3.高效液相色譜儀流程及主要部件

儀器分析課程講義第三章高效液相色譜分析2004-11-25目錄§3-6高效液相色譜流程§3-7高效液相色譜儀主要部件§3-8高效液相色譜儀的應(yīng)用實例§3-6高效液相色譜流程§3-6高效液相色譜流程一、高壓輸液泵用于輸送流動相，由于色譜柱很細、為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm）、流動液的擴散系數(shù)遠小于氣體，故液體的流動相高速通過時，液體流動時阻力很大，必須要有很高的柱前壓力。壓力：150～350×105

Pa，高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。流量穩(wěn)定（影響重現(xiàn)性及分析精度）、流速可調(diào)應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、耐腐蝕等特性§3-7高效液相色譜儀主要部件高壓泵按其性質(zhì)可分為恒壓泵、恒流泵兩類1）往復(fù)式柱塞泵：廣泛使用的一種恒流泵，柱塞反復(fù)進出缸體，100次/min?？赏ㄟ^改變沖程（柱塞進入缸體中距離的大?。┗蛲鶑?fù)的頻率來調(diào)節(jié)流量；易于更換溶劑，適用于梯度洗脫但有脈沖波動2）氣動放大泵：據(jù)液體的壓力傳導(dǎo)原理而設(shè)計，是一種恒壓泵液缸體積大，更換流動相不方便，不適于頻繁更換流動相以選擇合適溶劑的實驗，也不便于梯度洗脫，但能供給無脈沖、穩(wěn)定流量的輸出§3-7高效液相色譜儀主要部件

(2)梯度淋洗裝置又稱梯度洗提、梯度洗脫，與氣相色譜中的程序升溫一樣，可極大地改善分離效果載液中含有兩種及以上的不同極性（或不同性質(zhì)）的溶劑，在分離過程中按照一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，通過載液中極性的變化來改變被分離組分的分離因素。通過梯度洗脫，可縮短分離時間、提高分辨能力、改善峰形，還可提高分析精度。(2)梯度淋洗裝置外梯度:

利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進入色譜柱。內(nèi)梯度:

一臺高壓泵,通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。

§3-7高效液相色譜儀主要部件§3-7高效液相色譜儀主要部件高壓定量進樣閥：流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進樣裝置，其結(jié)構(gòu)如圖所示：優(yōu)點：進樣準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適于定量分析(3)進樣裝置注射器進樣裝置：微量進樣器刺過裝有彈性隔膜的進樣器，針尖直達固定相上端。缺點：不能承受高壓，須停流進樣；無法取得精確的保留時間§3-7高效液相色譜儀主要部件(4)高效分離柱

柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長5～40cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。裝柱方法：有干法和濕法兩種，按粒度20μm劃分，濕法裝柱又稱勻漿法。(5)液相色譜檢測器紫外檢測器:應(yīng)用最廣，對大部分有機化合物有響應(yīng)。作用原理：被分析試樣組分對特定波長紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關(guān)系遵守比爾定律

特點：

靈敏度高；線形范圍高；波長可選，易于操作；對流動相的流速和溫度變化不敏感；應(yīng)用可變波長檢測器（流通池裝有紫外或紫外可見分光光度計），以選擇最佳檢測波長?！?-7高效液相色譜儀主要部件

§3-7高效液相色譜儀主要部件(5)液相色譜檢測器b.光電二極管陣列檢測器紫外可見光度檢測器的重要進展；1021個二極管陣列，各檢測某一特定波長，無需停流掃描而觀察色譜柱流出物的各個瞬間的動態(tài)光譜吸收圖§3-7高效液相色譜儀主要部件(5)液相色譜檢測器b.光電二極管陣列檢測器

§3-7高效液相色譜儀主要部件

(5)液相色譜檢測器c.差示折光檢測器（differentialrefractiveindexdetector）除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器；可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；通用型檢測器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）；靈敏度低（10-7g/ml）

、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫；偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種受紫外光激發(fā)后能夠輻射出比紫外光波長較長的光高靈敏度(比紫外檢測器高兩個數(shù)量級，達10-11g/ml)、高選擇性；對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)；§3-7高效液相色譜儀主要部件

(5)液相色譜檢測器d.熒光檢測器（fluorescencedetector）§3-7高效液相色譜儀主要部件

(5)液相色譜檢測器

e.電導(dǎo)檢測器（electricalconductivitydetector）屬電化學(xué)檢測器，是離子色譜法中應(yīng)用最為廣泛的檢測器作用原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來測定電離物質(zhì)的含量。受溫度影響較大，須嚴格控制溫度（池體內(nèi)放熱敏電阻器）化學(xué)抑制型離子色譜體系中可直接檢測單柱離子色譜體系中，背景電導(dǎo)高，極化效應(yīng)嚴重，應(yīng)采用五電極式電導(dǎo)檢測器或經(jīng)改良的兩電極式電導(dǎo)檢測器。§3-8高效液相色譜的應(yīng)用

applicationofHPLC

1.環(huán)境中有機氯農(nóng)藥殘留量分析固定相：薄殼型硅膠(37～50m)

流動相：正己烷流速：1.5mL/min

色譜柱：50cm2.5mm(內(nèi)徑)檢測器：差示折光檢測器可對水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進行分析?！?-8高效液相色譜的應(yīng)用

applicationofHPLC

2.稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴多為致癌物質(zhì)反相液-液色譜法固定相：十八烷基硅烷化鍵合相流動相：20%甲醇-水～100%甲醇線性梯度淋洗，2%/min

流速：1mL/min

柱溫：50oC

柱壓：70104Pa

檢測器：紫外檢測器§3-8高效液相色譜的應(yīng)用

applicationofHPLC

3.陰離子的分析離子色譜法（雙柱法）分析分離柱：薄殼型陰離子交換樹脂抑制柱：強酸型樹脂（H+型）

流動相：0.003MNaHCO3/0.024MNa2CO3

流速：2.3mL/min

進樣體積：100L

檢測器：電導(dǎo)檢測器思考題1．現(xiàn)需分離分析一氨基酸試樣，擬采用哪種色譜？2.在液相色譜法中，梯度淋洗適用于分離何種試樣？3.在液相色譜中，范氏方程中的哪一項對柱效能的影響可以忽略4.

對下列試樣，用液相色譜分析，應(yīng)采用何種檢測器：（l