流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第1頁(yè)流式細(xì)胞儀概述一、概述

流式細(xì)胞儀（Flow

Cytometer

簡(jiǎn)稱FCM）是一項(xiàng)集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)以及細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體新型高科技儀器。概括來(lái)說(shuō)，流式細(xì)胞術(shù)就是對(duì)于處于快速直線流動(dòng)狀態(tài)中細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速定量分析和分選技術(shù)。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第2頁(yè)流式細(xì)胞儀機(jī)型1.臺(tái)式機(jī)檢測(cè)和分析

B.D.:FACSCalibur;LSRII;LSRI2.大型機(jī)分選細(xì)胞

B.D.:FACSVantage；FACSAriaBeckmanCoulter:MoFlo（DAKO）

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第3頁(yè)流式細(xì)胞儀主要技術(shù)指標(biāo)1．流式細(xì)胞儀分析速度：

普通檢測(cè)1000～

5000個(gè)細(xì)胞/秒,大型機(jī)可達(dá)每秒上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。2．熒光檢測(cè)靈敏度：普通能測(cè)出單個(gè)細(xì)胞上<600個(gè)熒光分子,兩個(gè)細(xì)胞間熒光差＞5%即可區(qū)分。3．前向角散射（FSC）光檢測(cè)靈敏度：前向角散射（FSC）反應(yīng)被測(cè)細(xì)胞大小,普通流式細(xì)胞儀能夠測(cè)量到0.2μm～０.5μm。4．分辨率：通常見(jiàn)變異系數(shù)CV值來(lái)表示，,普通流式細(xì)胞儀能夠到達(dá)<2.0%,這也是測(cè)量標(biāo)本前用熒光微球調(diào)整儀器時(shí)要求必須到達(dá)。

5．流式細(xì)胞儀分選速度：普通流式細(xì)胞儀分選速度＞1000個(gè)/秒，分選細(xì)胞純度可達(dá)99%以上。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第4頁(yè)流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)可分為五個(gè)別：(1)流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng);

(2)激光光源及光束成形系統(tǒng);(3)光學(xué)系統(tǒng);

(4)信號(hào)檢測(cè)與存貯、顯示、分析系統(tǒng)，(5)細(xì)胞分選系統(tǒng)。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第5頁(yè)流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)流動(dòng)室(Flow

Chamber或

Flow

Cell)儀器關(guān)鍵部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。充滿了鞘液,將樣品流環(huán)包，使樣品流不會(huì)脫離液流軸線方向，確保每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)激光照射區(qū)時(shí)間相等。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第6頁(yè)改變樣本進(jìn)樣速率開關(guān),可提升采樣分析速度,不過(guò),并不提升樣本流速度,而是改變了細(xì)胞間距離,樣本流變寬,細(xì)胞間距離縮短,這么單位時(shí)間內(nèi)流經(jīng)激光照射區(qū)細(xì)胞數(shù)就增加。激光焦點(diǎn)處能量分布為正態(tài)分布,中心處能量最高,所以當(dāng)樣本速率選擇高速(Hi)時(shí),處于樣本流不一樣位置細(xì)胞或顆粒,受激光光照射能量不一樣,從而被激發(fā)出熒光強(qiáng)度也不相同，這就會(huì)造成測(cè)量誤差,當(dāng)在檢測(cè)分辨率要求高試驗(yàn)時(shí)如，

DNA

analysis應(yīng)選取低速(Low)

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第7頁(yè)每個(gè)細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出熒光信號(hào)強(qiáng)弱，與被照射時(shí)間和激發(fā)光強(qiáng)度相關(guān)，所以細(xì)胞必須到達(dá)足夠光照強(qiáng)度。為確保樣品中細(xì)胞是一個(gè)一個(gè)分別受到光照而且受照強(qiáng)度十分一致,須將樣本流與激光束正交且相交于激光能量分布峰值處

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第8頁(yè)激光光源和光學(xué)系統(tǒng)氬離子氣體激光管：Ex488nm;氦氖離子氣體激光管:Ex633nM;紫外激光管：Ex355nMViolet:Ex405nM單波長(zhǎng)、高強(qiáng)度、高穩(wěn)定性

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第9頁(yè)光學(xué)系統(tǒng)由若干組透鏡、小孔、濾光片組成，大致可分為流動(dòng)室前和流動(dòng)室后兩組。流動(dòng)室前光學(xué)系統(tǒng)由透鏡和小孔組成，透鏡和小孔（普通為2片透鏡、1個(gè)小孔）主要作用是將激光光源發(fā)出橫截面為圓形激光光束聚焦成橫截面較小橢圓形激光光束，使激光能量成正態(tài)分布，使經(jīng)過(guò)激光檢測(cè)區(qū)細(xì)胞受照強(qiáng)度一致，最大程度降低雜散光干擾

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第10頁(yè)流動(dòng)室后光學(xué)系統(tǒng)(1)長(zhǎng)通濾片(LP)：使特定波長(zhǎng)以上光經(jīng)過(guò)，特定波長(zhǎng)以下不經(jīng)過(guò)。如,LP500允許500

nm以上光經(jīng)過(guò)，而500

nm以下光吸收或返回。(2)短通濾片(SP)：使特定波長(zhǎng)以下光經(jīng)過(guò)，特定波長(zhǎng)以上光吸收或返回。(3)帶通濾片(BP)：允許相當(dāng)窄一波長(zhǎng)范圍內(nèi)光經(jīng)過(guò)，普通濾片上有兩個(gè)數(shù)，一個(gè)為允許經(jīng)過(guò)波長(zhǎng)中心值，另一為允許經(jīng)過(guò)光波段范圍。如BP

500

/

50表示其允許經(jīng)過(guò)波長(zhǎng)范圍為475nm-525nm。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第11頁(yè)綠色熒光(FITC)：LP550和BP525

橙紅色熒光(PE)：LP600和BP575

紅色熒光(CY5)：LP650和BP675流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第12頁(yè)流式細(xì)胞儀使用調(diào)試和校準(zhǔn)：流式細(xì)胞計(jì)在使用前，甚至在使用過(guò)程中都要精心進(jìn)行調(diào)試，以確保工作可靠性和最正確性能。1.激光強(qiáng)度2.液流速度3.測(cè)量區(qū)光路調(diào)整流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第13頁(yè)開機(jī)、聯(lián)機(jī)cytometer-computer；檢驗(yàn)鞘液箱是否有足夠鞘液（3L）。蓋子關(guān)緊。鞘液箱處于壓力下。（黑色金屬板）管道沒(méi)有滲漏。檢驗(yàn)廢液箱預(yù)裝400ml含氯消毒液沒(méi)有滲漏流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第14頁(yè)在cellquest下：設(shè)置參數(shù)：PMT-voltage;compensation;shreshold;status(standby-3-4V;ready-14-15V)counter建立自己文件上機(jī)（管道密閉）：氣閥關(guān)閉；”run”流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第15頁(yè)P(yáng)MT-voltage未染色細(xì)胞（空白對(duì)照）或者同型對(duì)照

Dotplot:FSC-SSC

線性坐標(biāo)（細(xì)胞）；對(duì)數(shù)坐標(biāo)（bead-CBA)顯示不一樣細(xì)胞群體，關(guān)注群體-設(shè)門Dotplot:FL1/FL2;FL1/FL3;FL2/FL3對(duì)數(shù)坐標(biāo)閾值降低雜顆粒：細(xì)胞碎片；壞死細(xì)胞；紅細(xì)胞；血小板等流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第16頁(yè)關(guān)機(jī)上含有3ml含氯消毒液（10％），底下托架推至一邊連續(xù)1min?；貧w托架，在run狀態(tài)下，高速繼續(xù)上樣5min。改用蒸餾水，重復(fù)上述過(guò)程。探針繼續(xù)放在蒸餾水中。換至”standby“.脫機(jī)關(guān)電源

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第17頁(yè)常見(jiàn)問(wèn)題1.沒(méi)有信號(hào)出現(xiàn)

“ready”：域值參數(shù)設(shè)置過(guò)高或過(guò)低；域值沒(méi)有選擇正確參數(shù)（通常為FSC）；進(jìn)樣器堵塞；密封圈破損；聯(lián)機(jī)失?。?/p>

“standby“：run按鈕；液流系統(tǒng)漏氣（鞘液箱未密封；樣品管破損；密封圈破損；）2.上樣速度過(guò)高：

樣品流中有氣泡；域值過(guò)低；樣品濃度過(guò)高；鞘液系統(tǒng)中有空氣3.上樣速度過(guò)低：域值設(shè)定過(guò)高；樣品未充分混勻；樣品稀釋過(guò)大；進(jìn)樣針堵塞

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第18頁(yè)Fluorescencecompensation:單標(biāo)識(shí)熒光調(diào)整賠償FL2-%FL1流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第19頁(yè)需要調(diào)整賠償參數(shù)對(duì)FL1/FL2；FL2/FL3；FL3/FL4對(duì)照設(shè)置-以檢測(cè)帶有FITC/PE/APC樣品為例1.空白、陰性對(duì)照2.單標(biāo)識(shí)對(duì)照：FL1(FITC);FL2(PE);FL4(APC)3.混合對(duì)照：以上對(duì)照兩兩組合；3個(gè)混合流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第20頁(yè)FL1FL2賠償與熒光強(qiáng)度成正比未賠償個(gè)別賠償充分賠償流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第21頁(yè)UncompensatedvsCompensatedFL1FL2FL1-%FL2FL2-%FL1FL1-%FL2流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第22頁(yè)1.流式細(xì)胞儀參數(shù)物理參數(shù)前向角參數(shù)(FSC)反應(yīng)細(xì)胞相對(duì)大小,與細(xì)胞直徑平方親密相關(guān)。普通選取FSC作閾值，來(lái)排除樣品中各種碎片及鞘液中小顆粒，以防止對(duì)被測(cè)細(xì)胞干擾。側(cè)向角參數(shù)(SSC)反應(yīng)細(xì)胞相對(duì)粒度或內(nèi)部復(fù)雜度，對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜折射率更為敏感，可提供相關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)信息。

流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第23頁(yè)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第24頁(yè)ForwardAngleLightScatter(FSC)FALSSensorLaserFSC

與入射光在同一方向散射光，與細(xì)胞表面積相關(guān)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第25頁(yè)FALSSensor90LSSensorLaser90DegreeLightScatterSSC與入射光成90°光，與細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜度相關(guān)，顆粒密度流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第26頁(yè)依據(jù)FSC/SSC能夠?qū)⑷辛馨图?xì)胞，單核細(xì)胞和粒細(xì)胞分開流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第27頁(yè)熒光參數(shù)自發(fā)熒光：未經(jīng)熒光染色，細(xì)胞內(nèi)部熒光分子經(jīng)激光照射后發(fā)出熒光信號(hào)。自發(fā)熒光細(xì)胞成份：核黃素，細(xì)胞色素等。

死亡細(xì)胞自發(fā)熒光較高

需要設(shè)置陰性對(duì)照。

特征熒光：經(jīng)標(biāo)有特異熒光素單克隆抗體染色后經(jīng)激光激發(fā)發(fā)出熒光。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第28頁(yè)FITC,Alexa488,GFP,CFSE,Fluo-3,R123PE,PIAPC,alexa647,APC-cy7PerCP,PE-cy5,PE-cy5.5,7-AAD,PIPE-cy7流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第29頁(yè)LaserFluorescenceDetectorsFALSSensorFluorescence

detector(PMT3,PMT4etc.)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第30頁(yè)激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)發(fā)射光波長(zhǎng)(Em)488488488488488488488488488633633633FITCAlexa488PEPI7-AADPE-Cy5PerCPPE-Cy5.5PE-Cy7APCAPC-Cy7Alexa647519519578630670668667695785660785668FL1FL2FL3FL4流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第31頁(yè)Fluorescein(FITC)400nm500nm600nm700nmWavelengthProteinExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nm流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第32頁(yè)ExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nmPhycoerytherin(PE)Protein流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第33頁(yè)P(yáng)ropidiumIodide400nm500nm600nm700nmPIDNAExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nm流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第34頁(yè)Allophycocyanin(APC)Protein632.5nm(HeNe)ExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nm流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第35頁(yè)怎樣選擇熒光偶聯(lián)抗體熒光偶聯(lián)抗體亮度S/N(Positive/negative):4-6fold

PE,PE-cy7,PE-cy5,APC>APC-cy7,alexa647>FITC,alexa488F/PFITC,PerCP:2-9;APC,PE:1;PE-Cy7,APC-Cy7:1,N;抗原密度

高豐度抗原：任何熒光素；低豐度抗原：PE，APC染色指數(shù)自發(fā)熒光

高：APC；低：FITC非特異形結(jié)合

FcR;熒光本身流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第36頁(yè)直接標(biāo)識(shí)特異性信號(hào):弱非特異性結(jié)合:低對(duì)照：相同熒光素標(biāo)識(shí)同型對(duì)照；或者預(yù)先用抗體起源動(dòng)物血清封閉流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第37頁(yè)間接標(biāo)識(shí)特異性信號(hào):強(qiáng),5-62ndAb/1stAb;非特異性結(jié)合:高對(duì)照：一抗起源同型對(duì)照或血清＋二抗流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第38頁(yè)Avidin-BiotinmethodbiotinylatedprimaryAbbiotinavidinbiotinylateddye流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第39頁(yè)熒光抗體搭配理論上，不一樣通道檢測(cè)參數(shù)能夠同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。不過(guò)假如進(jìn)行3個(gè)熒光參數(shù)檢測(cè)，盡可能選擇只需要調(diào)整一對(duì)參數(shù)之間賠償熒光。如，F(xiàn)L1+FL2+FL4;FL1+FL3+FL4;注意：PE-Cy5和APC不能同時(shí)檢測(cè)。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第40頁(yè)流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)顯示和分析一維直方圖、二維點(diǎn)陣圖、等高線圖和密度圖。1．單參數(shù)數(shù)據(jù)顯示和分析—

一維直方圖橫坐標(biāo)：散射光(FSCorSSC-線性)或熒光信號(hào)(FL1,2,3,4-對(duì)數(shù))相對(duì)強(qiáng)度值；縱坐標(biāo)：表示細(xì)胞數(shù)。依據(jù)陰性對(duì)照設(shè)定適當(dāng)“門”（直線門），儀器計(jì)算機(jī)就會(huì)給出測(cè)定值（包含陽(yáng)性細(xì)胞%和平均熒光強(qiáng)度）。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第41頁(yè)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第42頁(yè)2.雙參數(shù)數(shù)據(jù)顯示和分析

表示：一維直方圖、二維點(diǎn)陣圖、等高線圖和密度圖顯示和分析。二維圖：橫坐標(biāo)-FSC/SSC/FL1/2/3/4；縱坐標(biāo)-FSC/SSC/FL1/2/3/4

依據(jù)陰性對(duì)照設(shè)置“四方格”標(biāo)尺,分為四個(gè)區(qū)：LL-雙陰性；LR和UL-單陽(yáng)性；UR-雙陽(yáng)性；每個(gè)區(qū)都能夠用%和平均熒光強(qiáng)度表示。也能夠設(shè)置“門”。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第43頁(yè)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第44頁(yè)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第45頁(yè)3．三參數(shù)數(shù)據(jù)顯示和分析

用每?jī)蓚€(gè)數(shù)據(jù)組成一對(duì)（可組成6對(duì)數(shù)據(jù)）表示：一維直方圖、二維點(diǎn)陣圖、等高線圖和密度圖顯示和分析。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第46頁(yè)數(shù)據(jù)分析率(%gate)平均熒光強(qiáng)度

算數(shù)平均熒光強(qiáng)度(meanfluoresenceintensity,MFI)MFI=(x1+x2+x3...+xn)/n

正態(tài)分布數(shù)據(jù)使用

幾何平均熒光強(qiáng)度(geomeanfluoresenceintensity,GMFI)GMFI=(x1*x2*x3...*xn)nthroot.

經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后呈正態(tài)分布舉例：有五個(gè)細(xì)胞，其熒光強(qiáng)度分別為1,100,100,100,10000MFI=1+100*3+10000/5=2060GMFI=(1*100^3*10000)1/5=100

中位數(shù)(median)=100

變異系數(shù)（CV）=100流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第47頁(yè)率和平均熒光強(qiáng)度應(yīng)用普通說(shuō)來(lái)，%和MFI/GMFI都能夠用來(lái)表示所關(guān)注細(xì)胞群體某個(gè)參數(shù)度量。有時(shí)候%沒(méi)有改變，不過(guò)MFI/GMFI有改變。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第48頁(yè)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第49頁(yè)流式細(xì)胞儀應(yīng)用細(xì)胞周期檢測(cè)細(xì)胞周期：G1期、S期、G2期和M期。各期細(xì)胞DNA含量以下：G1(M1)=2C；G2和M(M2)=4C；S(M3)=2C-4C。正常細(xì)胞：各周期時(shí)相細(xì)胞數(shù)百分比是恒定；惡性病變：各周期時(shí)相細(xì)胞數(shù)百分比是非均一?？們A向是：異倍體百分比升高；異倍體腫瘤惡性程度高、復(fù)發(fā)率高、轉(zhuǎn)移率高及死亡率高；二倍體及近二倍體腫瘤預(yù)后很好。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第50頁(yè)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第51頁(yè)DNA指數(shù)：表示DNA含量異常程度。標(biāo)準(zhǔn)二倍體細(xì)胞：普通樣品應(yīng)采取同種或同個(gè)體正常細(xì)胞。血液學(xué)研究中通常以正常人外周血淋巴細(xì)胞作為標(biāo)準(zhǔn)二倍體細(xì)胞。需要指出是，在匯報(bào)DNA測(cè)定結(jié)果時(shí)必需包含G0/G1峰變異系數(shù)，即C.V值，若有多個(gè)DNA干系則要給出各個(gè)G0/G1峰C.V值。用于腫瘤臨床診療總體依據(jù)是：a.正常二倍體DI=1.0，判斷為陰性；b.出現(xiàn)二個(gè)或多個(gè)能夠分辨G0/G1峰則可判斷為陽(yáng)性；c.雖無(wú)顯著G0/G1峰分化現(xiàn)象，但峰C.V值較大，則可依據(jù)DI數(shù)個(gè)及其它有判別意義征狀給出參考性診療。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第52頁(yè)應(yīng)用范圍：1.臨床腫瘤：測(cè)試腫瘤細(xì)胞對(duì)藥品敏感性；2.臨床微生物：對(duì)細(xì)菌DNA和RNA含量進(jìn)行測(cè)量，進(jìn)行微生物判定、醫(yī)學(xué)常規(guī)中細(xì)菌抗生素敏感試驗(yàn)和傳染活性測(cè)定。

凋亡檢測(cè)：出現(xiàn)亞凋亡峰。流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第53頁(yè)免疫表型分析對(duì)外周血或免疫器官中白細(xì)胞免疫熒光分析依據(jù)細(xì)胞表面分化抗原能夠進(jìn)行：

亞群判定：CD3+CD4+/CD3+CD8+T;CD19+B;CD56+CD16+NK;CD14+Mo;CD34+HSC,CD11c+HLA-DR+DC;CD123+BDCA2+pDC;etc.

特定亞群絕對(duì)數(shù)和百分比檢測(cè)：AIDs：CD4+T/CD8+T降低：CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)降低

SLE：粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)降低；

特定亞群一些分子表示改變：CD3+CD4+T細(xì)胞表示CD25水平；表示CCR7水平

尋找新亞群：FoxP3+Treg;CD11b+Gr1+MSC;NK1.1+NK;

信號(hào)分子表示和活化：CpG刺激PBMCs后，CD123+BDCA2+pDC中p-P38表示；

細(xì)胞因子分泌：anti-CD3+anti-CD28刺激PBMCs后，CD3+CD4+T細(xì)胞分泌IFN-

水平流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第54頁(yè)信號(hào)分子表示和活化

WesternBlot:只能檢測(cè)整體細(xì)胞表示情況，不能夠區(qū)分是那個(gè)亞群表示情況；而且WB檢測(cè)需要一定數(shù)量細(xì)胞，少許細(xì)胞有可能檢測(cè)不出來(lái)。細(xì)胞因子表示：

ELISA只能檢測(cè)上清中分泌，一樣不能夠區(qū)分是那個(gè)亞群分泌；假如樣品量少只能檢測(cè)一個(gè)細(xì)胞因子。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第55頁(yè)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)信號(hào)分子活化流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第56頁(yè)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子分泌流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第57頁(yè)流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第58頁(yè)白血病/淋巴瘤免疫分型；

判斷起源：髓系/淋巴系;T系/B系判斷分期：

判斷預(yù)后：比如：CALLA僅存在于B細(xì)胞正常發(fā)育期前B細(xì)胞、早期B細(xì)胞以及80%～90%急性淋巴細(xì)胞性白血病。所以，檢測(cè)CALLA表示情況能夠區(qū)分淋巴細(xì)胞性和髓性白血病。用CALLA結(jié)合其它一些成熟B細(xì)胞表面標(biāo)志，如CD19，CD20，CD24（B4，B1，BA-1）將能證實(shí)大個(gè)別B細(xì)胞起源腫瘤。

流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第59頁(yè)HLA組織配型及HLA與一些疾病關(guān)系；

HLA-B27檢測(cè)：強(qiáng)制性脊柱炎移植：HLA配型干祖細(xì)胞定量及成份分析；流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第60頁(yè)定量分析免疫球蛋白類型和量：血清中IgM;IgG1,IgG2a,IgG2b;IgG3;IgE等。細(xì)胞因子分泌：血清或培養(yǎng)上清

CBAflexset(BD):能夠同時(shí)檢測(cè)少許上清中各種細(xì)胞因子/趨化因子/免疫球蛋白類型和亞類/信號(hào)分子表示和定量。細(xì)胞功效分析如：吞噬功效-采取熒光標(biāo)識(shí)大分子（糖類-dextran;蛋白-OVA）；細(xì)胞增殖水平-CFSE細(xì)胞凋亡研究

AnnexinV/PI

細(xì)胞周期流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第61頁(yè)FACSArrayFACSLSRIIFACSCaliburRed/NIRAPC/APC-Cy7FL4/FL3YellowPEFL2Parametersreporter流式細(xì)胞儀專題知識(shí)講座第62頁(yè)定量分析免疫球蛋白類型和量：血清中IgM;IgG1,IgG2