血液的采集與血涂片的制備課件

血液的采集與血涂片的制備課件1學(xué)習(xí)目標(biāo)1.說(shuō)出血液的組成和血漿與血清的主要區(qū)別。2.敘述皮膚采血法的器材和消毒液、采血部位、操作和注意事項(xiàng)。3.記住靜脈采血法的器材和消毒液、采血部位、操作和注意事項(xiàng)。4.背誦常用抗凝劑的抗凝原理、制備方法、使用劑量、應(yīng)用范圍。學(xué)習(xí)目標(biāo)1.說(shuō)出血液的組成和血漿與血清的主要區(qū)別。2本章目錄血液的生理概述血液標(biāo)本的采集血液標(biāo)本的抗凝血涂片制備血細(xì)胞染色目標(biāo)形成性測(cè)試1目標(biāo)形成性測(cè)試2本章目錄血液的生理概述3一、血液的組成二、血液的理化性質(zhì)三、血液的功能一、血液的組成4一、血液的組成血液是由血細(xì)胞（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板）和血漿組成的紅色、粘稠、不透明、帶腥味的混懸液。離體后的血液自然凝固后，分離出來(lái)的淡黃色透明液體稱(chēng)為血清，血液加抗凝劑后分離出來(lái)的淡黃色液體稱(chēng)為血漿。血液的組成見(jiàn)下圖。一、血液的組成血液是由血細(xì)胞（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小5一、血液的組成一、血液的組成6二、血液的理化性質(zhì)(一)血量70±10ml/kg體重

(二)顏色紅色二、血液的理化性質(zhì)(一)血量7二、血液的理化性質(zhì)(三)紅細(xì)胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定性

均勻混懸狀態(tài)(四)粘稠度全血粘度為生理鹽水的4～5倍，血漿粘度為生理鹽水的1.6倍左右。

二、血液的理化性質(zhì)(三)紅細(xì)胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定性8二、血液的理化性質(zhì)(五)比密和滲透濃度

全血比密為1.050～1.060，血漿比密為1.025～1.030，紅細(xì)胞比密為1.090。

(六)pH一般為7.35～7.45。

(七)凝固性血液從血管中流出可自行凝固

。二、血液的理化性質(zhì)(五)比密和滲透濃度9三、血液的功能（一）運(yùn)輸功能（二）協(xié)調(diào)功能（三）維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定（四）防御功能三、血液的功能（一）運(yùn)輸功能10一、皮膚采血法二、靜脈采血法一、皮膚采血法11一、皮膚采血法【采血部位】手指或耳垂、或足跟或拇趾【采血針】

一次性專(zhuān)用采血針

一、皮膚采血法【采血部位】12一、皮膚采血法操作一、皮膚采血法操作13一、皮膚采血法操作一、皮膚采血法操作14一、皮膚采血法操作一、皮膚采血法操作15一、皮膚采血法操作一、皮膚采血法操作16一、皮膚采血法操作一、皮膚采血法操作17一、皮膚采血法操作一、皮膚采血法操作18一、皮膚采血法操作一、皮膚采血法操作19一、皮膚采血法一、皮膚采血法20一、皮膚采血法【注意事項(xiàng)】1.所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完好。

2.嚴(yán)格消毒皮膚,并待消毒液干后再穿刺。

3.如血流不暢,切忌用力擠壓強(qiáng)迫采血，應(yīng)重新刺針。一、皮膚采血法【注意事項(xiàng)】21二、靜脈采血法【采血部位】肘前靜脈,嬰幼兒可采用頸外靜脈?！驹噭┡c器材】1．消毒液：0.5%碘伏。

2．一次性無(wú)菌注射器或真空定量采血器。3.壓脈帶、墊枕、無(wú)菌棉簽等。二、靜脈采血法【采血部位】22二、靜脈采血法【采血方法】準(zhǔn)備→選擇靜脈→消毒→扎壓脈帶→穿刺、松壓脈帶→抽血→拔針止血→注入試管。如以下視頻所示二、靜脈采血法【采血方法】23靜脈采血法靜脈采血法24二、靜脈采血法【注意事項(xiàng)】

1.正確消毒,嚴(yán)格無(wú)菌操作。2.進(jìn)針時(shí)深度、角度不要過(guò)深、過(guò)大。3.避免溶血。4.抽血時(shí)，針?biāo)ㄖ荒芡獬?，不能?nèi)推，以免將空氣注入靜脈形成氣栓。二、靜脈采血法【注意事項(xiàng)】25一、枸櫞酸鈉二、乙二胺四乙酸鹽三、肝素下一頁(yè)返回一、枸櫞酸鈉下一頁(yè)返回26血液標(biāo)本的抗凝抗凝----應(yīng)用化學(xué)或物理學(xué)的方法，抑制或除去血液中的某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。抗凝劑----能阻止血液凝固的化學(xué)試劑。血液標(biāo)本的抗凝抗凝----應(yīng)用化學(xué)或物理學(xué)的方法，抑制27抗凝劑一、枸櫞酸鈉【原理】枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）是枸櫞酸鈉的三鈉鹽。它能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固?？鼓齽┮弧㈣?8抗凝劑一、枸櫞酸鈉【應(yīng)用范圍】血沉、凝血象、血小板功能檢查及血液保養(yǎng)液?？鼓齽┮?、29抗凝劑一、枸櫞酸鈉【用量】凝血象:109mmol/L水溶液,與血液之比為1:9；血沉:106mmol/L水溶液,與血液之比為1:4?？鼓齽┮弧㈣?0抗凝劑二、乙二胺四乙酸鹽【原理】乙二胺四乙酸（EDTA）鹽可與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物，從而阻止血凝?？鼓齽┒?、乙二胺四乙酸31抗凝劑二、乙二胺四乙酸鹽【應(yīng)用范圍】一般血液學(xué)檢查和血液粘度測(cè)定。不適于凝血象及血小板功能檢查?？鼓齽┒?、乙二胺四乙酸鹽32抗凝劑二、乙二胺四乙酸鹽【用量】其有效抗凝濃度為1～2mg/ml血液。血細(xì)胞分析儀用EDTA-K2作抗凝劑，用量為EDTA-K2?2H2O1.5～2.2mg/ml血液?？鼓齽┒⒁叶匪囊宜猁}33抗凝劑三、肝素【原理】通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合，增強(qiáng)抗凝血酶的作用，滅活絲氨酸蛋白酶，從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。抗凝劑34抗凝劑三、肝素【應(yīng)用范圍】血細(xì)胞比容測(cè)定、血液粘度測(cè)定和多種生化分析?？鼓齽?5抗凝劑三、肝素【用量】通常用肝素的鈉鹽或鉀鹽粉劑配成1g/L肝素水溶液。取0.5ml置小瓶中，37℃～50℃烘干后，能抗凝5ml血液?？鼓齽?6小結(jié)血液是由血細(xì)胞和血漿組成的紅色、粘稠、不透明、帶腥味的混懸液。凡需血液量較少的檢驗(yàn)項(xiàng)目，常用皮膚采血法，通常采手指血。采血時(shí)要注意采血部位要無(wú)病變，要擦去第一滴血，不能用力擠壓。凡需血液量較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目，要用靜脈采血法，其采血部位常用肘前靜脈。如需要抗凝抗凝血標(biāo)本時(shí)，則需要根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，采用枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸鹽和肝素等抗凝劑來(lái)阻止血液凝固。小結(jié)血液是由血細(xì)胞和血漿組成的紅色、粘稠、37血液的采集與血涂片的制備課件38請(qǐng)您練習(xí)答案:皮膚采血法用注意什么問(wèn)題?

①所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完好。②嚴(yán)格消毒皮膚，防止采血部位感染。③皮膚消毒后，待乙醇揮發(fā)干后再刺針。④如血流不暢，切不可用力擠壓勉強(qiáng)采血，而應(yīng)重新針刺。⑤出血不止時(shí)，可用消毒干棉球壓迫至血不再流出為止，必要時(shí)應(yīng)在報(bào)告單上注明，提醒臨床醫(yī)生注意。⑥進(jìn)行多項(xiàng)細(xì)胞檢查要分項(xiàng)采血時(shí)，采血的次序?yàn)椋貉“逵?jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)。請(qǐng)您練習(xí)答案:皮膚采血法用注意什么問(wèn)題?①所選擇采血部位的39請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)說(shuō)出靜脈采血的步驟？答案:準(zhǔn)備→選擇靜脈→消毒→扎壓脈帶→穿刺、松壓脈帶→抽血→拔針止血→注入試管。請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)說(shuō)出靜脈采血的步驟？答案:準(zhǔn)備→選擇靜脈→消毒→扎40請(qǐng)您練習(xí)答案:請(qǐng)說(shuō)出枸櫞酸鈉的抗凝原理、用途及其用量？枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固。主要用于血沉、凝血象和血小板功能檢查。凝血象檢查常用0.109mol/L的水溶液，與血液之比通常為1：9。魏氏法血沉測(cè)定用濃度為0.105mol/L，與血液比例為1:4（V：V）。請(qǐng)您練習(xí)答案:請(qǐng)說(shuō)出枸櫞酸鈉的抗凝原理、用途及其用量？枸櫞酸41請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)將下列抗凝方法和適宜的項(xiàng)目用線連接起來(lái)。枸櫞酸鈉血細(xì)胞比容測(cè)定乙二胺四乙酸鹽紅斑狼瘡細(xì)胞的檢驗(yàn)

肝素凝血象脫纖維法一般血液學(xué)檢查請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)將下列抗凝方法和適宜的項(xiàng)目用線連接起來(lái)。42血液的采集與血涂片的制備課件43學(xué)習(xí)目標(biāo)1.敘述載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及合格血片的標(biāo)準(zhǔn)。2.闡述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事項(xiàng)和染色結(jié)果的判斷。3.知道吉姆薩染色法和混合染色法。學(xué)習(xí)目標(biāo)1.敘述載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及合格血片44一、載玻片的清潔二、血涂片的制作一、載玻片的清潔45一、載玻片的清潔1.新玻片1mol/LHCl泡24小時(shí)→水洗→干燥。2.舊載玻片肥皂水或其他合成洗滌劑水中煮沸20分鐘→熱水洗→自來(lái)水洗→干燥。(→95%乙醇泡1小時(shí)→蒸餾水洗→干后備用)。一、載玻片的清潔1.新玻片1mol/LHCl泡2446二、血涂片的制作方法1.取血滴。2.散開(kāi)血滴。3.推片。4.干燥。

二、血涂片的制作47二、血涂片的制作取血液一滴，置于載玻片一端．以邊緣平滑的推片（推片兩端應(yīng)平整光滑，比載玻片稍窄或磨去兩角）的一端，放在血滴前方，逐漸后移接觸血滴，血液立即沿推片散開(kāi)。二、血涂片的制作取血液一滴，置于載玻片一端．以邊緣平滑的推片48二、血涂片的制作將推片與載片保持30°-45°夾角，平穩(wěn)向前推進(jìn)至載玻片的另一端，殘片上即留下一薄層血膜。二、血涂片的制作將推片與載片保持30°-45°夾角，平穩(wěn)向前49二、血涂片的制作血膜的影響因素1.血滴大小、2.推片與載玻片之間的角度、3.推片時(shí)的速度有關(guān)。血滴愈大、角度愈大、推片時(shí)速度愈快，則血膜愈厚；反之血膜愈薄。二、血涂片的制作血膜的影響因素50二、血涂片的制作良好的血涂片要求:厚薄適宜，頭體尾分明，細(xì)胞分布均勻，邊緣整齊，血膜與載玻片的兩邊和兩端各留有0.3cm和0.5cm的空隙，血膜長(zhǎng)度占載玻片的2/3左右。二、血涂片的制作良好的血涂片要求:51二、血涂片的制作二、血涂片的制作52血細(xì)胞染色瑞特染色法吉姆薩染色法混合染色法血細(xì)胞染色瑞特染色法53一、瑞特染色法【原理】瑞特染液是有酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料溶于甲醇而成。

一、瑞特染色法【原理】54一、瑞特染色法【原理】伊紅系不易解離的弱酸性染料，通常用伊紅鈉鹽（Ｎａ+Ｅ－），其有色部分是伊紅，為陰離子，所以伊紅是酸性染料。一、瑞特染色法【原理】伊紅系不易解離的弱酸性染料，通常用伊55一、瑞特染色法

【原理】美藍(lán)又名亞甲藍(lán)，為四甲基硫堇染料，有對(duì)醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)，通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)（Ｍ+ＣＩ-）。其有色部分是美藍(lán)，為陽(yáng)離子，所以是一種堿性染料。

一、瑞特染色法【原理】56一、瑞特染色法

美藍(lán)在空氣中很容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級(jí)染料（即天青），因此，在制備瑞特染料時(shí)，一部分美藍(lán)被氧化為各種天青，稱(chēng)為多色性美藍(lán)。美藍(lán)和伊紅的水溶液混合后，生成一種疏水性伊紅化美藍(lán)的中性沉淀物，即瑞特染料，其反應(yīng)式為：

水中ＭＣl＋ＮａＥ－－→ＭＥ↓＋ＮａＣl一、瑞特染色法美藍(lán)在空氣中很容易氧化為一、二、57一、瑞特染色法

【原理】細(xì)胞的受色既有化學(xué)親和作用，也有物理吸附作用。細(xì)胞中的嗜酸性物質(zhì)（如血紅蛋白、嗜酸性顆粒）易與酸性染料伊紅結(jié)合，染成粉紅色；細(xì)胞中的嗜堿性物質(zhì)（如核染色質(zhì)、嗜堿性顆粒）易與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染成藍(lán)色；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫紅色。一、瑞特染色法【原理】58一、瑞特染色法pH對(duì)細(xì)胞染色的影響1.在酸性環(huán)境中，染色偏紅；2.在堿性環(huán)境中,染色偏藍(lán)。一、瑞特染色法pH對(duì)細(xì)胞染色的影響59一、瑞特染色法pH對(duì)細(xì)胞染色的影響染色時(shí)應(yīng)用pH6.4～6.8的緩沖液維持恒定的酸堿環(huán)境。一、瑞特染色法pH對(duì)細(xì)胞染色的影響60一、瑞特染色法【試劑配制】1.瑞特染液2.磷酸鹽緩沖液（pH6.4～6.8）

一、瑞特染色法【試劑配制】61一、瑞特染色法【染色方法】

1.加瑞特染液,固定細(xì)胞0.5～1min。2.加緩沖液，并與染液吹勻，室溫下染色10min左右。3.沖洗待干。一、瑞特染色法【染色方法】62一、瑞特染色法【染色結(jié)果】1．染色適宜的血膜血膜外觀呈淡琥珀色，在顯微鏡下紅細(xì)胞染成粉紅色，在厚薄均勻處略有碟狀感。白細(xì)胞胞質(zhì)中的顆粒能顯示各種細(xì)胞的特有色彩，細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。一、瑞特染色法【染色結(jié)果】63一、瑞特染色法

2．染色結(jié)果偏酸血膜偏紅，紅細(xì)胞和嗜酸性顆粒偏紅，白細(xì)胞核呈淺藍(lán)色或不著色。3．染色結(jié)果偏堿血膜偏綠，所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色，微偏堿者紅細(xì)胞暗紅、白細(xì)胞顆粒深暗。嗜酸性顆?？扇境砂岛稚踔梁谧仙蛩{(lán)色，中性顆粒也偏粗偏堿（紫黑色）。一、瑞特染色法2．染色結(jié)果偏酸血膜偏紅，紅64一、瑞特染色法【注意事項(xiàng)】1.血膜干透后方可固定染色。2.染色時(shí)間的長(zhǎng)短與染液濃度、室溫高低及有核細(xì)胞的多少有關(guān)。3.所加染液不能過(guò)少，沖洗時(shí)不可先倒掉染液。4.染色過(guò)深時(shí)，可加甲醇退色，但應(yīng)立即沖去。染色過(guò)淺必須復(fù)染時(shí)，應(yīng)先用緩沖液將瑞特染液稀釋后再染。5.染色偏酸或偏堿時(shí)，應(yīng)更換緩沖液再染。

一、瑞特染色法【注意事項(xiàng)】65二、吉姆薩染色法【原理】吉姆薩染料由天青、伊紅組成，其染色原理與瑞特染色法基本相同，但吉姆薩染色法對(duì)細(xì)胞核著色較好?！驹噭┡渲啤?.吉姆薩染液2.磷酸鹽緩沖液二、吉姆薩染色法【原理】66二、吉姆薩染色法【染色方法】1.固定細(xì)胞2.在已固定好的血片上滴10滴緩沖液，再加吉姆薩染液1滴混合，染色10～30min，用水沖洗，待干后鏡檢。二、吉姆薩染色法【染色方法】67三、混合染色法【原理】將瑞特染料和吉姆薩染料按一定比例混合后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，其染色原理同瑞特染色法。三、混合染色法【原理】68三、混合染色法試劑配制1.瑞特-吉姆薩染液2.pH6.4～6.8磷酸鹽緩沖液染色方法同瑞特染色法。三、混合染色法試劑配制69染色成敗的關(guān)鍵是：（1）染液質(zhì)量（2）染色條件的恒定（3）染色時(shí)間的長(zhǎng)短以上一個(gè)環(huán)節(jié)不佳，均會(huì)造成血涂片的不良而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。染色成敗的關(guān)鍵是：（1）染液質(zhì)量70自動(dòng)化制片自動(dòng)化制片71小結(jié)血細(xì)胞染色常用瑞特染色法，它是利用各種細(xì)胞成分的化學(xué)性質(zhì)不同，對(duì)酸性