QBT 4483-2024《木聚糖酶制劑》

ICS67.180.20CCSX69QB代替QB/T4483-2013XylanasepreparatioIQB/T4483—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替QB/T4483-2013《木聚糖酶制劑》，與QB/T4483-2013相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：——更改了“木聚糖酶”的定義（見3.1，2013年版的3.1增加了“木聚糖酶制劑”定義（見3.2更改了“木聚糖酶活力”的定義（見3.3，2013年版3.2）；——?jiǎng)h除了“按產(chǎn)品等級(jí)分類”，增加了“按產(chǎn)品應(yīng)用領(lǐng)域分類”（見4.2）；——更改了液體劑型的感官要求（見5.1，2013年版5.1——更改了“木聚糖酶活力”和“干燥失重”指標(biāo)的要求；——更改了“感官要求”、“酶活力”、“干燥失重”、“細(xì)度”的試驗(yàn)方法（見6.1，6.2.，6.3和6.4，2013年版的.1，6.2，6.3和6.4）；——更改了“批次的確定”（7.1）；——更改了出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目（見7.3，2013年版的7.3）；——更改了標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存的（見第8章，2013年版的第8章）。本文件由中國(guó)輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出。本文件由全國(guó)食品工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)工業(yè)發(fā)酵分技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC64/SC5）歸口。本文件起草單位：武漢新華揚(yáng)生物股份有限公司、中國(guó)生物發(fā)酵產(chǎn)業(yè)協(xié)會(huì)、中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司、山東隆科特酶制劑有限公司、白銀賽諾生物科技有限公司、濰坊康地恩生物科技有限公司、廣東溢多利生物科技股份有限公司、溢多利湖南鴻鷹生物科技有限公司、安琪酶制劑（宜昌）有限公司、浙江華康藥業(yè)股份有限公司、北京擎科生物科技股份有限公司、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、福建師范大學(xué)、山東大學(xué)。本文件主要起草人：王晉、詹志春、徐麗、劉明、陳楠楠、王潔、錢娟娟、劉校函、李玉強(qiáng)、于洪蓮、黃石橋、杜支紅、徐艷艷、馬石金、江正強(qiáng)、楊欣偉、王祿山、張法玲、安娟、邵靜、馮國(guó)華、易鳴、喻晨、鄭曉陽(yáng)、杜軍、李延嘯、黃建忠。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2013年首次發(fā)布為QB/T4483—2013；——本次為第一次修訂。1QB/T4483—XXXX木聚糖酶制劑本文件規(guī)定了木聚糖酶制劑的感官、理化、安全的要求，描述了相應(yīng)的試驗(yàn)方法，規(guī)定了檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸和貯存的內(nèi)容，同時(shí)給出了便于技術(shù)規(guī)定的產(chǎn)品分類。本文件適用于經(jīng)微生物發(fā)酵制得的木聚糖酶制劑的生產(chǎn)、檢驗(yàn)和銷售。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB1886.174食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑食品工業(yè)用酶制劑GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法QB/T1803工業(yè)酶制劑通用試驗(yàn)方法QB/T1804工業(yè)酶制劑通用檢驗(yàn)規(guī)則和標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。木聚糖酶xylanase能將木聚糖水解成寡糖或單糖的一系列酶的總稱。木聚糖酶制劑xylanasepreparations以木聚糖酶（3.1）為主要催化活性組分，添加穩(wěn)定劑或載體制得的制劑化產(chǎn)品。3.3木聚糖酶活力單位xylanaseactivityunit在50℃,一定pH值條件下（酸性木聚糖酶制劑pH為4.8；中性木聚糖酶制劑pH為6.0；堿性木聚糖酶制劑pH為9.0），每分鐘從濃度為5mg/mL的木聚糖溶液中降解釋放1μmol還原糖的酶量。3.4木聚糖酶活力xylanaseactivity木聚糖酶制劑活力activityofxylanasepreparations為1g（或1mL）木聚糖酶制劑含有的酶活力單位。4產(chǎn)品分類4.1按產(chǎn)品形態(tài)固體劑型和液體劑型。2QB/T4483—XXXX4.2按產(chǎn)品應(yīng)用領(lǐng)域食品工業(yè)用、飼料工業(yè)用和其他工業(yè)用。4.3按產(chǎn)品最適作用pH酸性木聚糖酶制劑、中性木聚糖酶制劑和堿性木聚糖酶制劑。5要求5.1感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求色澤均一理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)木聚糖酶活力/[U/g(或U/mL)]≥—5.3安全要求食品工業(yè)用酶制劑應(yīng)符合GB1886.174規(guī)定，飼料工業(yè)及其他工業(yè)用應(yīng)符合相關(guān)要求的規(guī)定。6試驗(yàn)方法6.1感官要求取適量試樣置于潔凈的白色盤（瓷盤或同類容器）中，在自然光狀態(tài)下，觀察其色澤、狀態(tài)，聞其氣味。木聚糖酶活力按照附錄A規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定。干燥失重按照QB/T1803規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定。6.4細(xì)度按QB/T1803中細(xì)度的試驗(yàn)方法執(zhí)行，標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)篩選擇Φ200×50-0.40/0.25。安全要求食品工業(yè)用酶制劑應(yīng)按照GB1886.174規(guī)定的方法測(cè)定，飼料工業(yè)及其它工業(yè)用應(yīng)按照相關(guān)要求測(cè)3QB/T4483—XXXX7檢驗(yàn)規(guī)則批次的確定以相同原料、相同的生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批。7.2取樣規(guī)則和樣本量7.2.1取樣應(yīng)均勻分布在整個(gè)灌裝過程中，或均勻分布于灌裝后的成品中。7.2.2取樣時(shí)應(yīng)采用適宜的方法保證取樣具有代表性，保證取樣部位和取樣瓶的清潔。對(duì)用于微生物檢驗(yàn)的取樣，應(yīng)使用無(wú)菌操作。7.2.3成品抽樣的樣本量見表3。取樣的樣本量可以按照估計(jì)的批量按照表3執(zhí)行，或由生產(chǎn)企業(yè)和（或）相關(guān)方確定。批取樣量應(yīng)不小于300g（或300mL），不足按照比例適當(dāng)加取。表3成品抽樣的樣本量23>5004出廠檢驗(yàn)固體劑型檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官指標(biāo)、酶活力和干燥失重。液體劑型檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官指標(biāo)和酶活力。7.4型式檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為本文件第5章規(guī)定的所有項(xiàng)目，在正常生產(chǎn)情況下，每年至少進(jìn)行1次型式檢驗(yàn)。在有下列情況之一時(shí)，亦應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a）產(chǎn)品定型投產(chǎn)時(shí)；b）生產(chǎn)工藝、配方或主要原料來(lái)源有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)；c）停產(chǎn)3個(gè)月以上，重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d）出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)國(guó)家監(jiān)管機(jī)構(gòu)按有關(guān)規(guī)定需要抽檢時(shí)。判定規(guī)則7.5.1檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合本文件規(guī)定時(shí)，判定該批產(chǎn)品合格。7.5.2所有檢驗(yàn)項(xiàng)目有1~2項(xiàng)不合格，重新在該批產(chǎn)品中加倍取樣復(fù)驗(yàn)，以復(fù)驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。超過兩項(xiàng)指標(biāo)不符合本文件規(guī)定時(shí)，判為不合格，不應(yīng)復(fù)驗(yàn)。7.5.3微生物指標(biāo)有1項(xiàng)不合格時(shí)，該批產(chǎn)品為不合格，不應(yīng)復(fù)驗(yàn)。8標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存按照QB/T1804中的規(guī)定執(zhí)行。4QB/T4483—XXXX（規(guī)范性）木聚糖酶活力的測(cè)定A.1原理木聚糖酶能將木聚糖降解成寡糖和單糖。還原性寡糖和單糖在沸水浴條件下可以與3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。反應(yīng)液540nm吸光度與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，而還原糖的生成量又與反應(yīng)液中木聚糖酶的活力成正比。A.2試劑與溶液警示：處理酸堿和配制DNS試劑時(shí)，應(yīng)在通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的房間進(jìn)行，戴上護(hù)目鏡和乳膠手套，一旦皮膚或眼睛接觸了上述物質(zhì)，及時(shí)用大量的水沖洗。除特殊說(shuō)明外，所用的試劑均為分析純，水均為符合GB/T6682中規(guī)定的二級(jí)水。A.2.1氫氧化鈉溶液(4.0mg/mL)稱取4.0g氫氧化鈉，加水溶解并定容至1000mL。A.2.2鹽酸溶液（1.0mol/L）移取8.6mL濃鹽酸于盛有90mL蒸餾水的100mL容量瓶中，溶解后蒸餾水定容并搖勻。A.2.3磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液(pH6.0)稱取7.75g一水檸檬酸和17.93g無(wú)水磷酸氫二鈉，加水溶解后，定容至2000mL。氫氧化鈉溶液（A.2.1）或鹽酸溶液(A.2.2)調(diào)節(jié)pH至6.0±0.05。A.2.4乙酸鈉-乙酸緩沖溶液(pH4.8)稱取8.02g三水乙酸鈉，加入冰乙酸3.5mL，加水溶解后，定容至1000mL。氫氧化鈉溶液（A.2.1）或鹽酸溶液(A.2.2)調(diào)節(jié)pH至4.8±0.05。A.2.5甘氨酸-氫氧化鈉緩沖溶液（pH9.0）稱取0.352g氫氧化鈉和3.75g甘氨酸，蒸餾水溶解后定容至1000mL。氫氧化鈉溶液（A.2.1）或鹽酸溶液(A.2.2)調(diào)節(jié)pH至9.0±0.05。A.2.6木糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（10.0mg/mL）稱取木糖1.00g（精確至0.0001g相應(yīng)緩沖液（A.2.3～A.2.5）溶解并定容至100mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。A.2.7木糖系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別吸取木糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（A.2.6）1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL和7.00mL，加入相應(yīng)緩沖溶液（A.2.3～A.2.5）定容至100mL，配制成濃度為0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、0.40mg/mL、0.50mg/mL、0.60mg/mL和0.70mg/mL的木糖系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。A.2.8木聚糖底物：櫸木或甘蔗渣等來(lái)源，純度≥85%。A.2.9木聚糖底物溶液（10.0mg/mL）稱取0.50g木聚糖底物，加入40mL氫氧化鈉溶液（A.2.1），磁力攪拌，同時(shí)80℃水浴加熱。木聚糖完全溶解后停止加熱，繼續(xù)攪拌30min至室溫。氫氧化鈉溶液（A.2.1）或鹽酸溶液（A.2.2）調(diào)節(jié)pH至4.8、6.0或9.0，然后再用相應(yīng)緩沖溶液定容至50mL。使用前適當(dāng)搖勻。4℃避光保存，有效期不同來(lái)源或批次的木聚糖底物對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響。5QB/T4483—XXXXA.2.10氫氧化鈉溶液(200.0mg/mL)稱取20.0g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL。A.2.11DNS試劑稱取3.15g3,5-二硝基水楊酸，加入500mL蒸餾水，攪拌3s～5s，45℃水浴。然后緩慢加入100mL氫氧化鈉溶液（A.2.9），同時(shí)不斷攪拌，直到全部溶解（注意：在加入氫氧化鈉溶液過程中，溶液溫度不超過48℃)。再緩慢加入91.0g四水酒石酸鉀鈉、2.50g苯酚和2.50g無(wú)水亞硫酸鈉。期間不斷攪拌，直到完全溶解。停止加熱并冷卻至室溫后，蒸餾水定容至1000mL。用燒結(jié)玻璃過濾器過濾。取濾液，儲(chǔ)存在棕色瓶中，避光保存。室溫下存放7天后使用，有效期為180天。注：也可使用商品化的DNS試劑。A.3儀器與設(shè)備A.3.1分析天平：感量分別為0.01g和0.1mg。A.3.2pH計(jì)：精確至0.01。A.3.3磁力攪拌器：附加熱功能。A.3.4振蕩器。A.3.5燒結(jié)玻璃過濾器：孔徑為0.45mm。A.3.6恒溫水浴鍋：精度為0.1℃。A.3.7秒表：最大允許誤差不超過±5s/h。A.3.8分光光度計(jì)。A.3.9移液器：100μL和1000μL。A.4繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線A.4.1空白：吸取1.0mL緩沖液，加入2.5mLDNS試劑（A.2.11沸水浴加熱5min。自來(lái)水冷卻至室溫，用水定容至12.5mL。A.4.2分別吸取1.00mL木糖系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（A.2.7）至刻度試管中，加入2.5mLDNS試劑（A.2.11）。沸水浴加熱5min。然后用自來(lái)水冷卻到室溫，蒸餾水定容至12.5mL。以空白為對(duì)照，在540nm處測(cè)定吸光值。A.4.3以木糖濃度為Y軸、吸光值為X軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每次新配制DNS試劑均應(yīng)要重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲A.5樣品溶液的制備A.5.1固體樣品稱取適量樣品（精確至0.0001g）于100mL容量瓶中，加入80mL相應(yīng)緩沖溶液（A.2.3～A.2.5）磁力攪拌20min～30min，再用相應(yīng)緩沖溶液（A.2.3～A.2.5）并定容。取適量樣品溶液用相應(yīng)緩沖液（A.2.3~A.2.5）進(jìn)行稀釋，稀釋后酶活力應(yīng)控制在0.05u/mL～0.09u/mL。A.5.2液體樣品量取適量樣品于100mL容量瓶中，加入相應(yīng)緩沖溶液（A.2.3～A.2.5）溶解并定容。取適量樣品溶液用相應(yīng)緩沖液進(jìn)行稀釋，稀釋后酶活力應(yīng)控制在0.05u/mL～0.09u/mL。A.6測(cè)定步驟準(zhǔn)備：吸取10mL木聚糖底物溶液（A.2.9），50℃水浴平衡5min。），6QB/T4483—XXXX加入2.5mLDNS試劑（A.2.11），混勻后再加入1.0m