感染病學基礎(chǔ)-病原學診斷 2016-8-30

病原學診斷

Diagnosticmicrobiology內(nèi)容Contents

1.早期發(fā)展簡史2.顯微鏡術(shù)(Microscopy)3.體外培養(yǎng)(Invitroculture)4.分子診斷(moleculardiagnosis)5.血清學診斷(serologicdiagnosis)6.動物實驗(animalexperiment)1674，AntonyVanLeeuwenhoek借助自制透鏡發(fā)現(xiàn)微小生物體1859,LouisPasteur制備液體培養(yǎng)基1881,Koch和Hesse制備固體培養(yǎng)基1949,JohnFranklinEnders建立動物細胞培養(yǎng)技術(shù)……1.早期發(fā)展簡史（1）目的：直接檢測微生物（細菌、真菌、寄生蟲蟲卵幼蟲和成蟲、感染的細胞中的病毒包涵體）;初步或明確鑒定微生物2.顯微鏡術(shù)(Microscopy)初步鑒定：多數(shù)細菌明確鑒定：真菌和寄生蟲；促進明確鑒定：熒光抗體或其它標記物染色后，顯微鏡觀察（2）技術(shù)：普通光學顯微鏡術(shù)(Brightfieldorlightmicroscopy)暗視野顯微鏡術(shù)(Darkfieldmicroscopy)熒光顯微鏡術(shù)(Fluorescentmicroscopy)相差顯微鏡術(shù)(Phase-contrastmicroscopy)電子顯微鏡術(shù)（Electronmicroscopy)普通光學顯微鏡術(shù)(Brightfieldorlightmicroscopy)：細菌染色標本活菌運動大的微生物如寄生蟲和真菌病毒感染的病變細胞和包涵體組織病理暗視野顯微鏡術(shù)(Darkfieldmicroscopy)：不染色活菌螺旋體及其動力熒光顯微鏡術(shù)(Fluorescentmicroscopy)：各種微生物用熒光素標記后發(fā)出熒光相差顯微鏡術(shù)(Phase-contrastmicroscopy)：可觀察到微生物的內(nèi)部結(jié)構(gòu)電子顯微鏡術(shù)（Electronmicroscopy)：常用做研究工具直接觀察到高濃度液體中的病毒顆粒的形態(tài)和大小、低濃度液體可離心后收集沉淀觀察或免疫電鏡觀察微生物的超微結(jié)構(gòu)（3）檢查方法：直接檢查（directexamination)鑒別染色（differentialstains，eg.Gramstain)抗酸染色（acid-faststains)熒光染色（fluorescentstains)（1）成功取決于：微生物的生物學特性感染的部位患者對感染的免疫反應(yīng)適宜培養(yǎng)基（三種類型）和條件3.體外培養(yǎng)(Invitroculture)培養(yǎng)基類型（細菌和真菌）培養(yǎng)基類型（衣原體、立克次體和全部病毒）：細胞培養(yǎng)（1）

分子種類：DNARNA蛋白質(zhì)（2）

優(yōu)勢：適宜于不能分離或免疫學檢查的微生物檢查；檢測基因型或突變（eg.耐藥）敏感、特異和安全；4.分子診斷(moleculardiagnosis)Restrictionfragmentlengthpolymorphism（RFLP，限制性片段長度多態(tài)性）distinctionofDNAfrombacterialstrainsseparatedbypulsed-fieldgelelectrophoresis.Lanes1to3showSma1restrictionendonuclease-digestedDNAfrombacteriafromtwofamilymemberswithnecrotizingfasciitisandfromtheirphysician(pharyngitis).Lanes4to6arefromunrelatedStreptococcuspyogenesstrainsDNAprobe（DNA探針）analysisofvirus-infectedcells.SuchcellscanbelocalizedinhistologicallypreparedtissuesectionsusingDNAprobesconsistingofasfewasninenucleotidesorbacterialplasmidscontainingtheviralgenome.AtaggedDNAprobeisaddedtothesample.Theappropriatesubstrateisaddedtocolorthenucleiofvirallyinfectedcells.Insitulocalization（原位雜交）ofcytomegalovirus(CMV)infectionusingageneticprobe.CMVinfectionoftherenaltubulesofakidneyislocalizedwithabiotin-labeled,CMV-specificDNAprobeandisvisualizedbymeansofthehorseradishperoxidase-conjugatedavidinconversionofsubstrate,in