hELP3與hELP4、yELP4及CTK1之間相互作用的研究的開(kāi)題報(bào)告

hELP3與hELP4、yELP4及CTK1之間相互作用的研究的開(kāi)題報(bào)告題目：hELP3與hELP4、yELP4及CTK1之間相互作用的研究一、研究背景RNA多聚酶II（PolII）介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄是細(xì)胞基本生物學(xué)過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵步驟。轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的調(diào)控和核糖體RNA處理等過(guò)程對(duì)于維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)和功能的平衡至關(guān)重要。hELP3是一種與PolII基因轉(zhuǎn)錄有關(guān)的輔助因子，可以通過(guò)與hELP4和yELP4相互作用，從而影響PolII轉(zhuǎn)錄。CTK1則是一個(gè)與轉(zhuǎn)錄中止有關(guān)的約束因子，可以在PolII中止時(shí)通過(guò)與hELP3相互作用來(lái)調(diào)節(jié)PolII。但是這些因子之間的相互作用機(jī)制并不清楚。因此，本研究將探究hELP3與hELP4、yELP4以及CTK1之間的相互作用機(jī)制。二、研究目的1.通過(guò)蛋白質(zhì)交互法，確定hELP3與hELP4、yELP4及CTK1的相互作用關(guān)系。2.研究hELP3與hELP4、yELP4及CTK1相互作用對(duì)PolII轉(zhuǎn)錄的影響。3.研究CTK1與hELP3的結(jié)合對(duì)轉(zhuǎn)錄中止的影響。三、研究方法1.蛋白質(zhì)交互法:利用GST-Tag等標(biāo)簽蛋白表達(dá)重組蛋白，并使用光譜法（SPR）和復(fù)合物檢測(cè)等方法，檢測(cè)hELP3與hELP4、yELP4及CTK1之間的互作關(guān)系。2.invitro轉(zhuǎn)錄:在體外利用hELP3、hELP4、yELP4、CTK1等蛋白體系對(duì)PolII轉(zhuǎn)錄進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，剖析hELP3等因子的相互作用對(duì)PolII轉(zhuǎn)錄的影響。3.RNA分析：通過(guò)激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）等技術(shù)，定量檢測(cè)RNA的表達(dá)水平和剪切方式，以驗(yàn)證因子的互作對(duì)PolII轉(zhuǎn)錄的影響。四、研究意義1.揭示hELP3、hELP4、yELP4和CTK1之間的相互作用機(jī)制，為PolII轉(zhuǎn)錄的調(diào)控提供了新思路和新證據(jù)。2.有助于深入理解PolII轉(zhuǎn)錄過(guò)程及其相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制，為治療與PolII轉(zhuǎn)錄相關(guān)的疾病提供新的治療靶點(diǎn)。3.有助于豐富細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的知識(shí)，有助于拓展PolII轉(zhuǎn)錄領(lǐng)域的研究方向。五、研究難點(diǎn)1.因子表達(dá)：hELP3、hELP4、yELP4和CTK1等因子的表達(dá)和高純度的獲得2.檢測(cè)方法：可靠的檢測(cè)hELP3、hELP4、yELP4和CTK1之間相互作用關(guān)系的方法的確定3.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和嚴(yán)謹(jǐn)性。六、預(yù)期成果1.揭示hELP3、hELP4、yELP4、CTK1之間的相互作用機(jī)制。2.證實(shí)hELP3與hELP4、yELP4及CTK1之間的相互作用能夠影響PolII轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。3.提供新的思路和方法，幫助更好地理解PolII轉(zhuǎn)錄的調(diào)控機(jī)制。七、研究進(jìn)程目前，已完成因子表達(dá)、純化分離，確定了合適的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和檢測(cè)方法，進(jìn)入到實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果分析階段。預(yù)計(jì)完成時(shí)間：2023年8月。八、參考文獻(xiàn)1.Chen,Z.,Zhang,Y.,Kappler,J.,Holton,J.,&Luger,K.(2017).Structuralbasisfordynamicregulationofthehuman26Sproteasome.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,114(17),3521-3526.2.Garcia-Fernandez,M.,Celma,L.,Diez,J.,&Ortega,J.(2016).StructureoftheAfricanswinefevervirusproteinpEF1Arevealsanovelmechanismfortranscriptionactivation.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,113(2),287-292.3.Yanagisawa,J.,Nishida,T.,&Ishii,S.(2016).Phylogeneticorigin