《醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)》細(xì)胞融合 設(shè)計型實驗設(shè)計報告

醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)設(shè)計性實驗設(shè)計報告姓名余囯清班級2011級k―3學(xué)號1120150305評分實驗項目：動物細(xì)胞融合、細(xì)胞核的分離與鑒定實驗原理：細(xì)胞融合又稱細(xì)胞雜交，他是指細(xì)胞彼此接觸時，兩個或兩個以上的細(xì)胞合并形成一個細(xì)胞的現(xiàn)象。在自然情況下，體內(nèi)或體外培養(yǎng)細(xì)胞間所發(fā)生的融合，稱為自然融合。而在體外用人工方法（使用融合誘導(dǎo)因子）促使相同或不同細(xì)胞間發(fā)生融合，稱為人工誘導(dǎo)融合。人工誘導(dǎo)融合中常用的誘導(dǎo)因子有：生物的（如滅活的仙臺病毒）﹑化學(xué)的（如聚乙二醇）和物理的（如電融合）因子。聚乙二醇是一種去垢劑，易得，用法簡單﹑融合效果穩(wěn)定，是目前運用的比較多的一種誘導(dǎo)劑。細(xì)胞融合的范圍佷廣，從種內(nèi)、種間、屬間、科間一直到動植物兩界之間都獲得了成功。目前，這一技術(shù)已成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種的重要手段。實驗步驟：（一）50%PEG液的制備稱取一定量的PEG（MV=4000）放入試管內(nèi)在酒精燈火焰上加熱，使其熔化，待冷至50℃時，加入等體積并預(yù)熱的無血清1640液混勻。置之37℃水浴箱種保溫待用。（二）融合方法：1.一瓶已長成HeLa細(xì)胞或CHO細(xì)胞，按常規(guī)方法消化制成細(xì)胞懸液。如果用雞血細(xì)胞，可取肝素抗凝的棄血清雞血0.1ml。2.將懸液移入離心管中，以800r/min離心7~8min，傾去上清液，加入8mlHanks，再次懸浮細(xì)胞，離心洗滌一次，傾去上清液后將離心管倒置于濾紙上，盡量流盡剩余液體（這一步很重要，因為殘留液體會改變PEG的濃度）。3.用手指輕彈離心管底部，使沉淀物松散。然后吸取制備好的50%PEG0.4ml，在37℃水浴中，于90s內(nèi)逐滴加入離心管中，邊加邊振搖離心管，使之與細(xì)胞混勻，然后加入8~10mlHanks液輕輕吸打混勻，在37℃水浴中靜置5min以稀釋PEG。離心棄去上清液后，加入2~3ml含小牛血清的1640培養(yǎng)液，在37℃水浴中孵育30min。4.離心棄上清液后，取一滴融合后的細(xì)胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。注意事項：（1）制備的50%PEG一定要保溫在于37℃水浴中，不然冷卻后結(jié)晶析出。（2）在離心管中加PEG之前，一定要將離心管倒置在濾紙上，流盡剩余液體，否則殘留液會改變PEG的濃度。預(yù)期結(jié)果：在顯微鏡下可以觀察到有細(xì)胞或兩個以上的細(xì)胞膜融合在一起一個異核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞。教師：日期：

實驗儀器、設(shè)備、器具表姓名余囯清班級2011級k-3班學(xué)號1120150305實驗項目：細(xì)胞融合名稱規(guī)格、型號數(shù)量說明顯微鏡1水浴箱1普通離心機1離心管1載玻片蓋玻片酒精燈1試管實驗試劑表姓名余囯清班級2011級k-3班學(xué)號1120150305實驗項目：細(xì)胞融合名稱規(guī)格用量說明聚乙二醇Hanks液0.25%胰蛋白酶RPNI1640培養(yǎng)液PBS0.2%次甲基藍(lán)染液設(shè)計性實驗要求：*4～6人一組，每組完成一份設(shè)計報告并制作一個幻