體、利什曼原蟲(chóng)的利一杜體，可對(duì)上述寄生蟲(chóng)感染作出診斷，直腸活組織檢查、廠叮橙染色或氯化三苯四氮唑一茚三酮復(fù)染法可檢出血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵并能鑒別蟲(chóng)卵的死活。38精選課件(二)抗體檢測(cè)利用血清學(xué)方法檢查各類(lèi)寄生蟲(chóng)的蟲(chóng)體抗原或機(jī)體對(duì)此產(chǎn)生的抗體，隨著單克隆抗體的出現(xiàn)，使用比先前廣泛。(三)核酸檢測(cè)應(yīng)用DNA探針檢測(cè)標(biāo)本中寄生蟲(chóng)DNA或RNA，目前已有：①“P標(biāo)記惡性瘧原蟲(chóng)全基因組DNA可檢出0．0001％蟲(chóng)體濃度；②國(guó)內(nèi)建立的杜氏利什曼原蟲(chóng)kDNA檢測(cè)利什曼原蟲(chóng)；③克氏錐蟲(chóng)克隆基因組DNA和全基因組DNA可檢出樣品中30個(gè)錐蟲(chóng)DNA；④篩選出弓形蟲(chóng)特異性DNA片段的克隆，通過(guò)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)出500pg弓形蟲(chóng)DNA；⑤pBM68和pBM工5的兩種絲蟲(chóng)病診斷探針可檢出300—500pg馬來(lái)絲蟲(chóng)基因組DNA。近年來(lái)發(fā)展的PCR技術(shù)，已應(yīng)用與錐蟲(chóng)病、利什曼病、肺孢子蟲(chóng)病、腸球蟲(chóng)病、賈第蟲(chóng)病和弓形蟲(chóng)病等診斷。39精選課件醫(yī)院感染檢查醫(yī)院感染(nosocomialinfection)是指患者在入院時(shí)既不存在，亦不處于潛伏期，而在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生的感染，包括醫(yī)院內(nèi)獲得而在出院后發(fā)病的感染。隨著醫(yī)療技術(shù)發(fā)展，各種侵入性操作和器官移植推廣，化療、糖皮質(zhì)激素、抗生素等廣泛應(yīng)用，醫(yī)院感染是當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要問(wèn)題。40精選課件醫(yī)院感染流行病學(xué)(一)病原學(xué)細(xì)菌為最常見(jiàn)的病原體，細(xì)菌的種類(lèi)與分布因感染類(lèi)型、醫(yī)院類(lèi)別、患者基礎(chǔ)疾病和治療措施不同各異。(二)感染源和易感人群引起醫(yī)院感染的病原體來(lái)源于住院病人、醫(yī)務(wù)人員、探視者、陪住人員，來(lái)自于醫(yī)院環(huán)境及未徹底消毒滅菌的醫(yī)療器械、血液制品的污染菌等，大多為條件性致病菌，且有程度不同的耐藥性。(三)常見(jiàn)的臨床類(lèi)型：1.下呼吸道感染為我國(guó)最常見(jiàn)的醫(yī)院感染類(lèi)型。2．尿路感染住院期間有尿路器械操作史的患者，常由于保留導(dǎo)尿系統(tǒng)的交叉污染造成導(dǎo)管外上行性感染，常以大腸埃希菌、變形桿菌為主。3．手術(shù)切口感染清潔傷口感染大部分為外源性感染，醫(yī)務(wù)人員手指皮膚的接觸傳播起了十分重要的作用。4。胃腸道感染主要見(jiàn)于使用抗生素所致腸炎，如金黃色葡萄球菌和艱難梭菌所致偽膜性腸炎。5。血液感染主要為菌血癥，可由靜脈內(nèi)輸液、血液透析等引起，也可源于外科手術(shù)、下呼吸道感染或皮膚感染。6．皮膚和軟組織感染由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等引起的蜂窩織炎、褥瘡和燒傷感染等。41精選課件醫(yī)院感染病原學(xué)監(jiān)測(cè)(一)標(biāo)本采集和送檢原則標(biāo)本采集和送檢基本原則：①發(fā)現(xiàn)醫(yī)院感染應(yīng)及時(shí)采集標(biāo)本做病原學(xué)檢查；②嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，避免正常菌群污染；③應(yīng)立即送檢，床邊接種可提高檢出率；④對(duì)混有正常菌群的污染標(biāo)本應(yīng)作定量(或半定量)培養(yǎng)，以判別是感染菌或定植菌；⑤對(duì)分離到的病原菌應(yīng)作藥敏試驗(yàn)，提倡“分級(jí)報(bào)告”(即分階段報(bào)告涂片鏡檢、初步培養(yǎng)、直接藥敏、初步鑒定、最終鑒定與藥敏結(jié)果)和“限時(shí)報(bào)告”(涂片報(bào)告2h，普通培養(yǎng)3天)。(二)涂片顯微鏡檢查常用于下呼吸道醫(yī)院感染的痰標(biāo)本，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果快速，可取得最早期病原學(xué)初步診斷。(三)分離、培養(yǎng)和鑒定該法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果直觀，特異性高，同時(shí)可作藥物敏感試驗(yàn)指導(dǎo)臨床用藥。42精選課件醫(yī)院環(huán)境細(xì)菌監(jiān)測(cè)和消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)(一)醫(yī)院環(huán)境污染的細(xì)菌監(jiān)測(cè)方法污染的環(huán)境是引起醫(yī)院感染的危險(xiǎn)因素，必須定期對(duì)空氣、物體表面、醫(yī)務(wù)人員手部和消毒滅菌效果等進(jìn)行監(jiān)測(cè)。(二)消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)方法消毒滅菌的效果監(jiān)測(cè)包括對(duì)高壓蒸氣滅菌效果的監(jiān)測(cè)、紫外線(xiàn)殺菌效果的監(jiān)測(cè)和化學(xué)消毒劑的監(jiān)測(cè)。前二者的滅菌效果監(jiān)測(cè)常用生物學(xué)指標(biāo)檢查，化學(xué)消毒劑監(jiān)測(cè)的目的是了解使用中消毒劑的細(xì)菌污染程度和消毒劑的最小殺菌濃度，殺菌率和殺菌指數(shù)的測(cè)定。醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)是預(yù)防醫(yī)院感染的主體，只有對(duì)病人、醫(yī)務(wù)人員、醫(yī)院環(huán)境進(jìn)行深入細(xì)微的監(jiān)測(cè)，才能采取針對(duì)性和有效的防治措施。監(jiān)測(cè)包括全面綜合性監(jiān)測(cè)和目標(biāo)性監(jiān)測(cè)。前者對(duì)醫(yī)院各個(gè)科室、病房進(jìn)行全面檢查分析；后者是重點(diǎn)針對(duì)感染嚴(yán)重的科室，如手術(shù)室、產(chǎn)房、ICU、母嬰同室、血液透析中心、供應(yīng)室等定期進(jìn)行微生物指標(biāo)監(jiān)測(cè)、消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)、醫(yī)院感染病原學(xué)診斷、抗生素敏感資料動(dòng)態(tài)分析等。監(jiān)測(cè)結(jié)果的分析可及時(shí)發(fā)現(xiàn)醫(yī)院感染，杜絕感染蔓延，研究醫(yī)院感染發(fā)病機(jī)制，制定有效感染措施。43精選課件性傳播疾病檢查性傳播疾病(sexualtransmitteddisease，STDs)簡(jiǎn)稱(chēng)性病，是一組通過(guò)性行為傳播的，侵犯皮膚、性器官和全身多臟器損害的感染性疾病，有艾滋病、梅毒病、淋病、軟雹下疳、性病淋巴肉芽腫、非淋菌性尿道炎、